De rol van granulatieweefsel in parodontale regeneratie

Dit onderzoek heeft als doel de biochemische (weefselgenezing en regeneratieve) en microbiële (infectieuze) eigenschappen van infra- en supra-osseuze granulatieweefsels te onderzoeken en deze kenmerken te vergelijken bij niet-rokende en rokende parodontitispatiënten. Om deze doelen te bereiken, hebben we 3 onderzoeksdoelstellingen opgesteld: 1. Het vergelijken van de pro-genezende en regeneratieve eigenschappen van infra- en supra-osseuze granulatieweefsels die zijn verzameld van niet-rokende parodontitispatiënten met behulp van open-einde proteomica tools. 2. Het beschrijven van de infectieuze component van infra- en supra-osseuze granulatieweefsels die zijn verzameld van niet-rokende parodontitispatiënten met behulp van microbiome-analyse. 3. Het vergelijken van het effect van roken op geselecteerde pro-genezende, regeneratieve en virulentiemarkers van infra-osseuze granulatieweefsels. Onze hoofdhypothese is dat infra-osseuze en supra-osseuze granulatieweefsels van rokers en niet-rokers van elkaar verschillen wat betreft hun pro-genezende, regeneratieve en microbiële virulentie-eigenschappen, en dat infra-osseuze granulatieweefsel een waardevolle bron is voor weefselregeneratie na parodontale behandeling. De demografie van alle individuen wordt geregistreerd, en full-mouth zichtbare plaque-index (PI%), pocketdiepte (PPD), klinisch aanhechtingsniveau (CAL) en bloeding bij sonderen (BoP%) scores van zes locaties van elke tand worden geregistreerd. Periapicale röntgenfoto's worden gemaakt. Voor de chirurgische ingrepen ontvangen alle patiënten full-mouth scaling en worteldebridement. Tijdens de chirurgische behandeling van de resterende botdefecten worden eerst de supra-osseuze granulatieweefselmonsters verzameld. Vervolgens wordt een flap opgeheven en wordt het intra-osseuze granulatieweefselmonster verzameld. Monsters worden geplaatst in Eppendorf-buisjes met 100 µl PBS (fosfaatbuffer zoutoplossing, pH = 7,2) oplossing en worden opgeslagen bij -80°C tot laboratoriumanalyses. Proteomica-analyse - weefselmonsters worden gehomogeniseerd in 100 mM ammoniumbicarbonaat (ABC) buffer in 2 ml versterkte buisjes met 2,8 mm keramische (zirkoniumoxide) kralen (Cayman Chemical) met behulp van Precellys Bead Mill Homogenizer (Bertin). Microbioom-analyse - DNA wordt geëxtraheerd uit weefselmonsters met behulp van de DNeasy Blood and Tissue kit volgens de aanbevelingen van de fabrikant (Qiagen, Duitsland) met kleine aanpassingen. Gel-elektroforese met Tapestation 2200 (Genomic DNA en D1000 screentapes, Agilent, VS) wordt gebruikt om de productgrootte en zuiverheid van een subset van DNA-extracten te valideren. DNA-concentratie wordt gemeten met zowel Nanodrop als Qubit dsDNA BR Assay kit (Thermo Fisher Scientific, VS).

Gerichte biochemische analyse - van alle weefselmonsters worden pro-inflammatoire (IL-1β, IL-6 en TNF-α) en anti-inflammatoire (IL-4, IL-10) cytokinen, macrofaag-activatie gerelateerde chemokinen (monocyte chemoattarctant protein C-C motif chemokine ligand 2 (CCL-2/MCP-1), C-C motif chemokine ligand 8 (CCL-8/ MCP-2), C-X-C motif chemokine ligand 9 (CXCL9/MIG), en C-C motif ligand 3 (CCL-3/MIP-1α)), en bot-remodelleringsmarker (osteoprotegerine, Receptor activator of nuclear factor kappa-β ligand (RANKL), osteocalcine, osteopontine) niveaus gemeten met Luminex en Simoa technieken, die deze markers kunnen detecteren op niveaus van femtogram/ml. Luminex 200 bead-based multiplex assay is beschikbaar in de laboratoria van het Instituut voor Tandheelkunde, Universiteit van Turku. Simoa HD-X analyzer is beschikbaar in de laboratoria van het Turku Universitair Medisch Centrum. Statistische analyse: Na detectie van de dataverdeling met de Kolmogorov-Smirnov test, worden herhaalde t-test of ANOVA gebruikt in geval van normale verdeling in de statistische analyse, en de Mann-Whitney U of Kruskal Wallis tests in geval van niet-normale verdeling. Bij het bepalen van de correlatie tussen genezings- en virulentiemarker correlaties, wordt de parametrische Pearson-test of de niet-parametrische Spearman-test gebruikt volgens de verdeling. Een binaire logistische regressieanalyse met roken, geslacht en leeftijdsaanpassing wordt uitgevoerd om de associatie tussen de analytniveaus en de genezingsrespons te beoordelen. P < 0,05 wordt als significant beschouwd. Ethische goedkeuring voor dit project is ontvangen van de Riga Stradins University Research Ethics Committee op 28.02.2025. (2-PĒK-4/434/2025). Elke patiënt wordt geïnformeerd over de onderzoeksdoelstellingen en procedures zowel verbaal als via een schriftelijk geïnformeerd consentformulier. Zij worden geïnformeerd dat zij, in overeenstemming met patiëntenbeschermingswetten, het recht hebben om op elk moment deelname te stoppen. De patiënt wordt ook verzekerd dat stoppen met de studie hun toekomstige behandelingsregime met hun parodontoloog niet zal beïnvloeden. Bovendien wordt elke patiënt geïnformeerd dat de tijdens dit onderzoek verkregen gegevens op anonieme en gesynthetiseerde wijze worden gebruikt om publicaties te schrijven. Alle patiëntbezoeken worden gedocumenteerd en elke patiënt krijgt een anoniem patiëntnummer toegewezen. Noodzakelijke correcties in de medische documenten worden aangebracht door de incorrecte tekst met één regel door te halen en de correcte tekst ernaast te schrijven. De clinicus tekent naast de correctie. Als er bijwerkingen worden waargenomen tijdens de studie, wordt de Ethische Commissie op de hoogte gesteld.