Rollingen til granuleringstvev i periodontal regenerering

Denne studien har som mål å undersøke de biokjemiske (vevshelbredelse og regenererende) og mikrobielle (infeksjonsrelaterte) egenskapene til infra- og supra-osseøst granuleringstvev og sammenligne disse egenskapene hos ikke-røkende og røkende periodontittpasienter. For å oppnå disse målene har vi utformet 3 forskningsmål: 1. Å sammenligne de pro-helbredende og regenererende egenskapene til infra- og supra-osseøst granuleringstvev hentet fra ikke-røkende periodontittpasienter ved bruk av åpne proteomikkverktøy. 2. Å beskrive den infeksjonsrelaterte komponenten av infra- og supra-osseøst granuleringstvev hentet fra ikke-røkende periodontittpasienter ved bruk av mikrobiomanalyse. 3. Å sammenligne effekten av røyking på utvalgte pro-helbredende, regenererende og virulensmarkører av infra-osseøst granuleringstvev. Vår hovedhypotese er at infra-osseøst og supra-osseøst granuleringstvev hos røkere og ikke-røkere skiller seg fra hverandre når det gjelder deres pro-helbredende, regenererende og mikrobielle virulensegenskaper, og at infra-osseøst granuleringstvev er en verdifull ressurs for vevsregenerering etter periodontalbehandling. Demografien til alle individer vil bli registrert, og fullmunns synlig plakkindeks (PI%), lommeprøvingsdybde (PPD), klinisk festenivå (CAL) og blødning ved sondering (BoP%)-skår fra seks steder på hver tann vil bli registrert. Periapikale røntgenbilder vil bli tatt. Før de kirurgiske inngrepene vil alle pasienter motta fullmunns skalling og rotdebridement. Under den kirurgiske behandlingen av de resterende beindefektene vil først supra-osseøse granuleringstvevprøver bli samlet inn. Deretter vil en lap bli løftet, og den intra-osseøse granuleringstvevprøven vil bli samlet inn. Prøver vil bli plassert i Eppendorf-rør som inneholder 100 µl PBS (fosfatbuffersaltvann, pH = 7,2)-løsning og vil bli oppbevart ved -80°C til laboratorieanalyser. Proteomikkanalyse - vevsprøver vil bli homogenisert i 100 mM ammoniumbikarbonat (ABC)-buffer i 2 ml forsterkede rør som inneholder 2,8 mm keramiske (sirkoniumoksid) kuler (Cayman Chemical) ved bruk av Precellys Bead Mill Homogenizer (Bertin). Mikrobiomanalyse - DNA vil bli ekstrahert fra vevsprøver ved bruk av DNeasy Blood and Tissue-kitsettet i henhold til produsentens anbefalinger (Qiagen, Tyskland) med mindre modifikasjoner. Gelelektroforese ved bruk av Tapestation 2200 (Genomic DNA og D1000 screentapes, Agilent, USA) vil bli brukt for å validere produktstørrelse og renhet for en undergruppe av DNA-ekstrakter. DNA-konsentrasjon vil bli målt ved bruk av både Nanodrop og Qubit dsDNA BR Assay-kit (Thermo Fisher Scientific, USA).

Målrettet biokjemisk analyse - fra alle vevsprøver vil proinflammatoriske (IL-1β, IL-6 og TNF-α) og antiinflammatoriske (IL-4, IL-10) cytokiner, makrofagaktiveringsrelaterte kjemokiner (monocytkjemotaktisk protein C-C-motiv kjemokinligand 2 (CCL-2/MCP-1), C-C-motiv kjemokinligand 8 (CCL-8/MCP-2), C-X-C-motiv kjemokinligand 9 (CXCL9/MIG), og C-C-motiv ligand 3 (CCL-3/MIP-1α)), og beinremodelleringsmarkør (osteoprotegerin, receptoraktivatør av nukleærfaktor kappa-β-ligand (RANKL), osteokalcin, osteopontin)-nivåer bli målt ved Luminex- og Simoa-teknikker, som kan oppdage disse markørene på nivåer av femtogram/ml. Luminex 200 bead-basert multipleksanalyse er tilgjengelig i laboratoriene ved Institutt for odontologi, Universitetet i Turku. Simoa HD-X-analysator er tilgjengelig i laboratoriene ved Turku universitetssykehus. Statistisk analyse: Etter påvisning av datadistribusjonen med Kolmogorov-Smirnov-testen vil gjentatt t-test eller ANOVA ved normalfordeling bli brukt i den statistiske analysen, og Mann-Whitney U eller Kruskal Wallis-tester ved ikke-normalfordeling. Ved fastsettelse av korrelasjonen mellom helbredelses- og virulensmarkørkorrelasjoner vil den parametriske Pearson-testen eller den ikke-parametriske Spearman-testen bli brukt i henhold til distribusjonen. En binær logistisk regresjonsanalyse med røyking, kjønn og aldersjustering vil bli utført for å vurdere sammenhengen mellom analyttenivåene og helbredelsesresponsen. P < 0,05 vil bli ansett som signifikant. Etisk godkjenning for dette prosjektet er mottatt fra Riga Stradins University Research Ethics Committee den 28.02.2025. (2-PĒK-4/434/2025). Hver pasient vil bli informert om forskningsmålene og prosedyrene både muntlig og gjennom et skriftlig informert samtykkeskjema. De vil bli underrettet om at de, i henhold til pasientbeskyttelseslover, har rett til å trekke seg fra deltakelse når som helst. Pasienten vil også bli forsikret om at uttrekking fra studien ikke vil påvirke deres fremtidige behandlingsregime med sin periodontolog. I tillegg vil hver pasient bli informert om at dataene som er innhentet under denne forskningen vil bli brukt til å skrive publikasjoner på en anonym og syntetisert måte. Alle pasientbesøk vil bli dokumentert, og hver pasient vil bli tildelt et anonymt pasientnummer. Eventuelle nødvendige korreksjoner i medisinske dokumenter vil bli gjort ved å stryke over feil tekst med en enkelt linje og skrive den korrekte teksten ved siden av. Klinikeren vil signere ved siden av korreksjonen. Hvis det observeres bivirkninger under studien, vil etisk komité bli underrettet.