O efeito de ciclosporina A tópica a 0,1% para 12 semanas nas células imunológicas da superfície ocular em olhos secos

O sistema imunológico desempenha um papel fundamental na patogênese da doença do olho seco (DED). Um nível aumentado de várias citocinas lacrimais, quimiocinas, expressão de moléculas de HLA -DR e ativação de células apresentadoras de antígenos - células dendríticas (DCs) e linfócitos desempenha um papel central na patogênese do DED. As expressões aumentadas de células T CD4+ e CD8+ na superfície ocular de pacientes com DED sugerem um papel potencial da imunidade adaptativa na cronicidade do DED. A presença de células apresentadoras de antígeno na superfície ocular e a regulação positiva de MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 e IFN-γ e outras moléculas co-estimuladoras nas lágrimas de pacientes com DED indica uma possível ativação da resposta imune adaptativa local.

A conjuntiva serve como um local primário para análise imunológica e histoquímica em doenças da superfície ocular. Os pesquisadores empregaram várias técnicas para estudar imunologia da superfície ocular, como citologia de impressão, biópsia conjuntival e através de reação em cadeia da polimerase em tempo real, imunocitoquímica e microscopia leve. A citometria de fluxo é uma técnica poderosa que permite a análise fenotípica das células através da imunolabeling de expressões extracelulares de vários marcadores de células imunes. Um aumento de expressões de marcadores de ativação como HLA-DR e várias populações de células imunes, incluindo células T (CD3+, CD4+e CD8+), células B, células assassinas naturais e monócitos (células CD14+) são observadas no uso de citometria de fluxo em amostras de citologia de impressão conjuntival.

Historicamente, o estudo das células imunes da superfície ocular humana exigia técnicas invasivas. Com o advento da microscopia confocal in vivo (IVCM), permitiu a visualização não invasiva em tempo real de células imunes epiteliais da superfície ocular (EICs) e nervos da córnea. Nos últimos 20 anos, os pesquisadores usaram o IVCM para examinar mudanças patológicas em vários distúrbios da superfície ocular. É evidente em vários estudos de IVCM que os EICs da córnea sofrem mudanças, como aumento da densidade e alterações em sua morfologia em todas as formas de DED. O IVCM estático convencional captura imagens da seção em um único ponto de tempo da EIC da córnea, e sua análise é limitada à sua densidade e morfologia. Enquanto a natureza in vivo do IVCM impede a fenotipagem celular direta, acredita -se predominantemente que as células observadas sejam DCs baseadas em suas características morfológicas. Portanto, os autores usaram o termo EICS para definir a densidade das células imunológicas (densidade EIC) quantificadas usando-IVCM estático. Ao contrário desse método, que limita a identificação do tipo de célula imune, uma nova técnica pioneira e pioneira chamada IVCM funcional (FURCM) permite a identificação dos tipos de células imunológicas na córnea observando sua morfodinâmica. Este método envolve a captura de imagens consecutivas de sequência e varredura de volume durante um período de 30 a 40 minutos, com intervalos de 4-5 minutos. As imagens são então com tempo para identificar o comportamento dinâmico de cada célula imunológica. Com base em seu comportamento dinâmico e morfologia, as células podem ser diferenciadas em células T epiteliais (tamanho do corpo altamente móvel e menor) ou células dendríticas (DCs, menos móvel e maior tamanho corporal com dendritos). Os macrófagos estromais da córnea anterior também podem ser identificados. As imagens lapidadas com o tempo permitem o exame de parâmetros adicionais de motilidade celular, como velocidade instantânea e velocidade de deslocamento.

O tratamento de primeira linha para Ded são as lágrimas artificiais. Mas, devido à natureza crônica da doença e às exacerbações agudas recorrentes, as terapias anti-inflamatórias foram amplamente implementadas. Consequentemente, muitas das abordagens terapêuticas atuais têm como alvo várias vias inflamatórias, com o objetivo de quebrar o ciclo vicioso do DED. Tanto os corticosteróides tópicos quanto os imunossupressores reduzem efetivamente a inflamação no DED. Os corticosteróides tópicos são usados ​​no Ded para controlar exacerbações agudas da inflamação da superfície ocular, mas seu uso a longo prazo é limitado por seus efeitos colaterais oculares iatrogênicos. Para contrastar isso, agentes imunossupressores como a ciclosporina A (CSA) têm potencial efeito anti-inflamatório, com efeitos colaterais locais mínimos. O uso de CSA no DED crônico pode reduzir significativamente a coloração da superfície ocular, a vermelhidão, os marcadores inflamatórios e melhora os sintomas do olho seco. Em resumo, a CSA amortece a proliferação de células T inibindo a calcineurina da fosfatase. As funções de CSA em diferentes etapas da resposta imune, durante a apresentação do antígeno e a interação da célula DC-T. As células imunes inatas agora são vistas como alvos potencialmente importantes da CSA e podem refletir o direcionamento simultâneo de células dendríticas, macrófagos e neutrófilos. Na superfície ocular, evidências preliminares sugerem que a CSA pode reduzir significativamente os marcadores de ativação, como HLA-DR, CD11c, certos marcadores de apoptose e linfócitos T conjuntivais acompanharam a melhora clínica em pacientes com DED tratados com CSA.

Embora um punhado de ensaios clínicos tenha evidenciado a eficácia da CSA na redução da inflamação e na melhoria dos sintomas do DED, o efeito direto do CSA nas células imunes da superfície ocular não foi estudado em detalhes usando estático e usando FURCM. Dado o efeito da CSA nas células imunes inatas e adaptativas, os autores hipóteses de que o uso de CSA a 0,1% terá um efeito inibitório na resposta imune da superfície ocular, juntamente com a melhoria dos sinais e sintomas de DED em comparação com seu veículo. Este artigo destaca o protocolo randomizado de ensaios clínicos para estudar de maneira abrangente o efeito da CSA no sistema imunológico inato e adaptativo da superfície ocular em DED. The study will investigate CsA's impact on DCs (CD11c+ DCs, HLA-DR), T helper cell populations (CD4+ T cells) through analysis of lymphocyte markers (CD45, CD3, CD4) and their associated cytokines (Th1 pathway cytokines), particularly IL-2, IFN- γ and IL-17 which is a primary target of CsA's immunomodulatory action.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex Ensaio de contas Avaliando concentrações de lacrimogêneo de IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ) Hipótese: A CSA terá um efeito inibitório na superfície ocular inata e densidade celular imunológica adaptativa, morfologia e citocinas lacrimais.

Objetivo 2: Avaliar a associação entre sinais DED, sintomas e características de células imunes e citocinas lacrimais na hipótese do DE: uma relação direta entre características das células imunes, citocinas de tetas e sinais dedicados, existem sintomas.

Objetivo 3: Investigar a relação temporal entre mudanças de células imunes e hipótese de melhora clínica: alterações nas características das células imunológicas (densidade e dinâmica) e marcadores inflamatórios precedem a melhora clínica nos sinais e sintomas do DED após o tratamento da CSA.