未受精卵培養システムによる胚の体外発達能向上のための前向き多施設共同無作為化比較臨床試験 (Embryos UECS)

本研究では、以下のいずれかの条件に該当する場合、参加者はそれ以降の参加から除外されます。 除外基準: 1）回収卵子数が1個以下；2）臨床データが不完全；3）対照群または介入群のいずれかの患者において、胚がDay 3に移植または凍結保存を必要とし、胚盤胞期までの延長培養という研究プロトコルが中断された場合；4）インフォームド・コンセントを撤回した患者。

無作為化手順

1. 卵子の詳細な無作為化手順は以下の通りです：各患者から得られたすべての卵丘卵子複合体（COC）は、1:1の比率で対照群または実験群に無作為に割り付けられます。 回収された卵子数が奇数の場合、1:1の無作為化後、残りの1個の卵子は、事前に生成されたコンピュータ無作為化表における対応する番号の偶奇に基づいて割り付けられます。 偶数は対照群への割り付けを示し、奇数は介入群への割り付けを示します。

   さらに、2024年イスタンブール専門家コンセンサスの推奨に従い、受精後に可視的な2前核（2PN）を持たない接合子は、対照群および実験群の両方において使用可能な胚と見なされます。 そのような胚は廃棄されず、それぞれの割り当てられた培養システム内でその後の培養を継続します。 ARTサイクルにおける採卵、卵子処理、および受精方法は、患者の臨床的適応と生殖医療センターの標準操作手順に従って実施されます。

2. 胚移植の詳細な無作為化手順は以下の通りです：2群の最良品質胚が同じグレードである場合、移植胚を選択する群は、事前に生成されたコンピュータ無作為化シーケンスに基づいて決定されます。 偶数の無作為数は、対照群の最良品質胚を選択して単一胚盤胞移植を行うことを示し、奇数の無作為数は、介入群の最良品質胚を選択することを示します。

介入の中止または変更の基準：1）インキュベーターの故障や培養液の汚染などの実験室事故が発生した場合、胚は直ちに予備のインキュベーターまたは培養皿に移され、その事象は症例報告書（CRF）に記録されます。 2）参加者が同意を撤回した場合、介入は直ちに中止されます。 撤回前のデータは、ITT（intention-to-treat）原則に従って解析のために保持されます。

遵守率向上とモニタリング対策の戦略：1）実験室品質管理：温度とCO2濃度は毎日自動記録され手動で較正されます；すべてのインキュベーターには24時間リモート警報モニタリングが装備されます。 2）手順の標準化：標準操作手順（SOP）が確立され厳密に実施されます；培養液交換は2名のスタッフにより独立して確認されます。

3）盲検化評価：胚盤胞のグレーディングは、群割り付けを盲検化した上級胚培養士によって行われ、すべての評価画像はアーカイブされます。

試験中の禁止併用介入：試験中、以下の介入は許可されません：アシステッドハッチング（AH）、胚用接着剤、またはその他の特別な胚操作手順；研究プロトコルで指定されていないインキュベーターまたは培養液の使用；および、実験群において、培養中に培養チャンバーまたは培養皿の蓋を開けて手動観察または培養液交換を行うこと。

アウトカム指標の計算

1. 主要アウトカム指標 臨床妊娠率：胚移植サイクル総数に対する臨床妊娠サイクルの割合。

   タイムフレーム：胚移植後4-7週 定義：臨床妊娠は、胚移植後4-7週に超音波検査で検出された子宮内胎嚢の存在、または流産物の病理学的確認と定義されます。

2. 副次アウトカム指標

1. IVFにおける正常受精率：IVFで受精させた卵子総数に対する、Day 1に観察された2前核（2PN）と2極体（2PB）を持つ卵子の割合。 タイムフレーム：受精後Day 1 ICSIにおける正常受精率：注入した中期II（MII）卵子総数に対する、Day 1に観察された2PNと2PBを持つ卵子の割合。 タイムフレーム：受精後Day 1

