L'effetto della ciclosporina topica dello 0,1% per 12 settimane sulle cellule immunitarie della superficie degli occhi negli occhi asciutti

Il sistema immunitario svolge un ruolo fondamentale nella patogenesi della malattia da occhio secco (DED). Un aumento del livello di diverse citochine lacrime, chemochine, espressione delle molecole HLA -DR e attivazione di cellule di presentazione dell'antigene - cellule dendritiche (DC) e linfociti svolgono tutti un ruolo centrale nella patogenesi DED. Le espressioni aumentate di cellule T CD4+ e CD8+ nella superficie oculare dei pazienti DED suggeriscono un potenziale ruolo dell'immunità adattiva nella cronicità DED. La presenza di cellule presentanti antigene nella superficie oculare e l'upregolazione di MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 e IFN-γ e altre molecole co-stimolanti nelle lacrime di pazienti ded indicano una possibile attivazione della risposta immunitaria adattativa locale.

La congiuntiva funge da sito primario per l'analisi immunologica e istochimica nelle malattie della superficie oculare. I ricercatori hanno impiegato varie tecniche per studiare l'immunologia della superficie oculare come citologia di impressione, biopsia congiuntivale e attraverso reazione a catena della polimerasi in tempo reale, immunocitochimica e microscopia ottica. La citometria a flusso è una potente tecnica che consente l'analisi fenotipica delle cellule attraverso l'immunolabeling delle espressioni extracellulari di vari marcatori di cellule immunitarie. Un aumento delle espressioni di marcatori di attivazione come HLA-DR e varie popolazioni di cellule immunitarie tra cui cellule T (CD3+, CD4+e CD8+), cellule B, cellule killer naturali e monociti (cellule CD14+) sono osservati in DED usando la citometria a flusso su campioni di citologia dell'impressione congiuntiva.

Storicamente, lo studio delle cellule immunitarie di superficie oculare umana richiedeva tecniche invasive. Con l'avvento della microscopia confocale in vivo (IVCM), ha consentito una visualizzazione in tempo reale e non invasiva delle cellule immunitarie epiteliali di superficie oculare (EICS) e dei nervi corneali. Negli ultimi 20 anni, i ricercatori hanno usato IVCM per esaminare i cambiamenti patologici in vari disturbi della superficie oculare. È evidente da diversi studi IVCM che l'EIC corneale subisce cambiamenti come l'aumento della densità e i cambiamenti nella sua morfologia in tutte le forme di DED. L'IVCM statico convenzionale cattura le immagini della sezione in un singolo punto temporale degli EIC corneali e la loro analisi è limitata alla sua densità e morfologia. Mentre la natura in vivo di IVCM impedisce il fenotipizzazione delle cellule immunitarie dirette, si ritiene prevalentemente le cellule osservate in base alle loro caratteristiche morfologiche. Pertanto, gli autori hanno usato il termine EICS per definire la densità delle cellule immunitarie (densità EIC) quantificata usando static-IVCM. A differenza di questo metodo, che limita l'identificazione del tipo di cellula immunitaria, una nuova tecnica recentemente pioniera chiamata IVCM funzionale (Fun-IVCM) consente di identificare i tipi di cellule immunitarie nella cornea osservando la loro morfodinamica. Questo metodo prevede l'acquisizione di immagini consecutive di sequenza e scansione del volume per un periodo di 30-40 minuti, con intervalli di 4-5 minuti. Le immagini vengono quindi interrotte in tempo per identificare il comportamento dinamico di ciascuna cellula immunitaria. Sulla base del loro comportamento dinamico e della morfologia, le cellule possono essere differenziate in cellule T epiteliali (altamente mobili, dimensioni corporei più piccole) o cellule dendritiche (DC, meno mobili, dimensioni corporee più grandi con dendriti). I macrofagi stromali corneali anteriori possono anche essere identificati. Le immagini a scapito a tempo consentono l'esame di ulteriori parametri di motilità cellulare, come la velocità istantanea e la velocità di spostamento.

