在干眼睛中眼表面免疫细胞上的12周的0.1％局部环球蛋白A的效果

免疫系统在干眼症（DED）发病机理中起关键作用。 几种撕裂细胞因子，趋化因子，HLA -DR分子的表达以及抗原呈现细胞的激活的水平增加了 - 树突状细胞（DCS）和淋巴细胞在DED发病机理中均起着核心作用。 DED患者眼表面CD4+和CD8+ T细胞的表达增加表明适应性免疫在DED慢性中的潜在作用。 The presence of antigen-presenting cells in the ocular surface and the upregulation of MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 and IFN- γ and other co-stimulatory molecules in the tears of DED patients indicates a possible activation of the local adaptive immune response.

结膜是眼部疾病中免疫学和组织化学分析的主要部位。 研究人员已经采用了各种技术来研究眼部表面免疫学，例如印象细胞学，结膜活检以及通过实时聚合酶链反应，免疫细胞化学和光显微镜。 流式细胞仪是一种强大的技术，可以通过对各种免疫细胞标记的细胞外表达进行免疫标记来对细胞进行表型分析。 使用流式细胞术在DED中观察到激活标志物（CD3+，CD4+和CD8+），包括T细胞（CD3+，CD4+和CD8+），B细胞，天然杀伤细胞和单核细胞（CD14+细胞）（CD3+，CD4+和CD8+）等激活标记的表达增加。

从历史上看，研究人眼表面免疫细胞需要侵入性技术。 随着体内共聚焦显微镜（IVCM）的出现，已经实现了眼表上皮免疫细胞（EICS）和角膜神经的实时，无创的可视化。 在过去的20年中，研究人员使用IVCM检查了各种眼表面疾病的病理变化。 从几项IVCM研究中可以明显看出，角膜eics发生了变化，例如，密度的增加及其形态的变化在所有形式的DED中。 常规的静态IVCM在角膜EIC的一个时间点捕获了部分图像，并且它们的分析仅限于其密度和形态。 虽然IVCM的体内性质可防止直接的免疫细胞表型，但观察到的细胞主要基于其形态特征而被认为是DCS。 因此，作者已经使用术语EIC来定义使用静态IVC量化的免疫细胞密度（EIC密度）。 与限制免疫细胞类型的识别的方法不同，该方法最近开创的新型技术称为功能IVCM（FUN-IVCM），可以通过观察其形态动力学来鉴定角膜中的免疫细胞类型。 该方法涉及在30-40分钟内捕获连续的序列和音量扫描图像，间隔为4-5分钟。 然后将图像延时以识别每个免疫细胞的动态行为。 基于它们的动态行为和形态，可以将细胞分化为上皮T细胞（高度运动，体型较小）或树突状细胞（DC，较小，运动型较大，体积较大，带有树突）。 也可以鉴定出前角膜基质巨噬细胞。 时间范围的图像允许检查其他细胞运动参数，例如瞬时速度和位移速度。

DED的一线治疗方法是人造眼泪。 但是，由于疾病的长期性质和复发性急性加重，抗炎疗法已得到很大程度上实施。 因此，许多当前的治疗方法针对各种炎症途径，旨在打破DED的恶性循环。 局部皮质类固醇和免疫抑制剂均有效减少DED的炎症。 局部皮质类固醇可用于控制眼表炎症的急性加重，但它们的长期使用受到其肾化眼副作用的限制。 为了形成鲜明对比的是，诸如环孢菌素A（CSA）等免疫抑制剂具有潜在的抗炎作用，局部副作用最少。 在慢性DED中使用CSA可以显着降低眼部表面染色，发红，炎症标志物并改善眼睛干眼症状。 简而言之，CSA通过抑制磷酸酶钙调蛋白抑制T细胞增殖。 在抗原表现和DC-T细胞相互作用期间，CSA在免疫反应的不同步骤中起作用。 先天免疫细胞现在被视为CSA的潜在重要靶标，可能反映了树突状细胞，巨噬细胞和中性粒细胞的同时靶向。 在眼表面的初步证据中，CSA可以显着降低激活标志物，例如HLA-DR，CD11C，某些凋亡标志物和结膜T淋巴细胞，伴随CSA治疗的DED患者的临床改善。

虽然少数临床试验证明了CSA在减少炎症和改善DED症状方面的功效，但尚未使用静态和使用FUN-IVCM详细研究CSA对眼表面免疫细胞的直接影响。 鉴于CSA对先天性和适应性免疫细胞的影响，作者假设使用0.1％CSA将对眼部表面免疫反应产生抑制作用，以及与其车辆相比，DED的体征和症状的改善。 本文重点介绍了随机临床试验方案，以全面研究CSA对DED中的眼表面先天和适应性免疫系统的影响。 该研究将通过分析淋巴细胞标记（CD45，CD3，CD4）及其相关的细胞因子（TH1途径细胞因子），尤其是IL-2，IFN-2，IFN-2，IFN-γ和IL-17的一级目标，研究CSA对DC（CD11C+ DC，HLA-DR），T辅助细胞群（CD4+ T细胞）的影响，T辅助细胞群（CD4+ T细胞）的影响。

1.2。 Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex评估IL-2，IL-4，IL-6，IL-12，IL-17，IL-17，IL-23，IFN-γ）的珠测定的珠测定：CSA在DED中对眼部表面先天和适应性免疫细胞密度，形态和泪细胞动物的抑制作用。

目的2：在DED假设中评估DED体征，症状和免疫细胞特征与撕裂细胞因子之间的关联：免疫细胞特征，乳头细胞因子和DED迹象之间的直接关系，存在症状。

目的3：研究免疫细胞变化与临床改善假设之间的时间关系：免疫细胞特征（密度和动力学）的变化（密度和动力学）和炎症标志物在CSA治疗后DED的症状和症状临床改善之前。