2. 卵割率：正常受精卵子総数に対する、Day 2の卵割期胚の割合。

   タイムフレーム：受精後Day 2

3. Day 3良好胚率：正常受精卵子総数に対する、Day 3の良好胚の割合。

   タイムフレーム：受精後Day 3

4. Day 3使用可能胚率：正常受精卵子総数に対する、Day 3の使用可能胚の割合。

   タイムフレーム：受精後Day 3

5. 良好胚盤胞形成率：正常受精卵子総数に対する、良好胚盤胞の割合。

   タイムフレーム：受精後Day 5/6

6. Day 5/6使用可能胚盤胞率：正常受精卵子総数に対する、Day 5/6の使用可能胚盤胞の割合。

   タイムフレーム：受精後Day 5/6

7. 胚盤胞形成率：正常受精卵子総数に対する、Day 5/6に形成された胚盤胞総数の割合。

   タイムフレーム：受精後Day 5/6

8. 着床率：移植胚盤胞総数に対する、胚移植後に検出された胎嚢の割合。

タイムフレーム：胚移植後約4-7週 （9）生化学的妊娠率：胚移植サイクル総数に対する、胚移植後に血清β-hCGが陽性だが超音波検査で胎嚢が検出されなかったサイクルの割合。

タイムフレーム：胚移植後約14日 （10）早期流産率：臨床妊娠サイクルに対する、妊娠12週以内に発生した自然流産サイクルの割合。 タイムフレーム：妊娠12週以内 （11）継続妊娠率：胚移植サイクル総数に対する、臨床妊娠後少なくとも12週まで継続した生存妊娠のあるサイクルの割合。

タイムフレーム：妊娠12週以降 （12）生児出生率（初回胚移植） 初回胚移植サイクル総数に対する、少なくとも1人の生児出生をもたらしたサイクルの割合。 タイムフレーム：出産時

募集：参加者は、本研究に参加する12の生殖医療センターでIVFまたはICSIサイクルを受ける予定の不妊患者から募集されます。 初期スクリーニングは、研究手順に精通した訓練を受けた医師によって、生殖医療センターを受診する患者の中で実施されます。 適格基準を満たす可能性のある参加者に対して、研究者は両パートナーに研究の目的、手順、潜在的なリスクと利益を含めて説明し、参加意思を考慮するための十分な時間を提供します。 カップルから提起された研究に関するすべての質問には十分に対応します。 十分かつ詳細なインフォームド・コンセントが得られた後、両パートナーと研究者が共同でインフォームド・コンセント書に署名します。

盲検化：なし（オープンラベル）

データ収集

1. 書面によるインフォームド・コンセント取得後にベースラインデータを収集します。これには、血清性ホルモンレベル（月経周期2-5日目のE2、LH、FSH、PRL、P、T）、前胞状卵胞数（AFC）、および通常の精液分析が含まれます。 卵巣刺激、採卵、および凍結胚移植サイクル中の通常の臨床管理に必要なその他の検査は標準的な実践に従って実施されますが、研究アウトカム指標には含まれません。
2. 介入期間中、回収卵子総数および対照群と実験群に割り付けられた数を記録します。 卵子総数が奇数の場合、最後の卵子の無作為割り付けに使用された方法も記録します。 受精後16-18時間（Day 1）から胚盤胞期（Day 5/6）まで、受精結果、毎日の胚発育、およびインキュベーター環境パラメーター（温度およびガス濃度を含む）は、胚培養士によって症例報告書（CRF）にリアルタイムで記録されます。
3. アウトカムデータには、すべての主要および副次アウトカム指標が含まれます。 データ品質を確保するため、主要なアウトカムデータは二重チェックされ、すべての研究担当者は標準化されたトレーニングを受け、欠落、矛盾、または誤ったエントリーを特定するための定期的なデータクリーニングが実施されます。 参加者の継続率とフォローアップ完了率を向上させるため、研究者は登録時に詳細な研究説明、書面による研究資料、専用連絡先、および適切な金銭的補償を提供します。

