치주 재생에서 육아 조직의 역할

이 연구는 비흡연자 및 흡연자 치주염 환자에서 골내 및 골외 육아조직의 생화학적(조직 치유 및 재생) 및 미생물학적(감염) 특성을 조사하고 이러한 특성을 비교하는 것을 목표로 합니다. 이러한 목표를 달성하기 위해 3가지 연구 목적을 설계했습니다: 1. 비흡연 치주염 환자에서 채취한 골내 및 골외 육아조직의 친-치유 및 재생 특성을 개방형 단백체학 도구를 사용하여 비교합니다. 2. 비흡연 치주염 환자에서 채취한 골내 및 골외 육아조직의 감염 성분을 마이크로바이옴 분석을 사용하여 설명합니다. 3. 흡연이 골내 육아조직의 선택된 친-치유, 재생 및 독력 표지자에 미치는 영향을 비교합니다. 우리의 주요 가설은 흡연자와 비흡연자의 골내 및 골외 육아조직이 친-치유, 재생 및 미생물 독력 특성 측면에서 서로 다르며, 골내 육아조직은 치주 치료 후 조직 재생을 위한 가치 있는 자원이라는 것입니다. 모든 개인의 인구통계학적 정보가 기록되며, 각 치아의 6개 부위에서 전구강 가시적 플라크 지수(PI%), 탐침 치주낭 깊이(PPD), 임상 부착 수준(CAL) 및 탐침 시 출혈(BoP%) 점수가 기록됩니다. 치근단 방사선 사진이 촬영됩니다. 수술 적용 전에 모든 환자는 전구강 스케일링 및 치근면 활택술을 받습니다. 잔여 골 결손의 수술적 치료 중에, 먼저 골외 육아조직 샘플이 수집됩니다. 이후, 플랩을 거상하고 골내 육아조직 샘플이 수집됩니다. 샘플은 100μl의 PBS(인산 완충 식염수, pH = 7.2) 용액이 들어 있는 Eppendorf 튜브에 넣어 -80°C에서 실험실 분석까지 보관됩니다. 단백체학 분석 - 조직 샘플은 Precellys 비드 밀 균질기(Bertin)를 사용하여 2.8mm 세라믹(지르코늄 산화물) 비드(Cayman Chemical)가 들어 있는 2ml 강화 튜브에서 100mM 암모늄 중탄산염(ABC) 완충액으로 균질화됩니다. 마이크로바이옴 분석 - DNA는 제조사의 권장 사항(Qiagen, Germany)에 따라 DNeasy Blood and Tissue 키트를 사용하여 조직 샘플에서 추출되며, 일부 수정이 가해집니다. Tapestation 2200(Genomic DNA 및 D1000 screentapes, Agilent, USA)을 사용한 겔 전기영동은 DNA 추출물의 일부에 대한 제품 크기와 순도를 검증하는 데 사용됩니다. DNA 농도는 Nanodrop과 Qubit dsDNA BR Assay 키트(Thermo Fisher Scientific, USA)를 모두 사용하여 측정됩니다.

표적 생화학 분석 - 모든 조직 샘플에서 염증 촉진(IL-1β, IL-6 및 TNF-α) 및 항염증(IL-4, IL-10) 사이토카인, 대식세포 활성화 관련 케모카인(단핵구 주화성 단백질 C-C 모티프 케모카인 리간드 2(CCL-2/MCP-1), C-C 모티프 케모카인 리간드 8(CCL-8/ MCP-2), C-X-C 모티프 케모카인 리간드 9(CXCL9/MIG) 및 C-C 모티프 리간드 3(CCL-3/MIP-1α)), 그리고 골 재형성 표지자(오스테오프로테게린, 핵 인자 카파-B 리간드 수용체 활성제(RANKL), 오스테오칼신, 오스테오폰틴) 수준이 Luminex 및 Simoa 기술로 측정됩니다. 이 기술은 펨토그램/ml 수준에서 이러한 표지자를 검출할 수 있습니다. Luminex 200 비드 기반 다중 분석은 투르쿠 대학교 치의학 연구소의 실험실에서 이용 가능합니다. Simoa HD-X 분석기는 투르쿠 대학 병원의 실험실에서 이용 가능합니다. 통계 분석: Kolmogorov-Smirnov 검정으로 데이터 분포를 확인한 후, 정규 분포인 경우 반복 t-검정 또는 ANOVA를 통계 분석에 사용하고, 비정규 분포인 경우 Mann-Whitney U 또는 Kruskal Wallis 검정을 사용합니다. 치유 및 독력 표지자 상관 관계를 결정할 때, 분포에 따라 매개변수적 Pearson 검정 또는 비모수적 Spearman 검정이 사용됩니다. 흡연, 성별 및 연령 조정을 포함한 이항 로지스틱 회귀 분석이 분석물 수준과 치유 반응 간의 연관성을 평가하기 위해 수행됩니다. P < 0.05는 유의한 것으로 간주됩니다. 이 프로젝트에 대한 윤리적 승인은 2025년 2월 28일 리가 스트라딘스 대학교 연구 윤리 위원회로부터 받았습니다. (2-PĒK-4/434/2025). 각 환자는 연구 목적과 절차에 대해 구두 및 서면 동의서를 통해 설명을 받습니다. 그들은 환자 보호 법률에 따라 언제든지 참여를 철회할 권리가 있다는 통지를 받습니다. 환자는 또한 연구에서 철회해도 향후 치주과 전문의와의 치료 계획에 영향을 미치지 않을 것이라는 보장을 받습니다. 추가적으로, 각 환자는 이 연구 중 얻은 데이터가 익명 및 종합된 방식으로 출판물 작성에 사용될 것임을 통지받습니다. 모든 환자 방문은 문서화되며, 각 환자에게는 익명 환자 번호가 부여됩니다. 의료 문서에 필요한 수정은 잘못된 텍스트를 한 줄로 지우고 옆에 올바른 텍스트를 작성하여 이루어집니다. 임상의는 수정 옆에 서명합니다. 연구 중 어떤 부작용이 관찰되면 윤리 위원회에 통보됩니다.