L'effet de 0,1% de ciclosporine topique A pendant 12 semaines sur la surface des yeux des cellules immunitaires dans les yeux secs

Le système immunitaire joue un rôle pivot dans la pathogenèse de la maladie de la sécheresse oculaire (DED). Un niveau accru de plusieurs cytokines de déchirure, chimiokines, expression des molécules HLA-DR et activation des cellules dendritiques présentant des cellules dendritiques (DC) et les lymphocytes jouent tous un rôle central dans la pathogenèse DED. Les expressions accrues de cellules T CD4 + et CD8 + dans la surface oculaire des patients DED suggèrent un rôle potentiel de l'immunité adaptative dans la chronicité DED. La présence de cellules présentatrices de l'antigène dans la surface oculaire et la régulation positive des MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 et IFN-γ et d'autres molécules co-stimulantes dans les larmes des patients DED indique une éventuelle activation de la réponse immunitaire adaptative locale.

La conjonctive sert de site primaire pour l'analyse immunologique et histochimique dans les maladies de surface oculaires. Les chercheurs ont utilisé diverses techniques pour étudier l'immunologie de la surface oculaire telle que la cytologie impressionnante, la biopsie conjonctivale et par la réaction en chaîne en polymérase en temps réel, l'immunocytochimie et la microscopie optique. La cytométrie en flux est une technique puissante qui permet l'analyse phénotypique des cellules par l'immunomarquage des expressions extracellulaires de divers marqueurs de cellules immunitaires. Des expressions accrues de marqueurs d'activation comme HLA-DR et diverses populations de cellules immunitaires, notamment les cellules T (CD3 +, CD4 + et CD8 +), les cellules B, les cellules tueuses naturelles et les monocytes (cellules CD14 +) sont observées en DED en utilisant une cytométrie en flux sur des échantillons de cytologie d'impression conjonctivale.

Historiquement, étudier les cellules immunitaires de surface oculaire humaine nécessitait des techniques invasives. Avec l'avènement de la microscopie confocale in vivo (IVCM), a permis une visualisation non invasive en temps réel des cellules immunitaires épithéliales de surface oculaire (EICS) et des nerfs cornéens. Au cours des 20 dernières années, les chercheurs ont utilisé IVCM pour examiner les changements pathologiques dans divers troubles de la surface oculaire. Il est évident à partir de plusieurs études IVCM que les EICS cornéens subissent des changements tels que l'augmentation de la densité et les changements dans sa morphologie dans toutes les formes de DED. L'IVCM statique conventionnel capture des images de section à un seul moment des EIC cornéennes, et leur analyse est limitée à sa densité et à sa morphologie. Alors que la nature in vivo de l'IVCM empêche le phénotypage direct des cellules immunitaires, les cellules observées sont principalement considérées comme des CD en fonction de leurs caractéristiques morphologiques. Par conséquent, les auteurs ont utilisé le terme EICS pour définir la densité des cellules immunitaires (densité EIC) quantifiée en utilisant le STATIC-IVCM. Contrairement à cette méthode, qui limite l'identification du type de cellule immunitaire, une nouvelle technique récemment lancée IVCM (FUN-IVCM) permet d'identifier les types de cellules immunitaires dans la cornée en observant leur morphodynamique. Cette méthode consiste à capturer des images de séquence et de volume consécutives sur une période de 30 à 40 minutes, avec des intervalles de 4 à 5 minutes. Les images sont ensuite décalées dans le temps pour identifier le comportement dynamique de chaque cellule immunitaire. Sur la base de leur comportement dynamique et de leur morphologie, les cellules peuvent être différenciées en cellules T épithéliales (taille corporelle très mobiles) ou dendritiques (CC, moins mobiles, plus grande taille corporelle avec dendrites). Les macrophages stromaux cornéens antérieurs peuvent également être identifiés. Les images lâches permettent l'examen de paramètres de motilité cellulaire supplémentaires, tels que la vitesse instantanée et la vitesse de déplacement.