データ管理 （1）データ入力は臨床データ収集と同時に行われます。 データ入力またはレビュー中に特定されたクエリは書面で記録され、主任研究者によって解決されます。 すべての変更は記録され、CRFとともに保持されます。 すべての研究データは機密保持され、スポンサーの書面による承認なしに第三者に開示することはできません。

（2）データレビュー完了およびデータ精度確認後、データベースは主導センター、協力センター、および統計学者によって共同でロックされます。 データベースロック後は変更は許可されません。 統計解析計画はデータベースロック前に最終決定されます。

統計解析 （1）解析集団 フル解析セット（FAS）は、ITT原則に従い、少なくとも1回の研究介入を受け、介入後評価データを持つすべての無作為化参加者を含みます。 FASにおける欠損データは、最後の観測値繰越し（LOCF）法を用いて処理されます。

プロトコル解析セット（PPS）は、プロトコルに従って治療とフォローアップを完了し、有効性に影響を与える重大なプロトコル逸脱のない参加者を含みます。 PPSは有効性評価の主要解析セットとして使用されます。

統計手法

1. すべての統計検定は両側とし、P ≤ 0.05を統計的有意と見なします。 連続変数は、適切に、平均、標準偏差、中央値、最小値、最大値を用いて要約されます。 カテゴリ変数は頻度とパーセンテージを用いて要約されます。 統計解析はSPSS 25.0またはRを用いて実施されます。
2. ベースライン特性は記述的に解析されます。 連続変数の正規性はヒストグラムおよびシャピロ検定を用いて評価されます。 正規分布変数は平均±標準偏差として提示され、非正規分布変数は中央値および四分位範囲として提示されます。
3. 主要アウトカムである臨床妊娠率は、Cochran-Mantel-Haenszel（CMH）層化カイ二乗検定を用いて群間比較され、多変量ロジスティック回帰を用いてベースライン特性およびセンター効果を調整します。
4. 副次アウトカム（受精率、卵割率、Day 3胚発育率、胚盤胞形成率、着床率、生化学的妊娠率、流産率、継続妊娠率、生児出生率）についても、CMH層化カイ二乗検定を用いて群間比較されます。
5. 脱落率および有害事象関連中止率は、カイ二乗検定またはフィッシャーの正確検定を用いて群間比較されます。 研究期間は、適切に、独立標本t検定またはウィルコクソンの順位和検定を用いて比較されます。

データモニタリング 本研究では、独立したデータモニタリング委員会（DMC）は正式に設置されません。これは、研究者主導の臨床研究であり、通常のART手順および胚培養介入を含み、予想されるリスクが比較的低いためです。 データモニタリングは、蘇州Basecare Medical Corporation Ltd.または中山大学附属第六医院のGCP（Good Clinical Practice）資格を持つ担当者によって実施されます。

中間解析および中止ガイドライン 目標サンプルサイズの50％が登録された時点で中間解析を計画しています。 中間解析では、主要アウトカム（臨床妊娠率）および選択された副次アウトカム（受精率、卵割率、Day 2/Day 3胚発育、胚盤胞形成率）を評価します。 安全性データ（すべての有害事象（AE）および重篤な有害事象（SAE）を含む）もレビューされます。

研究は以下の状況下で中止または早期終了される可能性があります： 安全性上の懸念：いずれかの群で、予想外に高い異常胚発育率などの重大な安全性問題が特定された場合； 明確な有益性の証拠：実験群が対照群よりも有意に高い臨床妊娠率を示し（p < 0.001）、継続が不要と判断された場合； 明確な劣性/無益性の証拠：実験群が対照群よりも有意に低い臨床妊娠率を示した場合（p < 0.001）。

主任研究者が中間結果をレビューし、研究の継続、中止、または終了に関する勧告を行います。

有害事象（Adverse Events） 研究中に発生するすべての有害事象（AE）および重篤な有害事象（SAE）を収集、評価、記録、報告、およびフォローアップします。

