Die Rolle von Granulationsgewebe bei der parodontalen Regeneration

Diese Studie zielt darauf ab, die biochemischen (Gewebeheilung und Regeneration) und mikrobiellen (infektiösen) Eigenschaften von infra- und supraossären Granulationsgeweben zu untersuchen und diese Merkmale bei nichtrauchenden und rauchenden Parodontitis-Patienten zu vergleichen. Um diese Ziele zu erreichen, haben wir 3 Forschungsziele festgelegt: 1. Die pro-heilenden und regenerativen Eigenschaften von infra- und supraossären Granulationsgeweben, die von nichtrauchenden Parodontitis-Patienten entnommen wurden, mithilfe von offenen Proteomik-Tools zu vergleichen. 2. Die infektiöse Komponente von infra- und supraossären Granulationsgeweben, die von nichtrauchenden Parodontitis-Patienten entnommen wurden, mithilfe von Mikrobiom-Analysen zu beschreiben. 3. Die Auswirkung des Rauchens auf ausgewählte pro-heilende, regenerative und Virulenzmarker von infraossären Granulationsgeweben zu vergleichen. Unsere Haupt-Hypothese ist, dass infraossäre und supraossäre Granulationsgewebe von Rauchern und Nichtrauchern sich in Bezug auf ihre pro-heilenden, regenerativen und mikrobiellen Virulenzeigenschaften voneinander unterscheiden, und dass infraossäres Granulationsgewebe eine wertvolle Ressource für die Geweberegeneration nach parodontaler Behandlung ist. Die demografischen Daten aller Personen werden erfasst, und der sichtbare Plaque-Index (PI%) im gesamten Mund, die Sondierungstiefe (PPD), das klinische Attachmentniveau (CAL) und die Blutung bei Sondierung (BoP%) von sechs Stellen jedes Zahns werden aufgezeichnet. Es werden apikale Röntgenaufnahmen angefertigt. Vor den chirurgischen Eingriffen erhalten alle Patienten eine vollständige Mundscaling und Wurzelglättung. Während der chirurgischen Behandlung der verbleibenden Knochendefekte werden zunächst die supraossären Granulationsgewebeproben entnommen. Anschließend wird ein Lappen präpariert, und die intraossäre Granulationsgewebeprobe wird entnommen. Die Proben werden in Eppendorf-Röhrchen mit 100 µl PBS-Lösung (Phosphatpufferlösung, pH = 7,2) gegeben und bei -80°C bis zur Laboranalyse gelagert. Proteomik-Analyse - Die Gewebeproben werden in 100 mM Ammoniumbicarbonat (ABC)-Puffer in 2 ml verstärkten Röhrchen mit 2,8 mm Keramik (Zirconiumoxid)-Kügelchen (Cayman Chemical) unter Verwendung eines Precellys Bead Mill Homogenisators (Bertin) homogenisiert. Mikrobiom-Analyse - DNA wird aus den Gewebeproben mit dem DNeasy Blood and Tissue Kit gemäß den Empfehlungen des Herstellers (Qiagen, Deutschland) mit geringfügigen Modifikationen extrahiert. Gelelektrophorese mit Tapestation 2200 (Genomic DNA und D1000 Screentapes, Agilent, USA) wird verwendet, um die Produktgröße und Reinheit einer Teilmenge der DNA-Extrakte zu validieren. Die DNA-Konzentration wird sowohl mit Nanodrop als auch mit dem Qubit dsDNA BR Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, USA) gemessen.

Gezielte biochemische Analyse - Aus allen Gewebeproben werden proinflammatorische (IL-1β, IL-6 und TNF-α) und anti-inflammatorische (IL-4, IL-10) Zytokine, Makrophagenaktivierungs-bezogene Chemokine (monozyten-chemotaktisches Protein C-C-Motiv Chemokinligand 2 (CCL-2/MCP-1), C-C-Motiv Chemokinligand 8 (CCL-8/MCP-2), C-X-C-Motiv Chemokinligand 9 (CXCL9/MIG) und C-C-Motiv Ligand 3 (CCL-3/MIP-1α)) und Knochenumbau-Marker (Osteoprotegerin, Rezeptoraktivator des nukleären Faktors Kappa-B Liganden (RANKL), Osteocalcin, Osteopontin) mittels Luminex- und Simoa-Techniken gemessen, die diese Marker im Bereich von Femtogramm/ml nachweisen können. Der Luminex 200 bead-basierte Multiplex-Assay ist in den Labors des Instituts für Zahnmedizin der Universität Turku verfügbar. Der Simoa HD-X Analysator ist in den Labors des Universitätsklinikums Turku verfügbar. Statistische Analyse: Nach der Ermittlung der Datenverteilung mit dem Kolmogorov-Smirnov-Test werden bei Normalverteilung wiederholter t-Test oder ANOVA in der statistischen Analyse verwendet, und bei nicht-normaler Verteilung die Mann-Whitney-U- oder Kruskal-Wallis-Tests. Bei der Bestimmung der Korrelation zwischen Heilungs- und Virulenzmarker-Korrelationen wird je nach Verteilung der parametrische Pearson-Test oder der nicht-parametrische Spearman-Test verwendet. Eine binäre logistische Regressionsanalyse mit Anpassung für Rauchen, Geschlecht und Alter wird durchgeführt, um den Zusammenhang zwischen den Analyten-Konzentrationen und der Heilungsreaktion zu bewerten. P < 0,05 wird als signifikant betrachtet. Die ethische Genehmigung für dieses Projekt wurde am 28.02.2025 vom Forschungsethikausschuss der Riga Stradins Universität erhalten. (2-PĒK-4/434/2025). Jeder Patient wird sowohl mündlich als auch durch ein schriftliches Einverständnisformular über die Forschungsziele und -verfahren informiert. Ihnen wird mitgeteilt, dass sie gemäß den Patientenschutzgesetzen das Recht haben, jederzeit von der Teilnahme zurückzutreten. Dem Patienten wird auch versichert, dass ein Rückzug aus der Studie seinen zukünftigen Behandlungsplan mit seinem Parodontologen nicht beeinflusst. Zusätzlich wird jeder Patient darüber informiert, dass die während dieser Forschung gewonnenen Daten in anonymer und synthetisierter Form für Publikationen verwendet werden. Alle Patientenbesuche werden dokumentiert, und jedem Patienten wird eine anonyme Patientennummer zugewiesen. Erforderliche Korrekturen der medizinischen Unterlagen werden durchgestrichen (mit einer einzelnen Linie) und der korrekte Text daneben geschrieben. Der Kliniker wird neben der Korrektur unterschreiben. Wenn während der Studie Nebenwirkungen beobachtet werden, wird der Ethikausschuss benachrichtigt.