Explorando el nivel de expresión de la proteína de cadherina 6 (CDH6) en muestras de tumor óseo maligno primario y su aplicación clínica en la evaluación del pronóstico

1. Evalúe la viabilidad de usar inmunohistoquímica para detectar el nivel de expresión de CDH6 en los diapositivos histológicos de los pacientes con osteosarcoma y el sarcoma de Ewing como un marcador biológico para el monitoreo pronóstico de la visita inicial del paciente fue diagnosticado clínicamente como osteosarcoma de alto grado o Sarcoma de Ewing. El formulario de consentimiento informado para el monitoreo de muestras se firmó primero. Durante la biopsia de punción, se tomó el tejido fresco (componente de tejido blando, no tejido óseo) con un volumen de aproximadamente 1 cm3, se fijó con solución de formalina y rodajas de tejido (esclavitud blanca) con un grosor de 5 micras, se unieron, se unieron y se hornearon. La tinción de inmunohistoquímica se usó para el análisis de expresión de CDH6 (XP) ® cadherina-6 (D3T3i) MAB CAT:#48111, Tecnología deignalización de celdas ）。

2. Proceso de tratamiento y seguimiento El régimen de quimioterapia neoadyuvante rutinaria para el osteosarcoma en nuestro centro incluye el uso secuencial de cisplatino, doxorrubicina de dosis alta, metotrexato e ifosfamida, mientras que el régimen VDC-II se usa para sarcoma de owing (ver Figura 3.1.1a,,, B para más detalles). Debido a la heterogeneidad significativa de las células de osteosarcoma, las subpoblaciones de las células afectadas por cada fármaco no son las mismas, y también hay diferencias en las subpoblaciones de células necróticas y lisadas después de la medicación. El nivel de expresión de CDH6 en cortes de tejido del paciente cambiará dinámicamente con la sensibilidad de la quimioterapia. Al realizar evaluaciones clínicas, si se les da la oportunidad, intentaremos comparar los cambios en los niveles de CDH6 en las secciones de tejido para evaluar su valor para el monitoreo de eficacia.

   Los pacientes generalmente se someten a tratamiento quirúrgico después de la quimioterapia neoadyuvante, y la carga tumoral disminuye bruscamente después de la cirugía. La muestra tumoral bruta obtenida durante la cirugía debe conservarse con muestras de tejido tumoral calificadas (al menos 1 cm3 en volumen). Durante el proceso de tratamiento tumoral, si hay una oportunidad para la cirugía, la biopsia o la resección del tejido tumoral se deben realizar nuevamente para monitorear los cambios en los niveles de expresión de CDH6. La evaluación clínica del tratamiento tumoral debe realizarse cada dos meses hasta el final del estudio o la muerte del paciente.

   Todo el estudio incluye un período de detección, recolección de sangre y período de retención de muestras, y período de seguimiento. Todos los participantes en el estudio deben cumplir con todos los criterios de inclusión y exclusión.

   Durante el período de detección, los posibles participantes se someterán a una evaluación de elegibilidad para el estudio después de firmar el formulario de consentimiento informado. Los sujetos deben someterse a una evaluación radiográfica de la enfermedad dentro de los 14 días previos a la quimioterapia neoadyuvante, incluida la TC mejorada o la resonancia magnética del sitio tumoral primario, la TC de exploración lisa del pecho, la imagen ósea de cuerpo entero y la PET/CT de cuerpo entero.

   Los sujetos recibirán quimioterapia y tratamiento quirúrgico de acuerdo con la rutina de diagnóstico y tratamiento, y en los nodos de tiempo diseñados en el experimento, antes y después de la quimioterapia y la cirugía de rutina de los sujetos, el Departamento de Patología tomará 3 diapositivas blancas, cada uno midió 4 micras, frotan y hornea gel, y realizará un titulación inmunohistoquímica.

   Durante el período de seguimiento, los sujetos han completado la quimioterapia y el tratamiento quirúrgico, pero aún recibirán seguimiento sobre su estado de supervivencia y estado oncológico, y todo el seguimiento será un tratamiento de rutina en nuestro centro.

3. Usaremos muestras de tejido tumoral FFPE para tinción inmunohistoquímica para analizar la expresión de CDH6, β - catenina y CDH17 en el tejido tumoral.

Tinción inmunohistoquímica:

Anticuerpo primario: anticuerpo monoclonal de conejo CDH6 (D3T3I); β - anticuerpo monoclonal de conejo de catenina (D10A8); Anticuerpo monoclonal de ratón CDH17 (anticuerpo interno de Xianxiang); Sistema de detección de anticuerpos secundarios: kit de detección de refina de polímero de enlace ； Diluyente de anticuerpos: CST, 8112L,#38 ； Fotos positivas: secciones FFPE de líneas celulares de expresión baja, media y alta; El programa de tinción utiliza el método establecido de Xianxiang.

Interpretación patológica:

Use el puntaje H para el análisis semi cuantitativo. La puntuación H es la suma del porcentaje de tinción celular multiplicada por los valores de intensidad correspondientes (0 = negativo, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), que varía de 0 a 300.

La interpretación de los valores de intensidad de tinción de células tumorales es la siguiente:

Alta expresión (3+): se observó tinción de membrana celular fuerte y/o tinción citoplasmática bajo un aumento X4; Expresión moderada (2+): la tinción de la membrana celular se observó con aumento de X10 o X20; Baja expresión (1+): se observó tinción de membrana celular débil y/o tinción citoplasmática a aumento de X40; Negativo (0): no se observó tinción de membrana celular y/o tinción citoplasmática en las células tumorales.