减肥手术后的蛋白质需求 (PROXY)

该研究的目标是使用微创指标氨基酸氧化（IAAO）方法来确定以前接受过Roux-en-Y-Bypass（RYGB）手术的成年男性的维持饮食蛋白质需求。 该研究假设是，与没有先前的减肥手术的年轻人相比，该人群的饮食蛋白质需求将升高。 原假设指出，先前有RYGB手术的成年人与没有先前手术的成年人之间的饮食蛋白质需求没有差异。 蛋白质需求将相对于无脂肪质量（FFM）表示，以说明瘦肉质量与肥胖相关的增加。

该研究的主要终点是估计的平均蛋白质需求（g/kg ffm/d）和95％置信区间的上限。

该研究包括使用IAAO方法来确定蛋白质需求的营养实验研究。 指示剂氨基酸氧化以七个增量蛋白摄入水平测量，每个蛋白质摄入水平，每次适应几天后的一个单独学习。 蛋白质摄入的需求计算为蛋白质摄入水平，尽管蛋白质摄入量进一步增加，但指标氨基酸氧化仍无法进一步下降。 这称为断点。 每个研究参与者的蛋白质摄入水平序列都是随机的。 计算蛋白质的需求不是根据个人的，而是在整个研究人群中，每种蛋白质摄入水平都包括足够的氧化研究。 这意味着同一个人不必在七个时间点完成所有氧化研究。

该研究将包括一次初步筛查和计划访问，以及2至7次代谢试验。 每个参与者至少可以完成两个，最好更多，最多可以完成所有7种蛋白质摄入水平。

以前同意被包括在UZ Leuven肥胖诊所存储库中的患者（clinicaltrials.gov 标识符NCT04614961; S-62590）将根据研究标准预先筛选。 此后，将联系符合条件的患者，并将使用知情同意书接收有关该研究的信息。 参与研究的邀请也将通过其社交网络平台通过肥胖和减肥手术的患者支持小组分发（请参阅附录A）。 有兴趣参与的患者将邀请与研究协调员联系。 完成筛查预评估并保持符合条件的患者将邀请进行筛查。

仍然有资格参加研究的患者将获得有关研究程序的更多信息，并将提供前3天代谢实验所需的说明，食品和器皿。 还将为患者提供适用于减肥手术后患者的多种维生素矿物质补充剂，可在研究期间食用。 习惯性饮食摄入量将使用3天的食物日记自我报告。 对于不符合所有纳入标准的患者，任何新发现的血糖，血压，异常肝功能或肾功能降低的患者都将报告给患者及其全科医生。

学习日将重复7次，每个次数在不同的进气水平上。 在每个IAAO实验中，受试者将随机接收七个蛋白质摄入水平之一（图1.）。 将使用在R中创建的REDCAP和分配表进行简单的随机化，以在每个访问期间分配不同的蛋白质水平。 分配将被参与者隐藏。 一位研究者将根据给定学习日的特定蛋白质摄入水平来计算和物理准备研究饮食，因为他需要计算和物理准备研究饮食。 由于研究结果是通过客观生化分析测量的代谢过程，因此这不会插入偏见。

将联系适应日方案患者，并计划进行实验访问。 研究方案基于既定的IAAO方法（26）。 在IAAO测试当天的两天的适应日，患者将食用维持饮食，可随意能量摄入量和蛋白质摄入为1.5 g/kg理想的体重。 这种蛋白质符合减肥手术后对个体的蛋白质需求的当前限制（16），从而避免在适应期间避免分解代谢状态。

维持饮食将是参与者的习惯食品摄入量，并提供其他额外的蛋白质补充剂。 参与者将被允许根据需要食用一杯咖啡或茶和额外的水。 在两天内，将记录食物摄入量以测量蛋白质和能量摄入量。

在研究日期的代谢研究日，患者将参观UZ Leuven的Acronim研究单位。 一夜之12小时后，将指示患者到达学习访问。 到达时，将按照上述测量体重和身体成分。 患者将获得八个小时的等重餐，每餐每日提供1/12，因此每天摄入量的67％。

7个测试蛋白摄入水平将是睾丸。 重要的是，至少有2个摄入水平以下和高于测得的蛋白质需求以识别氨基酸氧化的断点。 因此，我们选择了一系列摄入水平，其中包括健康男性和女性的两个摄入量，其中一个与健康的需求保持一致，四个在较高水平上，预计断点将在最后两个摄入水平之前发生。

其余的饮食将以40％的脂肪和40％的碳水化合物提供，以满足REE X 1.5的每日能量需求。 蛋白质作为晶体氨基酸混合物提供，具有与卵子蛋白相似的氨基酸剖面。 其余的饮食将由无蛋白质粉末，调味料，油和无蛋白质饼干组成。

从第五顿饭开始，示踪剂协议将开始。 第五餐将提供0.176 mg/kg NAH13CO3和1.86 mg/kg 1-13c苯丙氨酸的底漆剂量。 在接下来的三餐中，将增加1.2 mg/kg 1-13c苯丙氨酸。

如果30.5 mg/kg/day，苯丙氨酸示踪剂将成为总饮食苯丙氨酸摄入的一部分，约为建议的日常津贴（​​RDA，）的三倍，以确保足够的蛋白质合成供应。 氨基酸的RDA是蛋白质合成所需的氨基酸的量，如IAAO研究以前确定。 同样的总酪氨酸摄入量将为40 mg/kg/天，超出了需求，以最大程度地减少苯丙氨酸向酪氨酸的转化以进行蛋白质沉积。 这两个稳定的同位素将购自剑桥同位素实验室（美国马萨诸塞州沃本）。

将收集呼吸和尿液样品，分别测量苯丙氨酸氧化和苯丙氨酸通量。 在开始示踪剂方案之前，将以三个时间点和15ml尿液样本在三个时间点和15ml尿液样本中收集3个X12ML呼吸样品。 从示踪剂协议开始后的2.5小时到实验结束（第8小时）。 呼吸样品将收集6次（每次12ml x 3），尿液两次（每次15毫升）。 呼吸样品将在室温下存储，尿液样品将被冷冻并存储在-20°C下。 通过使用气相色谱 - 质谱法（GC-MS），将测量13CO2富集过期的空气和尿液13C苯丙氨酸富集。

同位素稳态期间全身苯丙氨酸通量将根据Matthews等人的模型计算。如先前用于IAAO研究所述。 苯丙氨酸通量被测量为摄入的标记苯丙氨酸的稀释，在尿液中测量为13c-苯丙氨酸。 13CO2在过期空气中的外观速率（F13CO2）表示摄入的苯丙氨酸的氧化。 F13CO2是根据Matthews等人的模型计算的，使用0.82的系数来考虑保留在碳酸氢盐池中的二氧化碳（32）。