0,1%: n ajankohtaisen siklosporiini A: n vaikutus 12 viikon silmien immuunisoluihin kuiviin silmiin

Immuunijärjestelmällä on keskeinen rooli kuivassa silmätaudissa (DED) patogeneesissä. Useiden kyyneleiden sytokiinien, kemokiinien, HLA -DR -molekyylien ekspressio ja antigeenin aktivointi - dendriittisoluissa (DC) ja lymfosyyteillä on kaikki keskeinen rooli patogeneesissä. CD4 +- ja CD8+ T -solujen lisääntyneet ekspressiot DED -potilaiden silmän pinnalla viittaavat adaptiivisen immuniteetin potentiaaliseen rooliin DED -kroonisuudessa. Antigeeniä esittelevien solujen läsnäolo silmän pinnalla ja MHC II: n, IL-2: n, IL-17: n, IL-6: n ja IFN-γ: n ja muiden rinnakkais stimuloivien molekyylien ylös säätely DED-potilaiden kyyneleissä osoittaa paikallisen adaptiivisen immuunivasteen mahdollisen aktivoinnin.

Sidekalvo toimii primaarina immunologiselle ja histokemialliselle analyysille silmän pintataudissa. Tutkijat ovat käyttäneet erilaisia ​​tekniikoita silmän pinnan immunologian, kuten vaikutelman sytologian, sidekalvojen biopsian ja reaaliaikaisen polymeraasiketjureaktion, immunosytokemian ja valomikroskopian kautta. Virtaussytometria on tehokas tekniikka, joka mahdollistaa solujen fenotyyppisen analyysin erilaisten immuunisolujen markkerien solunulkoisten ekspressioiden immuunipyörällä. Lisääntyneitä aktivointimarkkereiden, kuten HLA-DR: n ja erilaisten immuunisolujen populaatioiden, ekspressioita, mukaan lukien T-solut (CD3+, CD4+ja CD8+), B-solut, luonnolliset tappajasolut ja monosyytit (CD14+-solut), DED: ssä käyttämällä virtaussytometriaa konjunktiivisten impression sytologianäytteissä.

Historiallisesti ihmisen silmäpinnan immuunisolujen tutkiminen vaati invasiivisia tekniikoita. In vivo -konfokaalimikroskopian (IVCM) tulossa on mahdollistanut silmän pinnan epiteelin immuunisolujen (EIC) ja sarveiskalvon hermojen reaaliaikaiset, ei-invasiivisen visualisoinnin. Viimeisen 20 vuoden aikana tutkijat ovat käyttäneet IVCM: ää tutkiakseen patologisia muutoksia eri silmän pintahäiriöissä. Useista IVCM -tutkimuksista käy ilmi, että sarveiskalvon EICS läpäisee muutokset, kuten tiheyden lisääntyminen ja sen morfologian muutokset kaikissa DED -muodossa. Tavanomainen staattinen IVCM kaappaa osiokuvia sarveiskalvon EIC: n yhdellä ajankohtana, ja niiden analyysi rajoittuu sen tiheyteen ja morfologiaan. Vaikka IVCM: n in vivo -luonne estää suoran immuunisolujen fenotyyppien määrittämisen, havaittujen solujen uskotaan pääasiassa DC: t niiden morfologisten ominaisuuksien perusteella. Siksi tekijät ovat käyttäneet termiä EIC-määritelty immuunisolujen tiheyden (EIC-tiheyden) määrittelemiseen, joka on kvantifioitu staattisesti-IVCM: llä. Toisin kuin tämä menetelmä, joka rajoittaa immuunisolutyypin tunnistamista, äskettäin edelläkävijä, uusi tekniikka, jota kutsutaan funktionaaliseksi IVCM: lle (FUN-IVCM), mahdollistaa immuunisolutyyppien tunnistamisen sarveiskalvossa tarkkailemalla niiden morfodynamiikkaa. Tämä menetelmä käsittää peräkkäisen sekvenssin ja äänenvoimakkuuden skannauskuvien sieppaamisen 30–40 minuutin ajanjaksolla 4-5 minuutin välein. Kuvat on sitten aikaa kulutettu kunkin immuunisolun dynaamisen käyttäytymisen tunnistamiseksi. Niiden dynaamisen käyttäytymisen ja morfologian perusteella solut voidaan erottaa joko epiteeli -T -soluiksi (erittäin liikkuvat, pienempi kehon koko) tai dendriittisoluiksi (DC: t, vähemmän liikkuvat, suurempi kehon koko dendriittien kanssa). Myös sarveiskalvon stroomamakrofagit voidaan tunnistaa. Aikataulutetut kuvat mahdollistavat lisäsolujen liikkuvuusparametrien, kuten hetkellisen nopeuden ja siirtymänopeuden, tutkimisen.

