歯周組織再生における肉芽組織の役割

本研究は、骨下および骨上の肉芽組織の生化学的（組織治癒および再生）および微生物学的（感染性）特性を調査し、非喫煙者と喫煙者の歯周炎患者におけるそれらの特性を比較することを目的としています。 これらの目的を達成するために、3つの研究目標を設定しました：1. 非喫煙歯周炎患者から採取した骨下および骨上肉芽組織の治癒促進および再生特性を、オープンエンドのプロテオミクスツールを使用して比較する。 2. 非喫煙歯周炎患者から採取した骨下および骨上肉芽組織の感染性成分を、マイクロバイオーム分析を用いて記述する。 3. 骨下肉芽組織の選択された治癒促進、再生、および病原性マーカーに対する喫煙の影響を比較する。 我々の主な仮説は、喫煙者と非喫煙者の骨下および骨上肉芽組織は、その治癒促進、再生、および微生物病原性特性において互いに異なり、骨下肉芽組織は歯周治療後の組織再生のための貴重な資源であるということです。 すべての個人の人口統計学的データが記録され、各歯の6箇所からの全口目視プラーク指数（PI％）、ポケット探針深度（PPD）、臨床的付着レベル（CAL）、およびポケット探針時の出血（BoP％）スコアが記録されます。 根尖部X線写真が撮影されます。 外科的処置の前に、すべての患者は全口スケーリングおよびルートデブライドメントを受けます。 残存骨欠損の外科的治療中に、まず骨上肉芽組織サンプルが採取されます。 その後、フラップが挙上され、骨内肉芽組織サンプルが採取されます。 サンプルは、100 µlのPBS（リン酸緩衝生理食塩水、pH = 7.2）溶液を含むEppendorfチューブに収められ、実験室分析まで-80℃で保存されます。 プロテオミクス分析 - 組織サンプルは、Precellysビードミルホモジナイザー（Bertin）を使用して、2.8 mmセラミック（酸化ジルコニウム）ビーズ（Cayman Chemical）を含む2 ml強化チューブ内の100 mM炭酸水素アンモニウム（ABC）緩衝液で均質化されます。 マイクロバイオーム分析 - DNAは、製造元の推奨事項（Qiagen、ドイツ）に軽微な変更を加えて、DNeasy Blood and Tissueキットを使用して組織サンプルから抽出されます。 Tapestation 2200（Genomic DNAおよびD1000スクリーンテープ、Agilent、USA）を使用したゲル電気泳動は、DNA抽出物の一部の製品サイズと純度を検証するために使用されます。 DNA濃度は、NanodropおよびQubit dsDNA BRアッセイキット（Thermo Fisher Scientific、USA）の両方を使用して測定されます。

標的生化学分析 - すべての組織サンプルから、炎症促進性（IL-1β、IL-6、TNF-α）および抗炎症性（IL-4、IL-10）サイトカイン、マクロファージ活性化関連ケモカイン（単球走化性因子C-Cモチーフケモカインリガンド2（CCL-2/MCP-1）、C-Cモチーフケモカインリガンド8（CCL-8/MCP-2）、C-X-Cモチーフケモカインリガンド9（CXCL9/MIG）、およびC-Cモチーフリガンド3（CCL-3/MIP-1α））、および骨リモデリングマーカー（オステオプロテゲリン、核内因子κ-βリガンド受容体活性化因子（RANKL）、オステオカルシン、オステオポンチン）レベルが、フェムトグラム/mlレベルのこれらのマーカーを検出できるLuminexおよびSimoa技術によって測定されます。 Luminex 200ビードベース多重アッセイは、トゥルク大学歯学部の研究所で利用可能です。 Simoa HD-Xアナライザーは、トゥルク大学中央病院の研究所で利用可能です。 統計分析：コルモゴロフ-スミルノフ検定によるデータ分布の検出後、正規分布の場合には反復t検定またはANOVAが統計分析に使用され、非正規分布の場合にはマン・ホイットニーU検定またはクラスカル・ウォリス検定が使用されます。 治癒および病原性マーカー相関間の相関を決定する際には、分布に応じてパラメトリックなピアソン検定またはノンパラメトリックなスピアマン検定が使用されます。 喫煙、性別、および年齢調整を伴う二項ロジスティック回帰分析が、分析物レベルと治癒反応との関連を評価するために実施されます。 P < 0.05が有意と見なされます。 このプロジェクトに対する倫理的承認は、2025年2月28日にリガ・ストラディンシュ大学研究倫理委員会から受けました。 (2-PĒK-4/434/2025)。 各患者は、研究目的と手順について口頭および書面によるインフォームドコンセント文書を通じて説明を受けます。 彼らは、患者保護法に従い、いつでも参加を撤回する権利があることを通知されます。 患者はまた、研究からの撤退が、歯周病専門医による将来の治療計画に影響を与えないことを保証されます。 さらに、各患者は、この研究中に得られたデータが、匿名かつ統合された形で出版物を執筆するために使用されることを通知されます。 すべての患者来院は文書化され、各患者には匿名の患者番号が割り当てられます。 医療文書への必要な修正は、誤ったテキストを一本線で消し、隣に正しいテキストを書くことによって行われます。 臨床医は修正の隣に署名します。 研究中に何らかの副作用が観察された場合、倫理委員会に通知されます。