Het effect van 0,1% topische ciclosporine A voor 12 weken op het oogoppervlak immuuncellen in droge ogen

Het immuunsysteem speelt een cruciale rol bij de pathogenese van droge ogen (Ded). Een verhoogd niveau van verschillende traancytokines, chemokines, expressie van HLA -DR -moleculen en activering van antigeenpresenterende cellen - dendritische cellen (DC's) en lymfocyten spelen allemaal een centrale rol in Ded -pathogenese. De verhoogde uitdrukkingen van CD4+ en CD8+ T -cellen in het oculaire oppervlak van DED -patiënten suggereren een mogelijke rol van adaptieve immuniteit in Ded Chroniciteit. De aanwezigheid van antigeenpresenterende cellen in het oculaire oppervlak en de opregulatie van MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 en IFN-γ en andere co-stimulerende moleculen in de tranen van Ded-patiënten duidt op een mogelijke activering van de lokale adaptieve immuunrespons.

De conjunctiva dient als een primaire plaats voor immunologische en histochemische analyse bij oculaire oppervlakte -ziekten. Onderzoekers hebben verschillende technieken gebruikt om oculaire oppervlakte-immunologie te bestuderen, zoals afdrukcytologie, conjunctivale biopsie en door realtime polymerasekettingreactie, immunocytochemie en lichtmicroscopie. Flowcytometrie is een krachtige techniek die de fenotypische analyse van cellen mogelijk maakt door immunolabeling van extracellulaire expressies van verschillende immuuncelmarkers. Een verhoogde uitdrukkingen van activeringsmarkers zoals HLA-DR en verschillende immuuncelpopulaties, waaronder T-cellen (CD3+, CD4+en CD8+), B-cellen, natuurlijke killercellen en monocyten (CD14+-cellen) worden waargenomen in Ded met flowcytometrie op conjunctivale indruk cytologiemonsters.

Historisch gezien vereiste het bestuderen van menselijke oculaire oppervlakte -immuuncellen invasieve technieken. Met de komst van in vivo confocale microscopie (IVCM) heeft realtime, niet-invasieve visualisatie van oculaire oppervlakte-epitheelimuuncellen (EIC's) en cornea-zenuwen mogelijk gemaakt. In de afgelopen 20 jaar hebben onderzoekers IVCM gebruikt om pathologische veranderingen in verschillende oculaire oppervlakte -aandoeningen te onderzoeken. Uit verschillende IVCM -onderzoeken blijkt uit verschillende IVCM -onderzoeken dat EIC's van hoornvlies veranderingen ondergaan, zoals toename van de dichtheid en veranderingen in de morfologie ervan in alle vormen van DED. Conventionele statische IVCM legt sectiebeelden vast op een enkel tijdstip van de cornea -EIC's, en hun analyse is beperkt tot de dichtheid en morfologie. Hoewel de in vivo aard van IVCM directe immuuncelfenotypering voorkomt, wordt voornamelijk aangenomen dat de waargenomen cellen DC's zijn op basis van hun morfologische kenmerken. Daarom hebben de auteurs de term EIC's gebruikt om immuuncellendichtheid (EIC-dichtheid) te definiëren gekwantificeerd met behulp van statische IVCM. In tegenstelling tot deze methode, die de identificatie van het immuunceltype beperkt, maakt een recent pionier, nieuwe techniek genaamd functionele IVCM (FUN-IVCM), identificatie van de immuunceltypen in het hoornvlies mogelijk door hun morfodynamica te observeren. Deze methode omvat het vastleggen van opeenvolgende volgorde en volumescanbeelden gedurende een periode van 30-40 minuten, met intervallen van 4-5 minuten. De afbeeldingen zijn vervolgens in de tijd om dynamisch gedrag van elke immuuncel te identificeren. Op basis van hun dynamische gedrag en morfologie kunnen cellen worden gedifferentieerd in epitheliale T -cellen (zeer beweeglijk, kleinere lichaamsgrootte) of dendritische cellen (DC's, minder beweeglijke, grotere lichaamsgrootte met dendrieten). Voorste hoornvliesstromale macrofagen kunnen ook worden geïdentificeerd. Tijdvergunde afbeeldingen zorgen voor het onderzoeken van extra celmotiliteitsparameters, zoals onmiddellijke snelheid en verplaatsingssnelheid.

