Effekten av 0,1% aktuell ciclosporin A for 12 uker på øyeoverflateimmuncellene i tørre øyne

Immunsystemet spiller en sentralt rolle i tørr øyesykdom (DED) patogenese. Et økt nivå av flere tårecytokiner, kjemokiner, ekspresjon av HLA -DR -molekyler og aktivering av antigenpresentasjonsceller - dendritiske celler (DC) og lymfocytter spiller alle en sentral rolle i DED -patogenesen. De økte uttrykkene for CD4+ og CD8+ T -celler i den okulære overflaten til DED -pasienter antyder en potensiell rolle som adaptiv immunitet i DED -kronisitet. Tilstedeværelsen av antigenpresenterende celler i den okulære overflaten og oppreguleringen av MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 og IFN-y og andre ko-stimulerende molekyler i tårene til DED-pasienter indikerer en mulig aktivering av den lokale adaptive immunresponsen.

Konjunktivaen fungerer som et primært sted for immunologisk og histokjemisk analyse ved okulære overflatesykdommer. Forskere har benyttet forskjellige teknikker for å studere okulær overflateimmunologi som inntrykkcytologi, konjunktivalbiopsi og gjennom sanntids polymerasekjedereaksjon, immunocytokjemi og lysmikroskopi. Flowcytometri er en kraftig teknikk som gir mulighet for fenotypisk analyse av celler gjennom immunolabeling av ekstracellulære uttrykk for forskjellige immuncellemarkører. Et økte uttrykk for aktiveringsmarkører som HLA-DR og forskjellige immuncellepopulasjoner inkludert T-celler (CD3+, CD4+og CD8+), B-celler, naturlige killerceller og monocytter (CD14+celler) observeres i DED ved bruk av flytcytometri på konjunktivale inntrykk cytologprøver.

Historisk sett krevde å studere immunceller i humane okulære overflater invasive teknikker. Med bruk av in vivo konfokal mikroskopi (IVCM), har det muliggjort sanntids, ikke-invasiv visualisering av okulære overflateepitelimmunceller (EIC) og hornhinnenver. I løpet av de siste 20 årene har forskere brukt IVCM for å undersøke patologiske endringer i forskjellige okulære overflatesykdommer. Det fremgår av flere IVCM -studier at hornhinnen EICs gjennomgår endringer som økning i tetthet og endringer i dens morfologi i alle former for DED. Konvensjonelle statiske IVCM tar seksjonsbilder på et enkelt tidspunkt for hornhinnen EIC -er, og deres analyse er begrenset til dens tetthet og morfologi. Mens in vivo naturen til IVCM forhindrer direkte immuncellefenotyping, antas de observerte cellene hovedsakelig å være DC -er basert på deres morfologiske egenskaper. Derfor har forfatterne brukt begrepet EIC-er for å definere immuncelleretthet (EIC-tetthet) kvantifisert ved bruk av statisk-IVCM. I motsetning til denne metoden, som begrenser identifisering av immuncelletypen, muliggjør en nylig banebrytende, ny teknikk kalt funksjonell IVCM (FUN-IVCM) identifisering av immuncelletypene i hornhinnen ved å observere deres morfodynamikk. Denne metoden innebærer å fange påfølgende sekvens og volumskannebilder over en periode på 30-40 minutter, med intervaller på 4-5 minutter. Bildene blir deretter tidsavløp for å identifisere dynamisk oppførsel til hver immuncelle. Basert på deres dynamiske atferd og morfologi, kan celler differensieres til enten epiteliale T -celler (svært bevegelige, mindre kroppsstørrelse) eller dendritiske celler (DC, mindre bevegelige, større kroppsstørrelse med dendritter). Fremre hornhinnen stromale makrofager kan også identifiseres. Tidsoppgraderte bilder tillater undersøkelse av ytterligere cellemotilitetsparametere, for eksempel øyeblikkelig hastighet og forskyvningshastighet.

Første linjebehandlingen for DED er kunstige tårer. Men på grunn av sykdommenes kroniske natur og tilbakevendende akutte forverringer er antiinflammatoriske terapier i stor grad blitt implementert. Følgelig er mange av de nåværende terapeutiske tilnærmingene rettet mot forskjellige betennelsesveier, og tar sikte på å bryte den ondskapsfulle syklusen til DED. Både aktuelle kortikosteroider og immunsuppressiva reduserer effektivt betennelse i DED. Aktuelle kortikosteroider brukes i DED for å kontrollere akutte forverringer av betennelse i den okulære overflaten, men deres langsiktige bruk er begrenset av deres iatrogene okulære bivirkninger. For å kontrastere dette har immunsuppressive midler som ciclosporin A (CSA) potensiell antiinflammatorisk effekt, med minimale lokale bivirkninger. Bruken av CSA i kronisk DED kan redusere okulær overflatefarging, rødhet, inflammatoriske markører og forbedrer tørre øyesymptomer. Kort sagt, CSA demper T -celleproliferasjonen ved å hemme fosfatase -kalsinurin. CSA fungerer på forskjellige trinn i immunresponsen, under antigenpresentasjon og DC-T-celleinteraksjon. Medfødte immunceller blir nå sett på som potensielt viktige mål for CSA og kan reflektere samtidig målretting av dendritiske celler, makrofager og nøytrofiler. I den okulære overflaten antyder foreløpige bevis på at CSA kan redusere aktiveringsmarkører som HLA-DR, CD11c betydelig, visse apoptosemarkører og konjunktival T-lymfocytter ledsaget den kliniske forbedringen i CSA-behandlede DED-pasienter.

Mens en håndfull kliniske studier har vist effektiviteten av CSA for å redusere betennelse og forbedre symptomene på DED, har den direkte effekten av CSA på immunceller i okulær overflate ikke blitt studert i detalj ved bruk av statisk og ved bruk av FUN-IVCM. Gitt effekten av CSA på både medfødte og adaptive immunceller, antar forfatterne at bruk av 0,1% CSA vil ha en hemmende effekt på den okulære overflateimmunresponsen sammen med forbedring av tegn og symptomer på DED sammenlignet med kjøretøyet. Denne artikkelen belyser den randomiserte kliniske studieprotokollen for å studere effekten av CSA på det okulære overflate medfødte og adaptive immunsystemet i DED. The study will investigate CsA's impact on DCs (CD11c+ DCs, HLA-DR), T helper cell populations (CD4+ T cells) through analysis of lymphocyte markers (CD45, CD3, CD4) and their associated cytokines (Th1 pathway cytokines), particularly IL-2, IFN- γ and IL-17 which is a primary target of CsA's Immunmodulerende virkning.

1.2. Studie mål og hypotese Mål 1: Å undersøke og sammenligne effekten av 12 uker (Multiplex perleanalyse som vurderer tårekonsentrasjoner av IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-y) Hypotese: CSA vil ha en hemmende effekt på det okulære overflaten i innfødt og adaptiv immuncelletetthet, morfologi og florytokiner i dedit.

Mål 2: Å vurdere assosiasjonen mellom DED -tegn, symptomer og immuncelleegenskaper og rive cytokiner i DED -hypotese: Det eksisterer et direkte forhold mellom immuncelleegenskaper, spenekytokiner og DED -tegn, symptomer.

Mål 3: Å undersøke det tidsmessige forholdet mellom immuncelleendringer og klinisk forbedringshypotese: endringer i immuncelleegenskaper (tetthet og dynamikk) og inflammatoriske markører går foran klinisk forbedring i tegn og symptomer på DED etter CSA -behandling.