미생물학 및 기생충학에서 중합효소 연쇄 반응(PCR)의 도입

본 프로젝트는 관찰적 후향 및 전향 횡단면 진단 파일럿 연구로, 표준 일상 검사실 검사와 새로운 분자 생물학적 분석법 간의 비교에 관한 것입니다. 특히, 주요 병원체인 리슈마니아 종(구세계 및 신세계 리슈마니아 종), 인간에게 중요한 5종의 말라리아 원충(열대열, 난형열, 삼일열, 말라리아, 노울레시), 그리고 폐포자충(Pneumocystis jiroveci)을 검출할 것입니다.

1. 말초혈액 및/또는 골수 흡인/생검 및/또는 피부 긁기/생검에서 리슈마니아 무편모충(amastigotes) 양성 샘플 중 기존 일상 진단 검사법으로 검사된 것은 상용 진단 키트를 사용한 특정 정성적 PCR 분석으로 검사할 것입니다. 또한, 단일 샘플의 PCR 사이클 임계값과 결과를 DNA 부하로 변환할 수 있는 가상 척도를 사용한 DNA 정량 시스템을 수행할 것입니다(Piralla A 외, J clin virol 2013). 그런 다음 종과 균주를 결정하기 위해 p70 유전자의 특정 DNA 염기서열 분석을 수행할 것입니다.
2. 직접 현미경 및 면역크로마토그래피 분석으로 검사 및 분석된 말라리아 종 혈액 양성 샘플은 단일 또는 혼합 감염을 결정하고 각각 기생충혈증을 정량할 수 있는 다중 PCR 상용 진단 키트 또는 기술된 방법(A.Berg 외, Infection 2020)으로 검사할 것입니다. 상세히 말하면, 혈액 샘플은 각각 말라리아 종(Plasmodium spp) 및 열대열 말라리아 원충(Plasmodium falciparum)에 대한 정성 및 정량 PCR 분석으로 분석할 것입니다. 혈액 샘플 내 열대열 말라리아 원충 DNA 농도는 다른 곳에서 기술된 바와 같이 정량 실시간 PCR(qPCR)로 측정할 것입니다(Imwong M, J.clin.microb 2014). 열대열 말라리아 원충 양성 샘플에서, 각 샘플에서 얻은 DNA 복제본 양을 직접 현미경 분석에서 얻은 기생충혈증 수준과 비교할 것입니다. 이러한 방식으로, 현재 감염 양성 적혈구 백분율(<5% 대 >5%)로 얻는 다양한 분류 등급과 비교 가능한 DNA 복제본 값 범위를 결정하고자 합니다. 이러한 방식으로, 정량 PCR 기술로 기생충혈증 수준을 평가할 수 있을 것입니다.
3. 마지막으로, 직접 현미경으로 얻은 양성 기관지폐포세척액(BAL) 또는 기관지흡인액(BAS) 샘플에서 폐포자충(Pneumocystis jirovecii) 검출은 PCR 상용 진단 키트를 사용하여 재분석할 것입니다. 앞서 언급한 바와 같이, CT 값은 직접 현미경 데이터와 비교하여 DNA 부하로 변환될 것입니다.