DED: n ensisijainen hoito on keinotekoinen kyyneleet. Mutta taudin kroonisen luonteen ja toistuvien akuutin pahenemisen anti-inflammatoristen terapioiden vuoksi on suurelta osin toteutettu. Näin ollen monet nykyisistä terapeuttisista lähestymistavoista kohdistuvat erilaisiin tulehduksellisiin reitteihin, joiden tavoitteena on rikkoa DED: n noidankehän sykli. Sekä paikalliset kortikosteroidit että immunosuppressantit vähentävät tehokkaasti tulehduksia DED: ssä. Ajankohtaisia ​​kortikosteroideja käytetään DED: ssä silmän pinnan tulehduksen akuuttien pahenemisen hallitsemiseksi, mutta niiden iatrogeeniset silmän sivuvaikutukset rajoittavat niiden pidemmän aikavälin käyttöä. Tämän vastaamiseksi immunosuppressiivisilla aineilla, kuten ciclosporin A (CSA), on potentiaalinen anti-inflammatorinen vaikutus, minimaalisilla paikallisilla sivuvaikutuksilla. CSA: n käyttö kroonisessa DED: ssä voi merkittävästi vähentää silmän pinnan värjäystä, punoitusta, tulehduksellisia markkereita ja parantaa kuivien silmien oireita. Lyhyesti sanottuna CSA vaimentaa T -solujen lisääntymistä estämällä fosfataasin kalsineuriinia. CSA toimii immuunivasteen eri vaiheissa antigeenin esityksen ja DC-T-solujen vuorovaikutuksen aikana. Luonnollisia immuunisoluja pidetään nyt CSA: n potentiaalisesti tärkeinä kohteina, ja ne voivat heijastaa dendriittisolujen, makrofagien ja neutrofiilien samanaikaista kohdentamista. Silmän pinnan alustavat todisteet viittaavat siihen, että CSA voi vähentää merkittävästi aktivointimarkkereita, kuten HLA-DR, CD11C, tiettyjä apoptoosimarkkereita ja konjunktiivisten T-lymfosyyttien seurannut CSA-käsitellyillä DED-potilailla.

Vaikka kourallinen kliinisiä tutkimuksia on osoittanut CSA: n tehokkuutta tulehduksen vähentämisessä ja DED: n oireiden parantamisessa, CSA: n suoraa vaikutusta silmän pinta-immuunisoluihin ei ole tutkittu yksityiskohtaisesti käyttämällä staattista ja käyttämällä FUN-IVCM: ää. Kun otetaan huomioon CSA: n vaikutus sekä luontaisiin että adaptiivisiin immuunisoluihin, kirjoittajat hypoteesit, että 0,1% CSA: n käyttämisellä on estävä vaikutus silmän pinnan immuunivasteeseen sekä DED: n oireiden parantaminen sen vehikkeliän verrattuna. Tämä artikkeli korostaa satunnaistettua kliinistä tutkimusprotokollaa CSA: n vaikutuksen kattavasti tutkimiseksi silmänpinnan luontaiseen ja adaptiiviseen immuunijärjestelmään DED: ssä. Tutkimuksessa tutkitaan CSA: n vaikutusta DCS: ään (CD11C+ DCS, HLA-DR), T-auttajasolujen populaatiot (CD4+ T-solut) analysoimalla lymfosyyttimarkkereita (CD45, CD3, CD4) ja niihin liittyviä sytokiinejä (Th1-reitin sytokiineja), erityisesti IL-2, IFN-y: n ja IL-7: n primaarikohtaa.

1.2. Tutkimuksen tavoitteet ja hypoteesin tavoite 1: 12 viikon ajankohtaisen 0,1% CSA-terapian vaikutuksen tutkiminen ja vertaaminen silmänpinnan luontaisissa ja adaptiivisissa immuunisoluissa käyttämällä kuvantamista-staattista IVCM: tä ja FUN-IVCM: tä (immuunisolujen tiheys, morfologia ja morfodynaaminen käyttäytyminen), immuunisolujen fenotyyppien avulla conjuncting-impression sytologia ja virtauskyymitekniikat. (Multiplex helmimääritys arvioidaan IL-2: n, IL-4: n, IL-6: n, IL-12: n, IL-17: n, IL-23: n, IFN-γ) -hypoteesien kyynelpitoisuuksia: CSA: lla on estävä vaikutus silmän pintaan luontaisiin ja adaptiivisiin immuunisolujen tiheyteen, morfologiaan ja kyynelyssytokiiniin DED: ssä.

Tavoite 2: Arvioida DED -merkintöjen, oireiden ja immuunisolujen ominaisuuksien ja sytokiinien välinen yhteys DED -hypoteesissa: Suora suhde immuunisolujen ominaisuuksien, nyrkisytokiinien ja DED -merkintöjen välillä, oireita on olemassa.

Tavoite 3: Immuunisolujen muutosten ja kliinisen parannushypoteesin välistä ajallista suhdetta: Immuunisolujen ominaisuuksien muutokset (tiheys ja dynamiikka) ja tulehdukselliset markkerit edeltävät CSA -hoidon jälkeen oireiden ja DED: n oireiden kliinistä parannusta.