微生物学および寄生虫学におけるポリメラーゼ連鎖反応（PCR）の導入
微生物学と寄生虫学におけるポリメラーゼ連鎖反応（PCR）の導入
目標は、寄生虫学的検査における性能向上が可能な分子生物学システムを用いて、顕微鏡的解析およびin vitro試験を支援または代替する分子システムを開発することです。 特に、主要な病原体：数種のリーシュマニア種（旧世界および新世界のリーシュマニア種）、ヒトに関連する5種のマラリア原虫（熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、ノウルシマラリア原虫）、およびニューモシスチス・イロベチを、診断に必要な速度、特異性、感度に基づく分子生物学的手法を用いて分析します。 さらに、種のタイピングに特化した要素を提供することを目指します。 当研究の目的は、微生物学および寄生虫学におけるPCRの活用により、診断法および種分類法を改善し、その診断への影響を評価することです。 この手法の影響を、診断のタイミング、感度、特異性の観点から評価します。 また、定量技術の将来的な可能性を探求し、臨床医がフォローアップ中の治療効果を評価するのを支援します。
さらに、これらの手法を、現在オペレーター依存となっている従来の直接法と比較し、費用対効果の観点から評価します。
調査の概要
状態
詳細な説明
当プロジェクトは、標準的な日常的な臨床検査と新しい分子生物学検査との比較に関する、観察的後方視的および前方視的断面診断パイロット研究です。特に、主要な病原体であるリーシュマニア種（旧世界および新世界リーシュマニア種）、ヒトに関連する5種のプラスモディウム（熱帯熱、卵形、三日熱、四日熱、ノウレシ）、およびニューモシスチス・ジロベチイを検出します。
- 末梢血および/または骨髄穿刺/生検および/または皮膚掻爬/生検からのリーシュマニア・アマスティゴート陽性サンプルは、日常的な診断検査に従って事前に検査され、市販の診断キットを使用した特定の定性PCR分析で検査されます。さらに、単一サンプルのPCRサイクル閾値を使用したDNA定量システムと、結果をDNA量に変換できる仮想スケールを実施します（Piralla A et al, J clin virol 2013）。その後、p70遺伝子の特定のDNAシーケンシングを実施して種と株を決定します。
- 直接顕微鏡検査および免疫クロマトグラフィーアッセイで検査および分析されたプラスモディウム種血液陽性サンプルは、多重PCR市販診断キットまたは、単一または混合感染を決定し、それぞれ寄生虫血症を定量化できる記載された方法（A.Berg et al, Infection 2020）で検査されます。詳細には、血液サンプルは、それぞれプラスモディウム属およびプラスモディウム・ファルシパルムの定性および定量PCR分析で分析されます。血液サンプル中のP. falciparum DNAの濃度は、他の場所で記載されているように定量的リアルタイムPCR（qPCR）によって測定されます（Imwong M, J.clin.microb 2014）。プラスモディウム・ファルシパルム陽性サンプルでは、各サンプルから得られたDNAコピー数を、直接顕微鏡分析から得られた寄生虫血症のレベルと比較します。このようにして、現在感染陽性赤血球のパーセンテージ（<5% vs >5%）で得られる異なる分類度に匹敵するDNAコピー値の範囲を決定したいと考えています。この方法により、定量的PCR技術で寄生虫血症のレベルを評価することが可能になるかもしれません。
- 最後に、直接顕微鏡検査で得られた陽性の気管支肺胞洗浄液（BAL）または気管支吸引液（BAS）サンプル中のニューモシスチス・ジロベチイの検出は、PCR市販診断キットを使用して再分析されます。前述のように、CT値は直接顕微鏡検査データと比較してDNA量に変換されます。
研究の種類
入学 (推定)
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前：Stefania Paolucci
- 電話番号：0382502281
- メール：s.paolucci@smatteo.pv.it
研究場所
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Lombardy
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Pavia、Lombardy、イタリア、27100
- 募集
- Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo
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コンタクト：
- Stefania Paolucci
- 電話番号：0382502281
- メール：s.paolucci@smatteo.pv.it
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
- 子
- 大人
- 高齢者
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準：
対象研究のため実験室に遡及的に提出された約200～300検体、古典的方法でP. jirovecii、マラリア原虫、およびリーシュマニアの検出を実施したもの。
除外基準：
保存エラーおよび／または量不足により不適切な検体は除外される。
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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Pneumocystis PCR検査
時間枠：2024年1月から2025年9月まで
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主要評価項目は、主要病原体（リシュマニア属、プラスモディウム属、ニューモシスティス・ジロベチ）の存在を同定する際のPCR検査の感度の推定となる。
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2024年1月から2025年9月まで
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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マラリアPCR検査
時間枠：2025年1月から2026年9月まで
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副次エンドポイントは、血液サンプル中のP. falciparum DNA濃度（qPCRにより測定）を、寄生虫血症（>5% vs <5%）に従って比較することです。
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2025年1月から2026年9月まで
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協力者と研究者
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (推定)
研究の完了 (推定)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
追加の関連 MeSH 用語
その他の研究ID番号
- P_41
個々の参加者データ (IPD) の計画
個々の参加者データ (IPD) を共有する予定はありますか?
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
米国FDA規制機器製品の研究
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