Эффект 0,1% актуального циклоспорина А в течение 12 недель на иммунные клетки поверхности глаз в сухих глазах

Иммунная система играет ключевую роль в патогенезе сухого глаза (DED). Повышенный уровень нескольких разрывных цитокинов, хемокинов, экспрессии молекул HLA -DR и активация антигена, представляющих клетки - дендритные клетки (DCS), и лимфоциты играют центральную роль в патогенезе DED. Повышенные экспрессии CD4+ и CD8+ T -клеток на поверхности глаз пациентов с DED предполагают потенциальную роль адаптивного иммунитета в хроничности DED. Присутствие антиген-презентативных клеток на поверхности глаз и активация MHC II, IL-2, IL-17, IL-6 и IFN-γ и других костимулирующих молекул в разрывах пациентов с DED указывает на возможную активацию локального адаптивного иммунного ответа.

Конъюнктива служит первичным местом для иммунологического и гистохимического анализа при поверхностных заболеваниях глаз. Исследователи использовали различные методы для изучения иммунологии поверхности глаз, таких как цитология впечатления, биопсия конъюнктивальной биопсии и полимеразная цепная реакция в реальном времени, иммуноцитохимия и световая микроскопия. Проточная цитометрия - это мощный метод, который позволяет фенотипическому анализу клеток путем иммуноалубирования внеклеточных экспрессии различных маркеров иммунных клеток. Повышенные экспрессии маркеров активации, такие как HLA-DR и различные популяции иммунных клеток, включая Т-клетки (CD3+, CD4+и CD8+), B-клетки, природные клетки-киллеры и моноциты (CD14+клетки), наблюдаются в DED с использованием проточной цитометрии на образцах цитологии конъюнктивальной цитологии.

Исторически, изучение иммунных клеток с поверхностными клетками человека требовало инвазивных методов. С появлением конфокальной микроскопии in vivo (IVCM) позволила в реальном времени неинвазивную визуализацию эпителиальных иммунных клеток (EICS) и роговицы. За последние 20 лет исследователи использовали IVCM для изучения патологических изменений при различных расстройствах поверхности глаз. Из нескольких исследований IVCM видно, что Corneal EICS претерпевает такие изменения, как увеличение плотности и изменения в ее морфологии во всех формах DED. Обычный статический IVCM фиксирует изображения секций в один момент времени роговицы EIC, и их анализ ограничен его плотностью и морфологией. В то время как природа IVCM in vivo предотвращает фенотипирование прямого иммунного клеток, наблюдаемые клетки преимущественно считают DCS, основанные на их морфологических характеристиках. Следовательно, авторы использовали термин EIC для определения плотности иммунных клеток (плотность EIC), количественного с использованием Static-IVCM. В отличие от этого метода, который ограничивает идентификацию типа иммунных клеток, недавно новой, новой методики, называемой функциональной IVCM (FUN-IVCM), позволяет идентифицировать типы иммунных клеток в роговице путем наблюдения за их морфодинамикой. Этот метод включает в себя захват последовательных последовательности и изображений сканирования объема в течение 30-40-минутного периода с интервалами 4-5 минут. Затем изображения заполняются для идентификации динамического поведения каждой иммунной клетки. Основываясь на их динамическом поведении и морфологии, клетки могут быть дифференцированы в эпителиальные Т -клетки (очень подвижный, меньший размер тела) или дендритные клетки (DC, менее подвижный, больший размер тела с дендритами). Передние стромальные макрофаги роговицы также могут быть идентифицированы. Изображения с учетом времени позволяют исследовать дополнительные параметры подвижности ячейки, такие как мгновенная скорость и скорость смещения.

Первое лечение DED-это искусственные слезы. Но из-за хронической природы заболевания и рецидивирующих острых обострений была в значительной степени осуществлена. Следовательно, многие из нынешних терапевтических подходов нацелены на различные воспалительные пути, направленные на то, чтобы сломать порочный цикл DED. Как местные кортикостероиды, так и иммунодепрессанты эффективно снижают воспаление в DED. Актуальные кортикостероиды используются в DED для контроля острых обострений воспаления поверхности глаз, но их долгосрочное использование ограничено их ятрогенным побочным эффектами глаз. Чтобы противопоставить это, иммунодепрессивные агенты, такие как циклоспорин А (CSA), имеют потенциальный противовоспалительный эффект с минимальными локальными побочными эффектами. Использование CSA в хроническом DED может значительно снизить окрашивание поверхности глаз, покраснение, маркеры воспаления и улучшать симптомы сухого глаза. Вкратце, CSA ослабляет пролиферацию Т -клеток, ингибируя кальциневрин фосфатазы. CSA функционирует на разных этапах иммунного ответа, во время презентации антигена и взаимодействия клеток DC-T. Врожденные иммунные клетки в настоящее время рассматриваются как потенциально важные мишени CSA и могут отражать одновременное нацеливание дендритных клеток, макрофагов и нейтрофилов. В предварительных данных о глазной поверхности предполагается, что CSA может значительно снизить маркеры активации, такие как HLA-DR, CD11C, определенные маркеры апоптоза и конъюнктивальные Т-лимфоциты, сопровождали клиническое улучшение пациентов с DED, получавших CSA.

В то время как несколько клинических испытаний свидетельствуют о эффективности CSA в снижении воспаления и улучшении симптомов DED, прямое влияние CSA на иммунные клетки поверхности глаз не было подробно изучено с использованием статического и использования Fun-IVCM. Учитывая влияние CSA как на врожденные, так и на адаптивные иммунные клетки, авторы предполагают, что использование 0,1% CSA будет иметь ингибирующее влияние на иммунный ответ поверхности глаз наряду с улучшением признаков и симптомов DED по сравнению с его носителем. В этой статье подчеркивается рандомизированный протокол клинических испытаний для всестороннего изучения влияния CSA на врожденную и адаптивную иммунную систему глаз на глазной поверхности в DED. В исследовании будет изучено влияние CSA на DCS (CD11C+ DCS, HLA-DR), популяции T-Helper Cell (CD4+ T-клетки) посредством анализа маркеров лимфоцитов (CD45, CD3, CD4) и связанных с ними цитокинов (TH1-цитокины), особенно IL-2, IFN-γ и IL-17, который является первичной целевой цели CSA.

1.2. Study aims and hypothesis Aim 1: To investigate and compare the effect of 12-weeks topical 0.1% CsA therapy on ocular surface innate and adaptive immune cells using imaging - Static-IVCM and Fun-IVCM (immune cell density, morphology and morphodynamic behaviours), immune cell phenotyping using conjunctival impression cytology and flow cytometry techniques and tear cytokine analysis (Multiplex bead Анализ, оценивая концентрации слез в гипотезе IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17, IL-23, IFN-γ): CSA будет оказывать ингибирующее влияние на врожденную и адаптивную плотность иммунных иммунных клеток, морфологию и слезоточивые цитокины.

Цель 2: Чтобы оценить связь между признаками DED, симптомами и характеристиками иммунных клеток и разрывами цитокинов в гипотезе DED: прямая связь между характеристиками иммунных клеток, цитокинами со ранениями и признаками DED, существуют симптомы.

Цель 3: Изучить временную связь между изменениями иммунных клеток и гипотезой клинического улучшения: изменения в характеристиках иммунных клеток (плотность и динамика) и маркерами воспаления предшествуют клиническому улучшению признаков и симптомов DED после лечения CSA.