Účinek 0,1% lokálního ciklosporinu A pro 12 týdnů na imunitní buňky povrchu očí v suchých očích

Imunitní systém hraje klíčovou roli při patogenezi onemocnění suchého oka (DED). Zvýšená hladina několika slzných cytokinů, chemokinů, exprese molekul HLA -DR a aktivace buněk prezentujících antigen - dendritických buněk (DCS) a lymfocytů hraje ústřední roli v patogenezi DED. Zvýšené exprese CD4+ a CD8+ T buněk na očním povrchu pacientů s DED naznačují potenciální roli adaptivní imunity při chroničnosti DED. Přítomnost buněk prezentujících antigen na očním povrchu a upregulace MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 a IFN-y a dalších ko-stimulačních molekul v slzách ded pacientů naznačuje možnou aktivaci lokální adaptivní imunitní odpovědi.

Konjunktiva slouží jako primární místo pro imunologickou a histochemickou analýzu u onemocnění očních povrchů. Vědci použili různé techniky ke studiu imunologie oční povrchu, jako je cytologie dojmu, konjunktivální biopsie a prostřednictvím polymerázové řetězové reakce v reálném čase, imunocytochemii a světelnou mikroskopii. Průtoková cytometrie je výkonná technika, která umožňuje fenotypovou analýzu buněk imunoznačováním extracelulárních exprese různých markerů imunitních buněk. Zvýšené exprese aktivačních markerů, jako jsou HLA-DR a různé populace imunitních buněk, včetně T buněk (CD3+, CD4+a CD8+), B buněk, přirozených zabijáků a monocytů (CD14+buňky) jsou pozorovány v DED pomocí průtokové cytometrie na vzorcích cytologie konjunktivního dojmu.

Historicky studium imunitních buněk lidského očního povrchu vyžadovalo invazivní techniky. S příchodem konfokální mikroskopie in vivo (IVCM) umožnila v reálném čase neinvazivní vizualizaci očních povrchových epiteliálních imunitních buněk (EIC) a rohovkových nervů. Během posledních 20 let vědci použili IVCM ke zkoumání patologických změn v různých očních povrchových poruchách. Z několika studií IVCM je zřejmé, že rohovky EIC procházejí změnami, jako je zvýšení hustoty a změny v morfologii ve všech formách DED. Konvenční statický IVCM zachycuje obrazy sekce v jednom časovém bodě rohovky EIC a jejich analýza je omezena na jeho hustotu a morfologii. Zatímco in vivo povaha IVCM zabraňuje přímému fenotypu imunitních buněk, pozorované buňky jsou považovány za DCS na základě jejich morfologických charakteristik. Autoři proto použili termín EIC k definování hustoty imunitních buněk (hustota EIC) kvantifikovaného pomocí statického IVCM. Na rozdíl od této metody, která omezuje identifikaci typu imunitních buněk, umožňuje nedávno průkopní, nová technika zvaná funkční IVCM (Fun-IVCM) umožňuje identifikaci typů imunitních buněk v rohovce pozorováním jejich morfodynamiky. Tato metoda zahrnuje zachycení po sobě jdoucích sekvence a objemových skenovacích obrázků po dobu 30-40 minut, s intervaly 4-5 minut. Snímky jsou pak časově prosazeny k identifikaci dynamického chování každé imunitní buňky. Na základě jejich dynamického chování a morfologie mohou být buňky diferencovány buď na epiteliální T buňky (vysoce pohyblivá, menší velikost těla) nebo dendritické buňky (DC, méně pohyblivé, větší velikost těla s dendrity). Lze také identifikovat přední rohovky stromální makrofágy. Časově předložené obrázky umožňují zkoumání dalších parametrů motility buněk, jako je okamžitá rychlost a rychlost posunu.