AEは、卵巣刺激またはその他の研究関連手順中に発生する、症状、徴候、または異常な検査所見を含む、好ましくない医学的事象または既存状態の悪化と定義されます。

SAEは、死亡、生命を脅かす、入院または入院期間の延長を必要とする、持続的または重大な障害/機能不全をもたらす、先天異常または出生異常を引き起こす、または医学的に重要である事象と定義されます。

各AE/SAEについて、研究者は発症時間、重症度、持続期間、講じられた措置、転帰、および研究介入との関連性を記録します。 因果関係は、明らかに関連、おそらく関連、おそらく無関係、明らかに無関係、または評価不能に分類されます。

参加者は、インフォームド・コンセント時からフォローアップ終了まで、電話または対面連絡を通じてモニタリングされます。 SAEについては、すべての関連する臨床情報およびフォローアップデータがソース記録に記録されます。

監査 院内監査が定期的に実施され、継続的なプロトコル遵守が確保されます。

監査内容は以下の通りです： データ完全性：参加者ファイル、CRF、実験室記録、インフォームド・コンセント書のレビューにより、完全性、正確性、論理的一貫性を確認； 手順遵守：胚培養、無作為化、データ入力などの主要研究手順のレビューにより、SOP遵守を確保； 参加者管理：登録、フォローアップ、および中止手順の確認； 機器保守：インキュベーター、顕微鏡、その他関連機器の操作および保守記録のレビュー。

監査結果は、監査完了後10営業日以内に研究チームおよびスポンサーに提出され、是正措置の勧告とともに提供されます。

プロトコル修正 適格基準、アウトカム指標、または統計手法の変更を含む重要なプロトコル修正は、研究チームで議論され、主任研究者（PI）および統計チームによって確認されます。 主要な修正の書面通知は、内部連絡チャネルを通じて72時間以内にすべての研究チームメンバーに提供され、実施タイムラインとともに提示されます。 関連スタッフは必要に応じて追加トレーニングを受けます。 登録済み参加者には、電話またはWeChatフォローアップを通じて重要な修正が通知されます。 倫理委員会/IRBおよび試験登録機関にも、適用要件に従って通知されます。

インフォームド・コンセント 潜在的な参加者は、まず研究プロトコルと手順に精通した臨床医からアプローチされます。 研究の目的、手順、潜在的なリスク、および可能な利益が説明され、インフォームド・コンセント書の写しが慎重にレビューできるように提供されます。 参加者は質問し、参加を考慮するための十分な時間が与えられます。 研究固有の手順が実施される前に、自発的に書面によるインフォームド・コンセントが得られます。 参加者と研究者の両方がインフォームド・コンセント書に署名し、それは研究ファイルに保持されます。

本研究では、胚は無攪乱密閉培養システムを用いて培養される可能性があり、胚盤胞形成率および良好胚率の向上が期待されます。 割り当てられた培養システム以外のすべての手順は、通常の病院実践に従い、追加のリスクを導入するとは予想されません。

機密性 必要な研究情報のみを収集し、参加者データは可能な限り早期に匿名化されます。 個人データへのアクセスは、役割ベースの権限に従って制限されます。 安全でない電子メールによる識別可能なデータの送信は禁止されます。 研究完了後、最終データベースは匿名化されロックされます。 独立したデータモニターがデータ保護手順を監督し、機密保持契約に署名します。

利益相反の開示 主任研究者および参加センターの主任研究者は、本研究に関連する金銭的またはその他の利益相反がないことを宣言します。

データへのアクセス 試験中に収集されたすべての研究データは、中山大学附属第六医院に提出されます。 主任研究者は、参加センターからの意見を踏まえ、臨床研究報告書および原稿の作成を担当します。 ソース記録、署名済みインフォームド・コンセント書、CRF、その他の研究記録を含む関連試験文書は、検査、監督、および分析のために保持されます。 最終試験データセットへのアクセスは、承認された研究者および統計学者に限定されます。

付随的および試験後ケア 該当なし。

成果公開方針 すべての研究関連情報は、研究完了および最終統計解析レビューまで機密として扱われます。 研究結果は、主導研究センターの承認後に発表または提示される可能性があります。 機密または所有権情報は開示されません。