肥満手術後のタンパク質要件 (PROXY)

研究の目的は、最小浸潤インジケーターアミノ酸酸化（IAAO）法を使用して、以前にRoux-en-y-Bypass（RYGB）手術を受けた成人男性の維持栄養タンパク質要件を決定することです。 この研究仮説では、これまでの肥満手術のない若年成人と比較して、この集団では食事タンパク質の要件が上昇するというものです。 帰無仮説では、以前のRYGB手術を受けた成人と以前の手術のない成人との間に食事タンパク質の要件に違いはないと述べています。 タンパク質の要件は、脂肪質量の増加の増加を説明するために、脂肪質量（FFM）と比較して表されます。

この研究の主なエンドポイントは、推定平均タンパク質要件（G/kg FFM/D）と95％信頼区間の上限です。

この研究は、IAAO法を使用してタンパク質要件を決定する栄養実験研究で構成されています。 インジケータアミノ酸酸化は、2回の適応日の後の別の研究日にそれぞれ7つの増分タンパク質摂取レベルで測定されます。 タンパク質摂取要件は、タンパク質摂取量のさらなる増加にもかかわらず、指標アミノ酸酸化がさらに低下することを停止するタンパク質摂取レベルとして計算されます。 これはブレークポイントと呼ばれます。 タンパク質摂取レベルのシーケンスは、各研究参加者に対してランダム化されます。 タンパク質の要件は、個人ごとではなく、研究集団全体について、各タンパク質摂取レベルで十分な酸化研究が含まれている場合に計算されます。 これは、同じ個人が7つの時点ですべての酸化研究を完了する必要がないことを意味します。

この研究は、最初のスクリーニングと計画訪問、および2〜7の代謝試験訪問で構成されます。 各参加者は、少なくとも2つ、できればそれ以上、7つのタンパク質摂取レベルすべてを完了できます。

以前にUZ Leuven肥満クリニックリポジトリに含まれることに同意した患者（ClinicalTrials.gov 識別子NCT04614961; S-62590）は、研究基準に従って事前に画面化されます。 その後、適格なままの患者に連絡し、インフォームドコンセントフォームを使用して研究に関する情報を受け取ります。 この研究への参加への招待は、ソーシャルネットワークプラットフォームを使用して、肥満と肥満手術の患者支援グループを通じて配布されます（補遺Aを参照）。 参加に関心のある患者は、研究コーディネーターに連絡するよう招待されます。 スクリーニング前の評価を完了し、資格を維持する患者は、スクリーニング訪問に招待されます。

参加する資格を維持し続ける患者は、研究手順に関するさらなる情報を受け取り、最初の3日間の代謝実験に必要な指示と食料品と調理器具が提供されます。 患者には、肥満手術後の患者に適したマルチビタミンミネラルサプリメントも、研究期間中に消費します。 習慣的な食事摂取量は、3日間の食品日記を使用して自己報告されます。 すべての包含基準を満たしていない患者の場合、新たに特定された血糖、血圧、異常な肝機能、または腎機能の低下は、患者とその一般開業医に報告されます。

調査日は7回繰り返され、それぞれ異なる摂取レベルで繰り返されます。 被験者は、各IAAO実験中に7つのタンパク質摂取レベルのいずれかをランダムに受け取ります（図1.）。 REDCAPとRで作成された割り当てテーブルを使用して、各訪問中に異なるタンパク質レベルを割り当てる単純なランダム化が実施されます。 割り当ては参加者から隠されます。 1人の調査員は、特定の研究日の特定のタンパク質摂取レベルに基づいて、研究ダイエットを計算して物理的に準備する必要があるため、割り当てをぼんやりとしていません。 研究の結果は客観的な生化学分析によって測定される代謝プロセスであるため、これはバイアスを挿入しません。

適応日のプロトコル患者に連絡し、実験的な訪問が予定されています。 研究プロトコルは、確立されたIAAOメソッド（26）に基づいています。 IAAO検査日の2日前に、患者は1.5 g/kgの理想的な体重で自由なエネルギー摂取量とタンパク質摂取量を提供するメンテナンスダイエットを消費します。 この量のタンパク質は、肥満手術後の個人の現在の上限のタンパク質要件を満たしており（16）、それによって適応期間中の異化状態を避けるために。

