Wpływ 0,1% miejscowego cyklosporyny A dla 12 tygodni na powierzchni oka komórki odpornościowe w suchych oczach

Układ odpornościowy odgrywa kluczową rolę w patogenezie suchej oka (DED). Zwiększony poziom kilku cytokin łzowych, chemokin, ekspresji cząsteczek HLA -DR i aktywacja komórek prezentujących antygen - komórek dendrytycznych (DCS) i limfocyty odgrywają centralną rolę w patogenezie DED. Zwiększone wyrażenia komórek T CD4+ i CD8+ na powierzchni oka pacjentów z DED sugerują potencjalną rolę odporności adaptacyjnej w przewodniczności DED. Obecność komórek prezentujących antygen na powierzchni oka i regulacja w górę MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 i IFN-γ i innych cząsteczkach stymulujących w łezach pacjentów z DED wskazują na możliwą aktywację miejscowej adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej.

Spójnik służy jako główne miejsce analizy immunologicznej i histochemicznej w chorobach powierzchniowych ocznej. Naukowcy zastosowali różne techniki do badania immunologii powierzchni oka, takich jak cytologia wrażeń, biopsja spojówka i reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym, immunocytochemia i mikroskopia świetlna. Cytometria przepływowa jest potężną techniką, która pozwala na analizę fenotypową komórek poprzez immunolabelowanie ekspresji pozakomórkowych różnych markerów komórek odpornościowych. Zwiększone wyrażenia markerów aktywacyjnych, takich jak HLA-DR i różne populacje komórek odpornościowych, w tym komórki T (CD3+, CD4+i CD8+), komórek B, komórek naturalnych zabójców i monocyty (komórki CD14+) obserwuje się w DED przy użyciu cytometrii przepływowej w próbkach cytologii wcisku koniunktury.

Historycznie, badanie ludzkich komórek odpornościowych na powierzchni oka wymagało technik inwazyjnych. Wraz z pojawieniem się mikroskopii konfokalnej in vivo (IVCM) umożliwił nieinwazyjną wizualizację nabłonkowych komórek odpornościowych (EIC) i nerwów rogówki. W ciągu ostatnich 20 lat naukowcy wykorzystali IVCM do zbadania zmian patologicznych w różnych zaburzeniach powierzchni oka. Z kilku badań IVCM wynika, że ​​EIC rogówki ulegają zmianom, takimi jak wzrost gęstości i zmiany w jego morfologii we wszystkich formach ded. Konwencjonalny statyczny IVCM przechwytuje obrazy sekcji w jednym punkcie czasowym EIC rogówki, a ich analiza jest ograniczona do jego gęstości i morfologii. Podczas gdy in vivo natura IVCM zapobiega bezpośrednim fenotypowaniu komórek odpornościowych, zaobserwowane komórki są głównie uważane za DC oparte na ich cechach morfologicznych. Dlatego autorzy używali terminu EICS do zdefiniowania gęstości komórek odpornościowych (gęstość EIC) ilościowo za pomocą statycznego IVCM. W przeciwieństwie do tej metody, która ogranicza identyfikację typu komórek odpornościowych, niedawno pionierską, nową technikę zwaną funkcjonalną IVCM (FUN-IVCM) umożliwia identyfikację typów komórek odpornościowych w rogówce poprzez obserwowanie ich morfodynamiki. Ta metoda obejmuje uchwycenie kolejnych zdjęć sekwencji i skanowania objętości w ciągu 30-40 minut, z odstępami 4-5 minut. Obrazy są następnie w czasie, aby zidentyfikować dynamiczne zachowanie każdej komórki odpornościowej. Na podstawie ich dynamicznego zachowania i morfologii komórki można różnicować na nabłonkowe komórki T (wysoce ruchowe, mniejsze wielkość ciała) lub komórki dendrytyczne (DC, mniej ruchliwy, większy rozmiar ciała z dendrytami). Można również zidentyfikować przednie makrofagi zrębu rogówki. Zdjęcia w czasie pozwalają na badanie dodatkowych parametrów ruchliwości komórek, takich jak szybkość natychmiastowa i prędkość przemieszczenia.

