Le rôle du tissu de granulation dans la régénération parodontale

Cette étude vise à étudier les propriétés biochimiques (cicatrisation tissulaire et régénération) et microbiennes (infectieuses) des tissus de granulation infra- et supra-osseux et à comparer ces caractéristiques chez les patients atteints de parodontite non-fumeurs et fumeurs. Pour atteindre ces objectifs, nous avons conçu 3 objectifs de recherche : 1. Comparer les propriétés pro-cicatrisantes et régénératrices des tissus de granulation infra- et supra-osseux prélevés chez des patients atteints de parodontite non-fumeurs en utilisant des outils de protéomique ouverts. 2. Décrire la composante infectieuse des tissus de granulation infra- et supra-osseux prélevés chez des patients atteints de parodontite non-fumeurs en utilisant l'analyse du microbiome. 3. Comparer l'effet du tabagisme sur les marqueurs sélectionnés de pro-cicatrisation, de régénération et de virulence des tissus de granulation infra-osseux. Notre hypothèse principale est que les tissus de granulation infra-osseux et supra-osseux des fumeurs et des non-fumeurs diffèrent les uns des autres en termes de leurs propriétés pro-cicatrisantes, régénératrices et de virulence microbienne, et que le tissu de granulation infra-osseux est une ressource précieuse pour la régénération tissulaire après le traitement parodontal. Les données démographiques de tous les individus seront enregistrées, et l'indice de plaque visible en bouche entière (PI%), la profondeur de poche au sondage (PPD), le niveau d'attache clinique (CAL) et les scores de saignement au sondage (BoP%) de six sites de chaque dent seront enregistrés. Des radiographies rétro-alvéolaires seront prises. Avant les applications chirurgicales, tous les patients recevront un détartrage et un surfaçage radiculaire en bouche entière. Pendant le traitement chirurgical des défauts osseux résiduels, les échantillons de tissu de granulation supra-osseux seront d'abord collectés. Ensuite, un lambeau sera soulevé et l'échantillon de tissu de granulation intra-osseux sera collecté. Les échantillons seront placés dans des tubes Eppendorf contenant 100 µl de solution PBS (tampon phosphate salin, pH = 7,2) et seront stockés à -80 °C jusqu'aux analyses de laboratoire. Analyse protéomique - les échantillons de tissus seront homogénéisés dans un tampon bicarbonate d'ammonium 100 mM (ABC) dans des tubes renforcés de 2 ml contenant des billes en céramique (oxyde de zirconium) de 2,8 mm (Cayman Chemical) en utilisant un homogénéisateur à billes Precellys (Bertin). Analyse du microbiome - l'ADN sera extrait des échantillons de tissus en utilisant le kit DNeasy Blood and Tissue suivant les recommandations du fabricant (Qiagen, Allemagne) avec des modifications mineures. L'électrophorèse sur gel en utilisant Tapestation 2200 (bandes Genomic DNA et D1000, Agilent, USA) sera utilisée pour valider la taille du produit et la pureté d'un sous-ensemble d'extraits d'ADN. La concentration d'ADN sera mesurée en utilisant à la fois Nanodrop et le kit Qubit dsDNA BR Assay (Thermo Fisher Scientific, USA).

Analyse biochimique ciblée - à partir de tous les échantillons de tissus, les cytokines pro-inflammatoires (IL-1β, IL-6 et TNF-α) et anti-inflammatoires (IL-4, IL-10), les chimiokines liées à l'activation des macrophages (protéine chimioattractante des monocytes ligand de chimiokine de motif C-C 2 (CCL-2/MCP-1), ligand de chimiokine de motif C-C 8 (CCL-8/MCP-2), ligand de chimiokine de motif C-X-C 9 (CXCL9/MIG) et ligand de motif C-C 3 (CCL-3/MIP-1α)), et les marqueurs de remodelage osseux (ostéoprotégérine, ligand de l'activateur du récepteur du facteur nucléaire kappa-β (RANKL), ostéocalcine, ostéopontine) seront mesurés par les techniques Luminex et Simoa, qui peuvent détecter ces marqueurs à des niveaux de femtogramme/ml. Le test multiplex à base de billes Luminex 200 est disponible dans les laboratoires de l'Institut de Dentisterie, Université de Turku. L'analyseur Simoa HD-X est disponible dans les laboratoires du Centre Hospitalier Universitaire de Turku. Analyse statistique : Suite à la détection de la distribution des données avec le test de Kolmogorov-Smirnov, le test t apparié ou l'ANOVA en cas de distribution normale seront utilisés dans l'analyse statistique, et les tests U de Mann-Whitney ou de Kruskal Wallis en cas de distribution non normale. Pour déterminer la corrélation entre les corrélations des marqueurs de cicatrisation et de virulence, le test paramétrique de Pearson ou le test non paramétrique de Spearman sera utilisé selon la distribution. Une analyse de régression logistique binaire avec ajustement pour le tabagisme, le sexe et l'âge sera réalisée pour évaluer l'association entre les niveaux des analytes et la réponse de cicatrisation. P < 0,05 sera considéré comme significatif. L'approbation éthique pour ce projet a été reçue du Comité d'Éthique de la Recherche de l'Université de Riga Stradins le 28.02.2025. (2-PĒK-4/434/2025). Chaque patient sera informé des objectifs et des procédures de la recherche à la fois verbalement et par le biais d'un formulaire de consentement éclairé écrit. Ils seront informés que, conformément aux lois sur la protection des patients, ils ont le droit de se retirer de la participation à tout moment. Il sera également assuré au patient que le retrait de l'étude n'affectera pas son futur régime de traitement avec son parodontiste. De plus, chaque patient sera informé que les données obtenues pendant cette recherche seront utilisées pour rédiger des publications de manière anonyme et synthétisée. Toutes les visites des patients seront documentées, et chaque patient se verra attribuer un numéro de patient anonyme. Toute correction nécessaire des documents médicaux sera effectuée en barrant le texte incorrect d'un seul trait et en écrivant le texte correct à côté. Le clinicien signera à côté de la correction. Si des effets secondaires sont observés pendant l'étude, le Comité d'Éthique en sera informé.