De eerstelijnsbehandeling voor DED is kunstmatige tranen. Maar vanwege de chronische aard van de ziekte en terugkerende acute exacerbaties is ontstekingsremmende therapieën grotendeels geïmplementeerd. Bijgevolg zijn veel van de huidige therapeutische benaderingen gericht op verschillende inflammatoire routes, gericht op het doorbreken van de vicieuze cirkel van DED. Zowel topische corticosteroïden als immunosuppressiva verminderen effectief de ontsteking in Ded. Topische corticosteroïden worden gebruikt in DED om acute exacerbaties van de ontsteking van het oculaire oppervlak te beheersen, maar hun gebruik op langere termijn wordt beperkt door hun iatrogene oculaire bijwerkingen. Om dit te contrasteren, hebben immunosuppressieve middelen zoals ciclosporine A (CSA) een potentieel ontstekingsremmende effect, met minimale lokale bijwerkingen. Het gebruik van CSA in chronische DED kan de kleuring van het oculaire oppervlak, roodheid, inflammatoire markers aanzienlijk verminderen en de symptomen van de droge ogen verbetert. In het kort, CSA dempt T -celproliferatie door het remmen van de fosfatase calcineurine. CSA functioneert bij verschillende stappen van de immuunrespons, tijdens antigeenpresentatie en DC-T-celinteractie. Aangeboren immuuncellen worden nu gezien als potentieel belangrijke doelen van CSA en kunnen een weerspiegeling zijn van gelijktijdige targeting van dendritische cellen, macrofagen en neutrofielen. In het oculaire oppervlak suggereert voorlopige bewijs dat CSA activeringsmarkers zoals HLA-DR, CD11C, bepaalde apoptosemarkers en conjunctivale T-lymfocyten aanzienlijk kan verminderen, vergezelden de klinische verbetering bij CSA-behandelde DED-patiënten.

Hoewel een handvol klinische onderzoeken de werkzaamheid van CSA hebben aangetoond bij het verminderen van ontstekingen en het verbeteren van de symptomen van DED, is het directe effect van CSA op oculaire oppervlakte-immuuncellen niet in detail bestudeerd met behulp van statisch en gebruik van Fun-IVCM. Gezien het effect van CSA op zowel aangeboren als adaptieve immuuncellen, veronderstellen de auteurs dat het gebruik van 0,1% CSA een remmend effect zal hebben op de oculaire oppervlakte -immuunrespons, samen met verbetering van tekenen en symptomen van DED vergeleken met zijn voertuig. Dit artikel benadrukt het gerandomiseerde klinische proefprotocol om het effect van CSA op het oculaire oppervlak aangeboren en adaptieve immuunsysteem in Ded volledig te bestuderen. De studie zal de impact van CSA op DCS (CD11C+ DCS, HLA-DR) onderzoeken, T-helpercelpopulaties (CD4+ T-cellen) door analyse van lymfocytenmarkers (CD45, CD3, CD3, CD4) en de bijbehorende cytokines (Th1 Pathway cytokines), met name IL-2, IFN-2, IFN-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en IL-γ en il-γ en IL-γ en IL-7 is.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex Bead-test met het beoordelen van traanconcentraties van IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ) Hypothese: CSA zal een remmend effect hebben op het oculaire oppervlak aangeboren en adaptieve immuuncellendichtheid, morfologie en tranencytokines in Ded.

Doel 2: Om de associatie te beoordelen tussen DED -tekenen, symptomen en immuuncelkenmerken en traancytokines in DED -hypothese: een directe relatie tussen immuuncelkenmerken, speencytokines en DED -tekenen, bestaan ​​er symptomen.

Doel 3: om de tijdelijke relatie tussen immuuncelveranderingen en klinische verbeteringshypothese te onderzoeken: veranderingen in immuuncelkenmerken (dichtheid en dynamiek) en inflammatoire markers voorafgaan aan klinische verbetering in tekenen en symptomen van DED na CSA -behandeling.