Il trattamento di prima linea per DED sono lacrime artificiali. Ma, a causa della natura cronica della malattia e delle esacerbazioni acute ricorrenti che le terapie antinfiammatorie sono state ampiamente implementate. Di conseguenza, molti degli attuali approcci terapeutici mirano a vari percorsi infiammatori, con l'obiettivo di rompere il circolo vizioso di DED. Entrambi i corticosteroidi topici e gli immunosoppressori riducono efficacemente l'infiammazione in Ded. I corticosteroidi topici sono usati in DED per controllare le esacerbazioni acute dell'infiammazione della superficie oculare, ma il loro uso a lungo termine è limitato dai loro effetti collaterali oculari iatrogeni. Per contrastare questo, agenti immunosoppressivi come la ciclosporina A (CSA) hanno un potenziale effetto antinfiammatorio, con effetti collaterali locali minimi. L'uso di CSA nella DED cronica può ridurre significativamente la colorazione della superficie oculare, il rossore, i marcatori infiammatori e migliora i sintomi degli occhi secchi. In breve, la CSA smorza la proliferazione delle cellule T inibendo la fosfatasi calcineurina. CSA funziona a diversi passaggi della risposta immunitaria, durante la presentazione dell'antigene e l'interazione delle cellule DC-T. Le cellule immunitarie innate sono ora viste come obiettivi potenzialmente importanti di CSA e possono riflettere il targeting simultaneo di cellule dendritiche, macrofagi e neutrofili. Nelle prove preliminari della superficie oculare suggeriscono che il CSA può ridurre significativamente i marcatori di attivazione come HLA-DR, CD11C, alcuni marcatori di apoptosi e i linfociti T congiuntivali hanno accompagnato il miglioramento clinico nei pazienti DED trattati con CSA.

Mentre una manciata di studi clinici ha evidenziato l'efficacia del CSA nel ridurre l'infiammazione e nel migliorare i sintomi di DED, l'effetto diretto del CSA sulle cellule immunitarie di superficie oculare non è stato studiato in dettaglio usando statico e usando Fun-IVCM. Dato l'effetto del CSA sulle cellule immunitarie innate e adattive, gli autori ipotizzano che l'uso di CSA 0,1% avrà un effetto inibitorio sulla risposta immunitaria della superficie oculare insieme al miglioramento dei segni e dei sintomi di DED rispetto al suo veicolo. Questo documento evidenzia il protocollo di prova clinica randomizzato per studiare in modo completo l'effetto del CSA sul sistema immunitario innato e adattivo di superficie oculare in DED. Lo studio studierà l'impatto del CSA su DCS (CD11c+ DCS, HLA-DR), popolazioni di cellule T helper (cellule T CD4+) attraverso l'analisi dei marcatori di linfociti (CD45, CD3, CD4) e le loro immunomozione associata (TH1 percorso citochine), in particolare IL-2, IFN-γ e IL-17 che è un obiettivo primario di cSA di CSA.

1.2. Studio Obiettivi e ipotesi Obiettivo 1: studiare e confrontare l'effetto della terapia csa 0,1% topica su superficie oculare innata e cellule immunitarie adattative usando imaging-statico-IVCM e divertimento-IV-IVCM (detenzione delle cellule immunita Saggio di perline che valuta le concentrazioni lacrime di ipotesi IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ): il CSA avrà un effetto inibitorio sulla superficie oculare innata e la densità delle cellule immunitarie adattative, la morfologia e le citochine lacrime in DED.

Obiettivo 2: valutare l'associazione tra segni DED, sintomi e caratteristiche delle cellule immunitarie e citochine lacrime nell'ipotesi DED: una relazione diretta tra caratteristiche delle cellule immunitarie, citochine di teatro e segni DED, sintomi.

Obiettivo 3: studiare la relazione temporale tra i cambiamenti delle cellule immunitarie e l'ipotesi del miglioramento clinico: cambiamenti nelle caratteristiche delle cellule immunitarie (densità e dinamica) e marcatori infiammatori precedono il miglioramento clinico nei segni e i sintomi del DED dopo il trattamento CSA.