Le traitement de première intention de DED est les larmes artificielles. Mais, en raison de la nature chronique de la maladie et des exacerbations aiguës récurrentes, les thérapies anti-inflammatoires ont été largement mises en œuvre. Par conséquent, bon nombre des approches thérapeutiques actuelles ciblent diverses voies inflammatoires, visant à briser le cercle vicieux de Ded. Les corticostéroïdes topiques et les immunosuppresseurs réduisent efficacement l'inflammation dans le DED. Les corticostéroïdes topiques sont utilisés pour contrôler les exacerbations aiguës de l'inflammation de la surface oculaire, mais leur utilisation à plus long terme est limitée par leurs effets secondaires oculaires iatrogènes. Pour contraster cela, les agents immunosuppresseurs tels que la ciclosporine A (CSA) ont un effet anti-inflammatoire potentiel, avec un minimum d'effets secondaires locaux. L'utilisation de CSA dans le DED chronique peut réduire considérablement la coloration de la surface oculaire, les rougeurs, les marqueurs inflammatoires et améliore les symptômes de la sécheresse oculaire. En bref, le CSA atténue la prolifération des lymphocytes T en inhibant la calcineurine de la phosphatase. CSA fonctionne à différentes étapes de la réponse immunitaire, lors de la présentation de l'antigène et de l'interaction des cellules DC-T. Les cellules immunitaires innées sont désormais considérées comme des cibles potentiellement importantes de l'ASC et peuvent refléter le ciblage simultané des cellules dendritiques, des macrophages et des neutrophiles. Dans la surface oculaire, les preuves préliminaires suggèrent que le CSA peut réduire considérablement les marqueurs d'activation tels que HLA-DR, le CD11c, certains marqueurs d'apoptose et les lymphocytes T conjonctivaux accompagnés de l'amélioration clinique chez les patients DED traités au CSA.

Bien qu'une poignée d'essais cliniques aient mis en évidence l'efficacité de la CSA dans la réduction de l'inflammation et l'amélioration des symptômes du DED, l'effet direct de la CSA sur les cellules immunitaires de la surface oculaire n'a pas été étudiée en détail en utilisant statique et en utilisant FUN-IVCM. Compte tenu de l'effet de la CSA sur les cellules immunitaires innées et adaptatives, les auteurs ont émis l'hypothèse que l'utilisation de 0,1% de CSA aura un effet inhibiteur sur la réponse immunitaire de la surface oculaire ainsi que l'amélioration des signes et symptômes de DED par rapport à son véhicule. Cet article met en évidence le protocole d'essais cliniques randomisés pour étudier de manière approfondie l'effet de la CSA sur la surface oculaire innée et le système immunitaire adaptatif dans Ded. The study will investigate CsA's impact on DCs (CD11c+ DCs, HLA-DR), T helper cell populations (CD4+ T cells) through analysis of lymphocyte markers (CD45, CD3, CD4) and their associated cytokines (Th1 pathway cytokines), particularly IL-2, IFN- γ and IL-17 which is a primary target of CsA's immunomodulatory action.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Test de billes multiplex évaluant les concentrations de déchirure des IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ) Hypothèse: CSA aura un effet inhibiteur sur la surface oculaire innée et la densité des cellules immunitaires adaptatives, la morphologie et les cytokines déchirantes de la surface oculaire.

AIM 2: Évaluer l'association entre les signes de DED, les symptômes et les caractéristiques des cellules immunitaires et les cytokines de déchirure dans l'hypothèse de DED: une relation directe entre les caractéristiques des cellules immunitaires, les cytokines de trayage et les signes DED, les symptômes existent.

AIM 3: Étudier la relation temporelle entre les changements de cellules immunitaires et l'hypothèse d'amélioration clinique: les changements dans les caractéristiques des cellules immunitaires (densité et dynamique) et les marqueurs inflammatoires précèdent l'amélioration clinique des signes et symptômes de DED après le traitement de l'ASC.