メンテナンスダイエットは、必要に応じて追加のタンパク質サプリメントを追加する参加者の習慣的な食物摂取となります。 参加者は、必要に応じて1杯のコーヒーまたは紅茶と追加の水を消費することが許可されます。 タンパク質とエネルギーの摂取量を測定するために、2日間の食物摂取が記録されます。

研究日の代謝勉強日、患者はUZ LeuvenのAcronim Study Unitを訪問します。 患者は、12時間の速い一晩後に研究訪問のために到着するように指示されます。 到着すると、上記のように体重と体組成が測定されます。 患者は8回の1時間ごとの等産牛の食事を受け取り、それぞれが毎日のエネルギー要件の1/12を提供するため、1日の総摂取量の67％を提供します。

7つのテストタンパク質摂取レベルは精巣になります。 アミノ酸酸化のブレークポイントを特定するために、測定されたタンパク質要件を下回る少なくとも2つの摂取レベルがあることが重要です。 したがって、健康な男性と女性の要件を下回る2つの摂取量を含む吸気レベルの範囲を選択しました。1つは健康な要件に合わせられ、4つはより高いレベルで、最終的な2つの吸気レベルの前にブレークポイントが発生することを予想しています。

食事の残りは、REE X 1.5の毎日のエネルギー要件を満たすために、40％の脂肪と40％の炭水化物として提供されます。 タンパク質は、卵タンパク質と同様のアミノ酸プロファイルを持つ結晶アミノ酸混合物として提供されます。 食事の残りは、タンパク質を含まない粉末、香料、オイル、およびタンパク質を含まないクッキーで構成されます。

5回目の食事から、トレーサープロトコルが開始されます。 0.176 mg/kg NAH13CO3と1.86 mg/kg 1-13Cフェニルアラニンのプライマー投与量が5回目の食事で提供されます。 次の3回の食事では、1.2 mg/kg 1-13Cフェニルアラニンが追加されます。

フェニルアラニントレーサーは、30.5 mg/kg/日の場合、総食事フェニルアラニン摂取量の一部を形成します。 アミノ酸のRDAは、IAAO研究で以前に決定されたように、タンパク質合成に必要なアミノ酸の量です。 同様に、総チロシン摂取量は、タンパク質沈着のためのフェニルアラニンのチロシンへの変換を最小限に抑えるために、要件をかなり超える40 mg/kg/kg/日になります。 両方の安定した同位体は、ケンブリッジ同位体研究所（米国マサチューセッツ州ウォーバーン）から購入されます。

呼気と尿のサンプルは、それぞれフェニルアラニン酸化とフェニルアラニンフラックスを測定するために収集されます。 3 x12mlの呼吸サンプルは、トレーサープロトコルを開始する前に、2つの時点で3つのタイムポイントと15mlの尿サンプルで収集されます。 トレーサープロトコルの開始から2.5時間から実験の終了まで（8時間）。 呼吸サンプルは、6回（毎回12ml x 3）収集​​され、尿は2回（毎回15ml）に収集されます。 呼吸サンプルは室温で保管され、尿サンプルは凍結され、-20℃で保存されます。 13 CO2の有効期限が切れた空気と尿13Cフェニルアラニン濃縮は、ガスクロマトグラフィマス分析（GC-MS）を使用して測定されます。

同位体の定常状態中の全身フェニルアラニンフラックスは、Matthews et al。のモデルに従って計算されます。 IAAO研究で以前に説明されたように。 フェニルアラニンフラックスは、尿中の13c-フェニルアラニンとして測定された摂取された標識フェニルアラニンの希釈として測定されます。 期限切れの空気（F13CO2）における13CO2の外観速度は、摂取されたフェニルアラニンの酸化を表しています。 F13CO2は、Matthews et al。のモデルに従って計算され、0.82の係数を使用して重炭酸塩プールに保持されている二酸化炭素を説明します（32）。