Granulationsvævs rolle i periodontal regeneration

Denne undersøgelse har til formål at undersøge de biokemiske (vævshelings- og regenererende) og mikrobielle (infektiøse) egenskaber af infra- og supra-osseøst granulationsvæv og sammenligne disse karakteristika hos ikke-rygende og ryggende periodontitispatienter. For at opnå disse mål har vi designet 3 forskningsmål: 1. At sammenligne de pro-helings- og regenererende egenskaber af infra- og supra-osseøst granulationsvæv høstet fra ikke-ryggende periodontitispatienter ved hjælp af åbne proteomik-værktøjer. 2. At beskrive den infektiøse komponent af infra- og supra-osseøst granulationsvæv høstet fra ikke-ryggende periodontitispatienter ved hjælp af mikrobiomanalyse. 3. At sammenligne effekten af rygning på udvalgte pro-helings-, regenererende og virulensmarkører af infra-osseøst granulationsvæv. Vores hovedhypotese er, at infra-osseøst og supra-osseøst granulationsvæv hos rygere og ikke-rygere adskiller sig fra hinanden med hensyn til deres pro-helings-, regenererende og mikrobielle virulensegenskaber, og at infra-osseøst granulationsvæv er en værdifuld ressource til vævsregeneration efter periodontalbehandling. Demografien for alle individer vil blive registreret, og fuldmund synlig plakindex (PI%), lommedybde ved sondering (PPD), klinisk tilknytningsniveau (CAL) og blødning ved sondering (BoP%) score fra seks steder på hver tand vil blive registreret. Periapikale røntgenbilleder vil blive taget. Før de kirurgiske indgreb vil alle patienter modtage fuldmund skalering og rodafskrabning. Under den kirurgiske behandling af de resterende knogledefekter vil først de supra-osseøse granulationsvævsprøver blive indsamlet. Derefter vil en lap blive løftet, og den intra-osseøse granulationsvævsprøve vil blive indsamlet. Prøver vil blive placeret i Eppendorf-rør indeholdende 100 µl PBS (phosphatbuffersaltvand, pH = 7,2) opløsning og vil blive opbevaret ved -80°C indtil laboratorieanalyser. Proteomikanalyse - vævsprøver vil blive homogeniseret i 100 mM ammoniumbicarbonat (ABC) buffer i 2 ml forstærkede rør indeholdende 2,8 mm keramiske (zirconiumoxid) kugler (Cayman Chemical) ved hjælp af Precellys Bead Mill Homogenizer (Bertin). Mikrobiomanalyse - DNA vil blive ekstraheret fra vævsprøver ved hjælp af DNeasy Blood and Tissue kit efter producentens anbefalinger (Qiagen, Tyskland) med mindre modifikationer. Gelelektroforese ved hjælp af Tapestation 2200 (Genomic DNA og D1000 screentapes, Agilent, USA) vil blive brugt til at validere produktstørrelse og renhed af en delmængde af DNA-ekstrakter. DNA-koncentration vil blive målt ved hjælp af både Nanodrop og Qubit dsDNA BR Assay kit (Thermo Fisher Scientific, USA).

Målrettet biokemisk analyse - fra alle vævsprøver vil proinflammatoriske (IL-1β, IL-6 og TNF-α) og antiinflammatoriske (IL-4, IL-10) cytokiner, makrofagaktiveringsrelaterede kemokiner (monocyt kemotaktant protein C-C motiv kemokin ligand 2 (CCL-2/MCP-1), C-C motiv kemokin ligand 8 (CCL-8/ MCP-2), C-X-C motiv kemokin ligand 9 (CXCL9/MIG), og C-C motiv ligand 3 (CCL-3/MIP-1α)), og knogleomsætningsmarkør (osteoprotegerin, Receptor activator of nuclear factor kappa-β ligand (RANKL), osteocalcin, osteopontin) niveauer blive målt ved Luminex og Simoa teknikker, som kan detektere disse markører på niveauer af femtogram/ml. Luminex 200 bead-baseret multiplex assay er tilgængelig på laboratorierne på Institut for Odontologi, Turku Universitet. Simoa HD-X analyzer er tilgængelig på laboratorierne på Turku Universitetscentralsygehus. Statistisk analyse: Efter detektering af datadistributionen med Kolmogorov-Smirnov testen, vil gentaget t-test eller ANOVA i tilfælde af normal distribution blive brugt i den statistiske analyse, og Mann-Whitney U eller Kruskal Wallis tests i tilfælde af ikke-normal distribution. Ved bestemmelse af korrelationen mellem helings- og virulensmarkørkorrelationer, vil den parametriske Pearson test eller den ikke-parametriske Spearman test blive brugt i henhold til distributionen. En binær logistisk regressionsanalyse med rygning, køn og aldersjustering vil blive udført for at vurdere sammenhængen mellem analytternes niveauer og helingsresponsen. P < 0,05 vil blive betragtet som signifikant. Etisk godkendelse for dette projekt er modtaget fra Riga Stradins Universitets Forskningsetiske Komité den 28.02.2025. (2-PĒK-4/434/2025). Hver patient vil blive informeret om forskningsmålene og proceduren både mundtligt og gennem et skriftligt informeret samtykkeformular. De vil blive underrettet om, at de i henhold til patientbeskyttelseslovene har ret til at trække sig fra deltagelsen til enhver tid. Patienten vil også blive forsikret om, at tilbagetrækning fra undersøgelsen ikke vil påvirke deres fremtidige behandlingsregime med deres periodontolog. Derudover vil hver patient blive informeret om, at de data, der indsamles under denne forskning, vil blive brugt til at skrive publikationer på en anonym og syntetiseret måde. Alle patientbesøg vil blive dokumenteret, og hver patient vil blive tildelt et anonymt patientnummer. Eventuelle nødvendige rettelser af medicinske dokumenter vil blive foretaget ved at strege den forkerte tekst ud med en enkelt streg og skrive den korrekte tekst ved siden af. Klinikeren vil underskrive ved siden af rettelsen. Hvis der observeres bivirkninger under undersøgelsen, vil den Etiske Komité blive underrettet.