Léčba první linie pro DED je umělé slzy. Ale kvůli chronické povaze nemoci a opakujících se akutních exacerbačních protizánětlivých terapií byly do značné míry implementovány. V důsledku toho se mnoho současných terapeutických přístupů zaměřuje na různé zánětlivé dráhy, jejichž cílem je prolomit začarovaný cyklus DED. Jak lokální kortikosteroidy, tak imunosupresiva účinně snižují zánět DED. Lokální kortikosteroidy se používají při kontrole akutních exacerbací zánětu očního povrchu, ale jejich dlouhodobější použití je omezeno jejich iatrogenními očními bočními účinky. Pro kontrastování to mají imunosupresivní látky, jako je ciclosporin A (CSA), potenciální protizánětlivý účinek s minimálními místními vedlejšími účinky. Použití CSA při chronickém DED může významně snížit barvení, zarudnutí, zánětlivé markery a zlepšit příznaky suchého oka. Stručně řečeno, CSA tlumí proliferaci T buněk inhibicí fosfatázy kalcineurinu. CSA funguje v různých krocích imunitní odpovědi, během prezentace antigenu a interakce DC-T buněk. Vrozené imunitní buňky jsou nyní považovány za potenciálně důležité cíle CSA a mohou odrážet simultánní cílení dendritických buněk, makrofágů a neutrofilů. V očním povrchu předběžné důkazy naznačují, že CSA může významně snížit aktivační markery, jako je HLA-DR, CD11C, určité markery apoptózy a konjunktivální T lymfocyty, doprovázely klinické zlepšení ded pacientů ošetřených CSA.

Zatímco hrstka klinických studií prokázala účinnost CSA při snižování zánětu a zlepšování příznaků DED, přímý účinek CSA na oční imunitní buňky nebyl podrobně studován pomocí statického a pomocí zábavného IVCM. Vzhledem k účinku CSA na vrozené i adaptivní imunitní buňky autoři předpokládají, že použití 0,1% CSA bude mít inhibiční účinek na imunitní odpověď oční povrchu spolu se zlepšením příznaků a příznaků DED ve srovnání s jeho vehikulem. Tento článek zdůrazňuje protokol randomizovaného klinického studie pro komplexní studium vlivu CSA na oční povrch vrozený a adaptivní imunitní systém v DED. The study will investigate CsA's impact on DCs (CD11c+ DCs, HLA-DR), T helper cell populations (CD4+ T cells) through analysis of lymphocyte markers (CD45, CD3, CD4) and their associated cytokines (Th1 pathway cytokines), particularly IL-2, IFN- γ and IL-17 which is a primary target of CsA's immunomodulatory action.

1.2. Cíl studie a hypotéza cíle 1: Zkoumat a porovnat účinek 12 týdnů lokálních 0,1% CSA terapie na oční povrchové vrozené a adaptivní imunitní buňky pomocí zobrazování-staticky-IVCM a zábavnou ivcm (imunitní buněčná hustota, morfodynamická chování), fenotyping imunitní buňky), a analýza slzy a trhací analýza (slzová analýza) (fenotyping a trhací analýzu (slz a analýza (hustota slzů (imunitní hustota a trhavá analýza) (hustota slzy) (imunitní buněk a trhací analýza (hustota slzy) a slzová analýza (hustota slbku (imunitní buněk a trhavá analýza (hustota slzy a průtok. Test korálků Hodnocení slzů IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-y) Hypotéza: CSA bude mít inhibiční účinek na oční povrch vrozený a adaptivní imunitní hustotu buněk, morfologii a trhací cytokiny v DED.

Cíl 2: Posoudit souvislost mezi příznaky DED, symptomům a charakteristikami imunitních buněk a roztržením cytokinů v hypotéze DED: Existují přímý vztah mezi charakteristikami imunitních buněk, stručnými cytokiny a DED příznaky.

Cíl 3: Zkoumat časový vztah mezi změnami imunitních buněk a hypotézou klinického zlepšení: změny charakteristik imunitních buněk (hustota a dynamika) a zánětlivé markery předcházejí klinickému zlepšení příznaků a příznaků DED po léčbě CSA.