Pierwszym leczeniem DED to sztuczne łzy. Jednak ze względu na przewlekły charakter choroby i powtarzające się ostre zaostrzenia terapie przeciwzapalne zostały w dużej mierze wdrożone. W konsekwencji wiele obecnych podejść terapeutycznych dotyczy różnych ścieżek zapalnych, mającym na celu złamanie błędnego cyklu ded. Zarówno miejscowe kortykosteroidy, jak i immunosupresje skutecznie zmniejszają zapalenie w DED. Miejscowe kortykosteroidy są stosowane w DED do kontrolowania ostrych zaostrzeń stanu zapalnego powierzchni oka, ale ich długoterminowe stosowanie jest ograniczone ich jatrogennymi efektami ubocznymi. Przeciwnie, środki immunosupresyjne, takie jak cyklosporyna A (CSA), mają potencjalne działanie przeciwzapalne, z minimalnymi lokalnymi skutkami ubocznymi. Zastosowanie CSA w przewlekłym DED może znacznie zmniejszyć barwienie powierzchni oka, zaczerwienienie, markery zapalne i poprawić objawy suchego oka. W skrócie, CSA tłumi proliferację komórek T poprzez hamowanie fosfatazy kalcyneuryny. CSA działa na różnych etapach odpowiedzi immunologicznej, podczas prezentacji antygenu i interakcji komórek DC-T. Wrodzone komórki odpornościowe są obecnie postrzegane jako potencjalnie ważne cele CSA i mogą odzwierciedlać jednoczesne celowanie komórek dendrytycznych, makrofagów i neutrofili. W wstępnych dowodach na powierzchni oka sugerują, że CSA może znacząco zmniejszyć markery aktywacyjne, takie jak HLA-DR, CD11C, niektóre markery apoptozy i limfocyty T spojówek towarzyszy klinicznej poprawie u pacjentów z DED leczonych CSA.

Podczas gdy garść badań klinicznych wykazała skuteczność CSA w zmniejszaniu stanu zapalnego i poprawie objawów DED, bezpośredni wpływ CSA na komórki odpornościowe powierzchni oka nie zostało szczegółowo zbadane przy użyciu statycznego i za pomocą FUN-IVCM. Biorąc pod uwagę wpływ CSA na zarówno wrodzone, jak i adaptacyjne komórki odpornościowe, autorzy hipoteza, że ​​zastosowanie 0,1% CSA będzie miało hamujący wpływ na odpowiedź immunologiczną powierzchniową wraz z poprawą objawów i objawów DED w porównaniu z jego nośnikiem. W tym artykule podkreśla randomizowany protokół badania klinicznego, aby kompleksowo zbadać wpływ CSA na wrodzony i adaptacyjny układ odpornościowy na powierzchni oka w DED. W badaniu zbadano wpływ CSA na DCS (CD11C+ DCS, HLA-DR), populacje komórek pomocniczych T (komórki T CD4+) poprzez analizę markerów limfocytów (CD45, CD3, CD4) i ich powiązanych cytokin (cytokiny szlaku TH1), szczególnie IL-2, IFN-γ i IL-17, które są podstawowym celem Immunomulującym CSA.

1.2. Badanie celów i hipoteza cel 1: Badanie i porównywanie wpływu 12-tygodniowej terapii 0,1% CSA na wrodzone i adaptacyjne komórki immunologiczne na powierzchni oka, przy użyciu obrazowania-statyczna ivcm i technik cytometrii komórkowej i technik cytometrii immunologicznej i analizy cytometrii i cytometrii immunologicznej (zachowania morfodynamiczne), zachowania immunologiczne (zachowania immunologiczne). Test PEAD oceniający stężenie łzowe IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ): CSA będzie miało hamujący wpływ na wbudowaną powierzchnię oka i adaptacyjną gęstość komórek immunologicznych, morfologię i cytokiny łez.

Cel 2: Ocena związku między objawami DED, objawami i cechami komórek odpornościowych i cytokinami łzowymi w hipotezie DED: bezpośredni związek między charakterystyką komórek odpornościowych, cytokinami Jeatem i objawami, istnieją objawy.

Cel 3: Zbadanie związku czasowego między zmianami komórek odpornościowych a hipotezą poprawy klinicznej: zmiany charakterystyki komórek odpornościowych (gęstość i dynamika) i markery zapalne poprzedzają kliniczną poprawę objawów i objawów ded po leczeniu CSA.