El efecto de la ciclosporina A tópica al 0.1% para 12 semanas en las células inmunes de la superficie del ojo en ojos secos

El sistema inmune juega un papel fundamental en la patogénesis de la enfermedad ocular seca (DED). Un mayor nivel de varias citocinas lágrimas, quimiocinas, expresión de moléculas de HLA -DR y la activación de células presentadoras de antígeno: células dendríticas (DC) y los linfocitos juegan un papel central en la patogénesis DED. El aumento de las expresiones de las células T CD4+ y CD8+ en la superficie ocular de los pacientes con DED sugieren un papel potencial de la inmunidad adaptativa en la cronicidad DED. La presencia de células presentadoras de antígeno en la superficie ocular y la regulación positiva de MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 e IFN-γ y otras moléculas coestimuladoras en las lágrimas de pacientes DED indica una posible activación de la respuesta inmune adaptativa local.

La conjuntiva sirve como sitio primario para el análisis inmunológico e histoquímico en enfermedades de la superficie ocular. Los investigadores han empleado varias técnicas para estudiar la inmunología de la superficie ocular, como la citología de impresión, la biopsia conjuntival y a través de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, la inmunocitoquímica y la microscopía de la luz. La citometría de flujo es una técnica poderosa que permite el análisis fenotípico de las células a través del inmunomarcaje de expresiones extracelulares de varios marcadores de células inmunes. Un aumento de las expresiones de marcadores de activación como HLA-DR y varias poblaciones de células inmunes, incluidas las células T (CD3+, CD4+y CD8+), las células B, las células asesinas naturales y los monocitos (células CD14+) se observan en DED usando citometría de flujo en muestras de citología conjuntival.

Históricamente, el estudio de las células inmunes de superficie ocular humana requirió técnicas invasivas. Con el advenimiento de la microscopía confocal in vivo (IVCM), ha permitido la visualización no invasiva en tiempo real de las células inmunes epiteliales de la superficie ocular (EICS) y los nervios corneales. En los últimos 20 años, los investigadores han utilizado IVCM para examinar los cambios patológicos en varios trastornos de la superficie ocular. Es evidente a partir de varios estudios IVCM que el EICS corneal sufre cambios como el aumento de la densidad y los cambios en su morfología en todas las formas de DED. El IVCM estático convencional captura imágenes de sección en un solo punto de tiempo de la EIC corneal, y su análisis se limita a su densidad y morfología. Si bien la naturaleza in vivo de IVCM previene el fenotipado directo de las células inmunes, se cree que las células observadas son DCs basadas en sus características morfológicas. Por lo tanto, los autores han utilizado el término EICS para definir la densidad de las células inmunes (densidad EIC) cuantificada usando IVCM estático. A diferencia de este método, que limita la identificación del tipo de células inmunes, una técnica novedosa recientemente pionera llamada IVCM funcional (FUN-IVCM) permite la identificación de los tipos de células inmunes en la córnea al observar su morfodinámica. Este método implica capturar imágenes consecutivas de secuencia y escaneo de volumen durante un período de 30-40 minutos, con intervalos de 4-5 minutos. Las imágenes se vuelven a lanzar el tiempo para identificar el comportamiento dinámico de cada célula inmune. Según su comportamiento dinámico y morfología, las células se pueden diferenciar en células T epiteliales (altamente móvil, tamaño corporal más pequeño) o células dendríticas (DC, menos móvil, tamaño corporal más grande con dendritas). También se pueden identificar los macrófagos del estroma corneal anterior. Las imágenes liberadas por tiempo permiten el examen de parámetros adicionales de motilidad celular, como la velocidad instantánea y la velocidad de desplazamiento.

El tratamiento de primera línea para DED son las lágrimas artificiales. Pero, debido a la naturaleza crónica de la enfermedad y las exacerbaciones agudas recurrentes, se ha implementado en gran medida terapias antiinflamatorias. En consecuencia, muchos de los enfoques terapéuticos actuales se dirigen a diversas vías inflamatorias, con el objetivo de romper el círculo vicioso de DED. Tanto los corticosteroides tópicos como los inmunosupresores reducen efectivamente la inflamación en DED. Los corticosteroides tópicos se usan en DED para controlar exacerbaciones agudas de inflamación de la superficie ocular, pero su uso a largo plazo está limitado por sus efectos secundarios oculares iatrogénicos. Para contrastar esto, los agentes inmunosupresores como la ciclosporina A (CSA) tienen un efecto antiinflamatorio potencial, con efectos secundarios locales mínimos. El uso de CSA en DED crónico puede reducir significativamente la tinción de la superficie ocular, el enrojecimiento, los marcadores inflamatorios y mejora los síntomas del ojo seco. En resumen, CSA amortigua la proliferación de células T al inhibir la calcineurina de la fosfatasa. CSA funciona en diferentes pasos de la respuesta inmune, durante la presentación del antígeno y la interacción de las células DC-T. Las células inmunes innatas ahora se consideran objetivos potencialmente importantes de CSA y pueden reflejar la orientación simultánea de las células dendríticas, los macrófagos y los neutrófilos. En la superficie ocular, la evidencia preliminar sugiere que CSA puede reducir significativamente marcadores de activación como HLA-DR, CD11c, ciertos marcadores de apoptosis y linfocitos T conjuntivales acompañaron la mejora clínica en pacientes con DED tratados con CSA.

Mientras que un puñado de ensayos clínicos han evidenciado la eficacia de CSA para reducir la inflamación y mejorar los síntomas de DED, el efecto directo de CSA en las células inmunes de superficie ocular no se ha estudiado en detalle utilizando estática y utilizando Fun-IVCM. Dado el efecto de CSA en las células inmunes innatas y adaptativas, los autores plantean la hipótesis de que el uso de CSA al 0,1% tendrá un efecto inhibitorio en la respuesta inmune de la superficie ocular junto con la mejora de los signos y síntomas de DED en comparación con su vehículo. Este artículo destaca el protocolo de ensayo clínico aleatorizado para estudiar exhaustivamente el efecto de CSA en el sistema inmune innato y adaptativo de la superficie ocular en DED. El estudio investigará el impacto de CSA en las DC (CD11C+ DCS, HLA-DR), las poblaciones de células T helper (células T CD4+) a través del análisis de marcadores de linfocitos (CD45, CD3, CD4) y ​​sus citocinas asociadas (cyquodinas de la ruta Th1), particularmente IL-2, si N-γ e IL-17, que es un objetivo primario de CSA de CSA.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex Ensayo de perlas que evalúa las concentraciones de lágrimas de hipótesis de IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ): CSA tendrá un efecto inhibitorio sobre la densidad de células inmunes innatas y adaptativas de la superficie ocular, la morfología y las citocinas lágrimas en DED.

Objetivo 2: Evaluar la asociación entre los signos de DED, los síntomas y las características de las células inmunes y las citocinas lágrimas en la hipótesis de DED: existen una relación directa entre las características de las células inmunes, las citocinas de la tetina y los signos de DED, los síntomas.

Objetivo 3: Investigar la relación temporal entre los cambios en las células inmunes y la hipótesis de la mejora clínica: los cambios en las características de las células inmunes (densidad y dinámica) y los marcadores inflamatorios preceden a la mejora clínica en los signos y síntomas de DED después del tratamiento con CSA.