ドライアイの目の表面免疫細胞に対する12週間の0.1％局所シクロスポリンAの効果

免疫系は、ドライアイ疾患（DED）の病因において極めて重要な役割を果たします。 いくつかの涙サイトカイン、ケモカイン、HLA -DR分子の発現、抗原提示細胞の活性化 - 樹状細胞（DC）、およびリンパ球のレベルの増加はすべて、DED病因において中心的な役割を果たします。 DED患者の眼表面におけるCD4+およびCD8+ T細胞の発現の増加は、DED慢性における適応免疫の潜在的な役割を示唆しています。 眼表面における抗原提示細胞の存在と、DED患者の裂傷におけるMHC II、IL-2、IL-2、IL-6およびIFN-γおよびその他の共刺激分子のアップレギュレーションは、局所適応免疫応答の活性化の可能性を示しています。

結膜は、眼の表面疾患における免疫学的および組織化学分析の主要な部位として機能します。 研究者は、印象細胞学、結膜生検、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応、免疫細胞化学、光学顕微鏡などの眼表面免疫学を研究するために、さまざまな技術を採用しています。 フローサイトメトリーは、さまざまな免疫細胞マーカーの細胞外発現の免疫標識を介して細胞の表現型分析を可能にする強力な手法です。 T細胞（CD3+、CD4+、およびB細胞、天然キラー細胞、および単球（CD14+細胞）を含むHLA-DRなどの活性化マーカーの増加した発現が、接続詞印象サイトロジーサンプルのフローサイトメトリーを使用してDEDで観察されます。

歴史的に、ヒト眼表面免疫細胞を研究するには、侵襲的な技術が必要でした。 in vivo共焦点顕微鏡（IVCM）の出現により、眼表面上皮免疫細胞（EIC）および角膜神経のリアルタイムで非侵襲的視覚化が可能になりました。 過去20年間、研究者はIVCMを使用して、さまざまな眼表面障害の病理学的変化を調べてきました。 いくつかのIVCM研究から、角膜EICが密度の増加やあらゆる形態のDEDの形態の変化などの変化を受けることが明らかです。 従来の静的IVCMは、角膜EICの単一の時点でセクション画像をキャプチャし、それらの分析はその密度と形態に限定されます。 IVCMのin vivoの性質は直接免疫細胞表現型を防ぎますが、観察された細胞は、その形態学的特性に基づいてDCSであると主に考えられています。 したがって、著者はEICという用語を使用して、静的IVCMを使用して定量化された免疫細胞密度（EIC密度）を定義しました。 免疫細胞型の識別を制限するこの方法とは異なり、最近開拓された機能IVCM（FUN-IVCM）と呼ばれる新しい手法により、形態力学を観察することにより角膜の免疫細胞型の識別が可能になります。 この方法では、4〜5分間隔で30〜40分間の期間にわたって連続したシーケンスとボリュームスキャン画像をキャプチャすることが含まれます。 その後、画像は時間が経ち、各免疫細胞の動的挙動を識別します。 動的な挙動と形態に基づいて、細胞は上皮T細胞（非常に運動性、体の大きさ）または樹状細胞（DC、運動性が低く、樹状突起を使用した体重が大きい）のいずれかに分化できます。 前角膜間質マクロファージも識別できます。 時間が経過した画像により、瞬時の速度や変位速度など、追加の細胞運動パラメーターを調べることができます。

DEDの第一選択治療は人工涙です。 しかし、疾患の慢性的な性質と再発性の急性増悪抗炎症療法のために、主に実施されています。 その結果、現在の治療アプローチの多くは、DEDの悪循環を破ることを目指して、さまざまな炎症経路を対象としています。 局所コルチコステロイドと免疫抑制剤の両方が、DEDの炎症を効果的に減少させます。 局所コルチコステロイドは、眼表面の炎症の急性増悪を制御するためにDEDで使用されますが、その長期使用は、それらの病原性眼の副作用によって制限されます。 これとは対照的に、シクロスポリンA（CSA）などの免疫抑制剤が潜在的な抗炎症効果を持ち、局所的な副作用を最小限に抑えます。 慢性的なDEDでのCSAの使用は、眼表面染色、発赤、炎症マーカーを大幅に減らし、ドライアイの症状を改善することができます。 簡単に言えば、CSAはホスファターゼカルシニューリンを阻害することによりT細胞増殖を減衰させます。 CSAは、抗原提示およびDC-T細胞相互作用中に、免疫応答のさまざまなステップで機能します。 自然免疫細胞は現在、CSAの潜在的に重要な標的と見なされており、樹状細胞、マクロファージ、および好中球の同時ターゲティングを反映する可能性があります。 眼の表面では、予備的な証拠は、CSAがHLA-DR、CD11C、特定のアポトーシスマーカー、結膜Tリンパ球などの活性化マーカーがCSA処理DED DED患者の臨床改善に大幅に削減できることを示唆しています。

少数の臨床試験では、炎症の軽減とDEDの症状の改善におけるCSAの有効性が証明されていますが、眼表面免疫細胞に対するCSAの直接的な効果は、静的およびFUN-IVCMを使用して詳細に研究されていません。 自然免疫細胞と適応免疫細胞の両方に対するCSAの効果を考えると、著者らは、0.1％CSAの使用が、その車両と比較してDEDの徴候と症状の改善とともに、眼表面免疫応答に抑制効果があると仮定しています。 このペーパーでは、無作為化臨床試験プロトコルを強調して、DEDの眼の生来および適応免疫系に対するCSAの効果を包括的に研究しています。 この研究では、リンパ球マーカー（CD45、CD3、CD4）および関連するサイトカイン（TH1経路サイトカイン）の分析を通じて、DCS（CD11C+ DCS、HLA-DR）、Tヘルパー細胞集団（CD4+ T細胞）へのCSAの影響を調査します。

1.2。 研究の目的と仮説目的の目的1：イメージングを使用した眼の表面の自然および適応免疫細胞に対する12週間の局所局所療法の効果を調査および比較すること - 静的IVCMおよびFUN-IVCM（免疫細胞密度、形態および形態力学的行動）、免疫細胞分析（免疫細胞のテクニック測定（細胞質）を使用した免疫細胞表現型） IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-17、IL-23、IFN-γの涙濃度を評価するビードアッセイ仮説：CSAは、眼の生来および適応免疫細胞密度、形態、および涙皮皮質に抑制効果があります。

AIM 2：DED仮説におけるDED兆候、症状、免疫細胞の特性と裂傷サイトカインとの関連を評価する：免疫細胞の特性、TEATサイトカイン、DED兆候の直接的な関係、症状は存在します。

AIM 3：免疫細胞の変化と臨床改善仮説との間の時間的関係を調査するには、CSA治療後のDEDの徴候と症状の臨床的改善に先行する免疫細胞特性（密度とダイナミクス）および炎症マーカーの変化。