Effekten af ​​0,1% topisk ciclosporin A i 12-uger på øjenoverfladen Immunceller i tørre øjne

Immunsystemet spiller en central rolle i tørre øjensygdom (DED) patogenese. Et forøget niveau af adskillige tårecytokiner, kemokiner, ekspression af HLA -DR -molekyler og aktivering af antigenpræsenterende celler - dendritiske celler (DC'er) og lymfocytter spiller alle en central rolle i DED -patogenese. De øgede udtryk for CD4+ og CD8+ T -celler i den okulære overflade af DED -patienter antyder en potentiel rolle af adaptiv immunitet i DED -kronicitet. Tilstedeværelsen af ​​antigenpræsenterende celler i den okulære overflade og opregulering af MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 og IFN-y og andre co-stimulatoriske molekyler i tårerne hos DED-patienter indikerer en mulig aktivering af den lokale adaptive immunrespons.

Conjunctiva fungerer som et primært sted for immunologisk og histokemisk analyse i okulære overfladesygdomme. Forskere har anvendt forskellige teknikker til at studere okulær overfladeimmunologi, såsom indtrykcytologi, konjunktival biopsi og gennem realtids polymerasekædereaktion, immunocytokemi og lysmikroskopi. Flowcytometri er en kraftfuld teknik, der muliggør den fænotype analyse af celler gennem immunmærkning af ekstracellulære udtryk af forskellige immuncellemarkører. Et øgede udtryk for aktiveringsmarkører som HLA-DR og forskellige immuncellepopulationer, herunder T-celler (CD3+, CD4+og CD8+), B-celler, naturlige dræberceller og monocytter (CD14+celler) observeres i DED ved anvendelse af flowcytometri på konjunktivalindtrykcytologiprøver.

Historisk krævede det at studere humane okulære overfladeimmunceller invasive teknikker. Med fremkomsten af ​​in vivo-konfokal mikroskopi (IVCM) har har gjort det muligt for realtid, ikke-invasiv visualisering af okulære overfladeepitelimmunceller (EIC'er) og hornhindenerver. I løbet af de sidste 20 år har forskere brugt IVCM til at undersøge patologiske ændringer i forskellige okulære overfladeforstyrrelser. Det fremgår af flere IVCM -undersøgelser, at hornhinde EIC'er gennemgår ændringer, såsom stigning i densitet og ændringer i dens morfologi i alle former for DED. Konventionel statisk IVCM fanger sektionsbilleder på et enkelt tidspunkt på hornhinden EIC'erne, og deres analyse er begrænset til dens densitet og morfologi. Mens IVCM's in vivo -art forhindrer direkte immuncellephenotype, antages de observerede celler overvejende at være DC'er baseret på deres morfologiske egenskaber. Derfor har forfatterne brugt udtrykket EIC'er til at definere immunceller densitet (EIC-densitet) kvantificeret ved hjælp af statisk-IVCM. I modsætning til denne metode, der begrænser identifikationen af ​​immuncelletypen, muliggør en nyligt banebrydende, ny teknik kaldet funktionel IVCM (FUN-IVCM) identifikation af immuncelletyperne i hornhinden ved at observere deres morfodynamik. Denne metode involverer optagelse af på hinanden følgende sekvens- og volumenskanningsbilleder over en periode på 30-40 minutter med intervaller på 4-5 minutter. Billederne er derefter tidsfrit for at identificere dynamisk opførsel af hver immuncelle. Baseret på deres dynamiske opførsel og morfologi kan celler differentieres i enten epiteliale T -celler (meget bevægelige, mindre kropsstørrelse) eller dendritiske celler (DC'er, mindre bevægelige, større kropsstørrelse med dendritter). Anterior hornhindestromale makrofager kan også identificeres. Tidsbelastede billeder giver mulighed for undersøgelse af yderligere cellemotilitetsparametre, såsom øjeblikkelig hastighed og forskydningshastighed.

Den første linjebehandling for DED er kunstige tårer. Men på grund af den kroniske karakter af sygdommen og tilbagevendende akutte forværringer er antiinflammatoriske terapier stort set blevet implementeret. Derfor er mange af de nuværende terapeutiske tilgange målrettet mod forskellige inflammatoriske veje med det formål at bryde den onde cyklus af DED. Både aktuelle kortikosteroider og immunsuppressiva reducerer effektivt betændelse i DED. Topiske kortikosteroider bruges til at kontrollere akutte forværringer af betændelse i den okulære overflade, men deres længere sigt er begrænset af deres iatrogene okulære bivirkninger. For at kontrastere dette har immunsuppressive midler såsom ciclosporin A (CSA) potentiel antiinflammatorisk virkning med minimale lokale bivirkninger. Brugen af ​​CSA i kronisk DED kan reducere den okulære overfladefarvning, rødme, inflammatoriske markører og forbedrer tørre øjesymptomer. Kort sagt dæmper CSA -spredning af T -celleproliferation ved at hæmme phosphatase -calcineurin. CSA fungerer på forskellige trin i immunresponsen under antigenpræsentation og DC-T-celleinteraktion. Medfødte immunceller ses nu som potentielt vigtige mål for CSA og kan afspejle samtidig målretning af dendritiske celler, makrofager og neutrofiler. I den okulære overfladeforeløbige bevis tyder på, at CSA signifikant kan reducere aktiveringsmarkører, såsom HLA-DR, CD11C, visse apoptose-markører og konjunktival T-lymfocytter ledsagede den kliniske forbedring i CSA-behandlede DED-patienter.

Mens en håndfuld kliniske forsøg har beviset effektiviteten af ​​CSA til reduktion af inflammation og forbedring af symptomer på DED, er den direkte virkning af CSA på okulære overfladeimmunceller ikke blevet undersøgt detaljeret ved anvendelse af statisk og ved hjælp af FUN-IVCM. I betragtning af virkningen af ​​CSA på både medfødte og adaptive immunceller antager forfatterne, at brugen af ​​0,1% CSA vil have en hæmmende virkning på den okulære overfladeimmunrespons sammen med forbedring af tegn og symptomer på DED sammenlignet med dets køretøj. Denne artikel fremhæver den randomiserede kliniske forsøgsprotokol til omfattende at undersøge virkningen af ​​CSA på det okulære overfladefattige og adaptive immunsystem i DED. Undersøgelsen vil undersøge CSA's indflydelse på DCS (CD11C+ DCS, HLA-DR), T-hjælpercellepopulationer (CD4+ T-celler) gennem analyse af lymfocytmarkører (CD45, CD3, CD4) og deres tilknyttede cytokiner (Th1-sti-cytokiner), især IL-2, IFN-γ og IL-18, hvilket er et primært mål for CSA's mål for CSA'er), især IL-2, IFN-γ og IL-18, som er et primært mål for CSa's'sa'er Immunmodulerende handling.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex perleassay, der vurderer tårekoncentrationer af IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-y) Hypotese: CSA vil have en hæmmende virkning på den okulære overfladefattige og adaptiv immuncelledensitet, morfologi og tåre cytokiner i DED.

AIM 2: At vurdere sammenhængen mellem DED -tegn, symptomer og immuncelleegenskaber og tåre cytokiner i DED -hypotese: et direkte forhold mellem immuncelleegenskaber, pattercytokiner og DED -tegn, der findes symptomer.

Mål 3: At undersøge det tidsmæssige forhold mellem immuncelleændringer og klinisk forbedringshypotese: ændringer i immuncelleegenskaber (densitet og dynamik) og inflammatoriske markører forud for klinisk forbedring af tegn og symptomer på DED efter CSA -behandling.