El papel del tejido de granulación en la regeneración periodontal

Este estudio tiene como objetivo investigar las propiedades bioquímicas (cicatrización tisular y regenerativa) y microbianas (infecciosas) de los tejidos de granulación infraóseos y supraóseos, y comparar esas características en pacientes con periodontitis no fumadores y fumadores. Para lograr estos objetivos, diseñamos 3 objetivos de investigación: 1. Comparar las propiedades pro-cicatrización y regenerativas de los tejidos de granulación infraóseos y supraóseos recolectados de pacientes con periodontitis no fumadores utilizando herramientas de proteómica abiertas. 2. Describir el componente infeccioso de los tejidos de granulación infraóseos y supraóseos recolectados de pacientes con periodontitis no fumadores mediante análisis del microbioma. 3. Comparar el efecto del tabaquismo en marcadores seleccionados pro-cicatrización, regenerativos y de virulencia de los tejidos de granulación infraóseos. Nuestra hipótesis principal es que los tejidos de granulación infraóseos y supraóseos de fumadores y no fumadores difieren entre sí en términos de sus propiedades pro-cicatrización, regenerativas y de virulencia microbiana, y que el tejido de granulación infraóseo es un recurso valioso para la regeneración tisular después del tratamiento periodontal. Se registrarán los datos demográficos de todos los individuos, y se registrarán los índices de placa visible de boca completa (PI%), la profundidad de sondaje de bolsas (PPD), el nivel de inserción clínica (CAL) y los porcentajes de sangrado al sondaje (BoP%) de seis sitios de cada diente. Se tomarán radiografías periapicales. Antes de las aplicaciones quirúrgicas, todos los pacientes recibirán raspado y alisado radicular de boca completa. Durante el tratamiento quirúrgico de los defectos óseos residuales, primero se recolectarán las muestras de tejido de granulación supraóseo. Posteriormente, se levantará un colgajo y se recolectará la muestra de tejido de granulación intraóseo. Las muestras se colocarán en tubos Eppendorf que contengan 100 µl de solución de PBS (tampón fosfato salino, pH = 7,2) y se almacenarán a -80°C hasta los análisis de laboratorio. Análisis de proteómica: las muestras de tejido se homogeneizarán en tampón de bicarbonato de amonio 100 mM (ABC) en tubos reforzados de 2 ml que contengan cuentas de cerámica (óxido de circonio) de 2,8 mm (Cayman Chemical) utilizando un homogeneizador de molino de cuentas Precellys (Bertin). Análisis del microbioma: el ADN se extraerá de las muestras de tejido utilizando el kit DNeasy Blood and Tissue siguiendo las recomendaciones del fabricante (Qiagen, Alemania) con ligeras modificaciones. Se utilizará electroforesis en gel con Tapestation 2200 (cintas Genomic DNA y D1000, Agilent, EE. UU.) para validar el tamaño del producto y la pureza de un subconjunto de extractos de ADN. La concentración de ADN se medirá utilizando tanto Nanodrop como el kit Qubit dsDNA BR Assay (Thermo Fisher Scientific, EE. UU.).

Análisis bioquímico dirigido: de todas las muestras de tejido, se medirán los niveles de citocinas proinflamatorias (IL-1β, IL-6 y TNF-α) y antiinflamatorias (IL-4, IL-10), quimiocinas relacionadas con la activación de macrófagos (proteína quimioatrayente de monocitos ligando de quimiocina de motivo C-C 2 (CCL-2/MCP-1), ligando de quimiocina de motivo C-C 8 (CCL-8/MCP-2), ligando de quimiocina de motivo C-X-C 9 (CXCL9/MIG) y ligando de motivo C-C 3 (CCL-3/MIP-1α)), y marcadores de remodelación ósea (osteoprotegerina, ligando del activador del receptor del factor nuclear kappa-β (RANKL), osteocalcina, osteopontina) mediante las técnicas Luminex y Simoa, que pueden detectar estos marcadores a niveles de femtogramo/ml. El ensayo multiplex basado en perlas Luminex 200 está disponible en los laboratorios del Instituto de Odontología de la Universidad de Turku. El analizador Simoa HD-X está disponible en los laboratorios del Hospital Universitario Central de Turku. Análisis estadístico: tras la detección de la distribución de los datos con la prueba de Kolmogorov-Smirnov, se utilizará la prueba t de Student repetida o ANOVA en caso de distribución normal en el análisis estadístico, y las pruebas U de Mann-Whitney o Kruskal Wallis en caso de distribución no normal. Para determinar la correlación entre las correlaciones de los marcadores de cicatrización y virulencia, se utilizará la prueba paramétrica de Pearson o la prueba no paramétrica de Spearman según la distribución. Se realizará un análisis de regresión logística binaria con ajuste por tabaquismo, sexo y edad para evaluar la asociación entre los niveles de los analitos y la respuesta de cicatrización. Se considerará significativo P < 0,05. La aprobación ética para este proyecto ha sido recibida del Comité de Ética en Investigación de la Universidad de Riga Stradins el 28.02.2025. (2-PĒK-4/434/2025). Cada paciente será informado sobre los objetivos y procedimientos de la investigación tanto verbalmente como a través de un formulario de consentimiento informado por escrito. Se les notificará que, de acuerdo con las leyes de protección del paciente, tienen derecho a retirarse de la participación en cualquier momento. También se asegurará al paciente que retirarse del estudio no afectará su futuro régimen de tratamiento con su periodoncista. Además, se informará a cada paciente que los datos obtenidos durante esta investigación se utilizarán para escribir publicaciones de manera anónima y sintetizada. Todas las visitas de los pacientes serán documentadas, y a cada paciente se le asignará un número de paciente anónimo. Cualquier corrección necesaria en los documentos médicos se realizará tachando el texto incorrecto con una sola línea y escribiendo el texto correcto al lado. El clínico firmará junto a la corrección. Si se observan efectos secundarios durante el estudio, se notificará al Comité de Ética.