Роль грануляционной ткани в регенерации пародонта

Данное исследование направлено на изучение биохимических (заживление тканей и регенеративных) и микробных (инфекционных) свойств инфра- и супра- костных грануляционных тканей и сравнение этих характеристик у некурящих и курящих пациентов с пародонтитом. Для достижения этих целей мы разработали 3 исследовательские задачи: 1. Сравнить про-заживляющие и регенеративные свойства инфра- и супра-костных грануляционных тканей, полученных от некурящих пациентов с пародонтитом, с использованием инструментов открытой протеомики. 2. Описать инфекционный компонент инфра- и супра-костных грануляционных тканей, полученных от некурящих пациентов с пародонтитом, с помощью анализа микробиома. 3. Сравнить влияние курения на выбранные маркеры про-заживления, регенерации и вирулентности инфра-костных грануляционных тканей. Наша основная гипотеза заключается в том, что инфра-костные и супра-костные грануляционные ткани курильщиков и некурящих отличаются друг от друга по своим про-заживляющим, регенеративным и микробным вирулентным свойствам, а инфра-костная грануляционная ткань является ценным ресурсом для регенерации тканей после пародонтологического лечения. Демографические данные всех участников будут записаны, а также будут зафиксированы индексы видимого зубного налета (PI%), глубина зондирования кармана (PPD), уровень клинического прикрепления (CAL) и показатели кровоточивости при зондировании (BoP%) с шести участков каждого зуба. Будут сделаны периапикальные рентгенограммы. Перед хирургическими вмешательствами все пациенты пройдут полную профессиональную гигиену полости рта и удаление зубных отложений с поверхности корней. Во время хирургического лечения остаточных костных дефектов сначала будут собраны образцы супра-костной грануляционной ткани. Затем будет поднят лоскут, и будет собран образец интра-костной грануляционной ткани. Образцы будут помещены в пробирки Эппендорфа, содержащие 100 мкл раствора PBS (фосфатный буферный солевой раствор, pH = 7,2), и будут храниться при -80°C до лабораторных анализов. Протеомный анализ - образцы тканей будут гомогенизированы в 100 мМ аммонийном бикарбонатном (ABC) буфере в 2 мл армированных пробирках, содержащих 2,8 мм керамические (оксид циркония) шарики (Cayman Chemical), с использованием гомогенизатора Precellys Bead Mill (Bertin). Анализ микробиома - ДНК будет экстрагирована из образцов тканей с использованием набора DNeasy Blood and Tissue в соответствии с рекомендациями производителя (Qiagen, Германия) с небольшими модификациями. Гель-электрофорез с использованием Tapestation 2200 (Genomic DNA и D1000 скринтейпы, Agilent, США) будет использоваться для проверки размера продукта и чистоты части экстрактов ДНК. Концентрация ДНК будет измерена с использованием как Nanodrop, так и набора Qubit dsDNA BR Assay (Thermo Fisher Scientific, США).

Целевой биохимический анализ - из всех образцов тканей будут измерены уровни провоспалительных (IL-1β, IL-6 и TNF-α) и противовоспалительных (IL-4, IL-10) цитокинов, хемокинов, связанных с активацией макрофагов (моноцитарный хемоаттрактантный белок C-C мотив хемокиновый лиганд 2 (CCL-2/MCP-1), C-C мотив хемокиновый лиганд 8 (CCL-8/ MCP-2), C-X-C мотив хемокиновый лиганд 9 (CXCL9/MIG) и C-C мотив лиганд 3 (CCL-3/MIP-1α)), и маркера ремоделирования кости (остеопротегерин, лиганд рецептора-активатора ядерного фактора каппа-В (RANKL), остеокальцин, остеопонтин) с помощью методов Luminex и Simoa, которые могут обнаруживать эти маркеры на уровнях фемтограмм/мл. Мультиплексный анализ на основе шариков Luminex 200 доступен в лабораториях Института стоматологии Университета Турку. Анализатор Simoa HD-X доступен в лабораториях Центральной университетской больницы Турку. Статистический анализ: После определения распределения данных с помощью теста Колмогорова-Смирнова, в статистическом анализе будет использоваться повторный t-тест или ANOVA в случае нормального распределения, а тесты Манна-Уитни или Краскела-Уоллиса в случае ненормального распределения. При определении корреляции между маркерами заживления и вирулентности, в зависимости от распределения, будет использоваться параметрический тест Пирсона или непараметрический тест Спирмена. Будет проведен бинарный логистический регрессионный анализ с поправкой на курение, пол и возраст для оценки связи между уровнями аналитов и ответом на заживление. P < 0,05 будет считаться значимым. Этическое одобрение для этого проекта было получено от Комитета по этике исследований Рижского университета им. Страдыньша 28.02.2025. (2-ПЭК-4/434/2025). Каждый пациент будет проинформирован о целях и процедурах исследования как устно, так и через письменную форму информированного согласия. Им будет сообщено, что в соответствии с законами о защите пациентов, они имеют право отказаться от участия в любое время. Пациенту также будет гарантировано, что отказ от участия в исследовании не повлияет на его дальнейший план лечения у пародонтолога. Кроме того, каждый пациент будет проинформирован, что данные, полученные в ходе этого исследования, будут использованы для написания публикаций в анонимном и обобщенном виде. Все визиты пациентов будут документированы, и каждому пациенту будет присвоен анонимный номер. Любые необходимые исправления в медицинских документах будут вноситься путем зачеркивания неправильного текста одной линией и написания правильного текста рядом. Клиницист подпишется рядом с исправлением. Если во время исследования будут наблюдаться какие-либо побочные эффекты, Комитет по этике будет уведомлен.