Un Ensayo Clínico Prospectivo, Multicéntrico, Aleatorizado y Controlado de un Sistema de Cultivo Embrionario No Perturbado para Mejorar el Potencial de Desarrollo In Vitro de los Embriones (Embryos UECS)

Durante el estudio, los participantes serán excluidos de una mayor participación si se cumple alguna de las siguientes condiciones. Criterios de eliminación: 1) Recuperación de ≤1 ovocito; 2) Datos clínicos incompletos; 3) Pacientes en el grupo de control o en el grupo de intervención cuyos embriones requirieron transferencia o criopreservación en el día 3, lo que resultó en la interrupción del protocolo de estudio para el cultivo prolongado hasta la etapa de blastocisto; 4) Pacientes que retiraron el consentimiento informado.

Procedimiento de aleatorización

1. El procedimiento detallado de aleatorización de ovocitos es el siguiente: todos los complejos cumulus-ovocito (COC) de cada paciente se asignarán aleatoriamente en una proporción 1:1 al grupo de control o al grupo experimental. Si el número de ovocitos recuperados es impar, después de la aleatorización 1:1, el ovocito restante se asignará en función de la paridad del número correspondiente en una tabla de aleatorización por computadora pregenerada. Un número par indica asignación al grupo de control, mientras que un número impar indica asignación al grupo de intervención.

   Además, de acuerdo con las recomendaciones del Consenso de Expertos de Estambul 2024, los cigotos sin dos pronúcleos visibles (2PN) después de la fertilización se considerarán embriones utilizables tanto en el grupo de control como en el experimental. Dichos embriones no serán descartados y continuarán el cultivo posterior dentro de sus respectivos sistemas de cultivo asignados. La recuperación de ovocitos, el procesamiento de ovocitos y los métodos de fertilización en los ciclos de TRA se llevarán a cabo de acuerdo con las indicaciones clínicas de los pacientes y los procedimientos operativos estándar del centro de medicina reproductiva.

2. El procedimiento detallado de aleatorización para la transferencia de embriones es el siguiente: Si los embriones de mejor calidad de los dos grupos son del mismo grado, el grupo del cual se selecciona el embrión para transferencia se determinará en función de una secuencia de aleatorización por computadora pregenerada. Un número aleatorio par indica la selección del embrión de mejor calidad del grupo de control para la transferencia de un solo blastocisto, mientras que un número aleatorio impar indica la selección del embrión de mejor calidad del grupo de intervención.

Criterios para la interrupción o modificación de la intervención: 1) En caso de accidentes de laboratorio, como mal funcionamiento de la incubadora o contaminación del medio de cultivo, los embriones se transferirán inmediatamente a una incubadora de respaldo o placa de cultivo, y el incidente se documentará en el formulario de reporte de casos (CRF). 2) Si un participante retira su consentimiento, la intervención se interrumpirá inmediatamente. Los datos generados antes de la retirada se conservarán para el análisis de acuerdo con el principio de intención de tratar.

Estrategias para mejorar la adherencia y medidas de monitorización: 1) Control de calidad de laboratorio: La temperatura y los niveles de CO2 se registrarán automáticamente a diario y se calibrarán manualmente; todas las incubadoras estarán equipadas con monitorización de alarma remota las 24 horas. 2) Estandarización de procedimientos: Se establecerán y aplicarán estrictamente procedimientos operativos estándar (SOP); el reemplazo del medio de cultivo será verificado de forma independiente por dos miembros del personal.

3) Evaluación enmascarada: La clasificación de blastocistos será realizada por embriólogos senior enmascarados respecto a la asignación de grupos, y todas las imágenes de evaluación serán archivadas.

Intervenciones concomitantes prohibidas durante el ensayo: Las siguientes intervenciones no estarán permitidas durante el ensayo: asistencia a la eclosión (AH), pegamento embrionario u otros procedimientos especiales de manipulación de embriones; uso de incubadoras o medios de cultivo no especificados en el protocolo de estudio; y, en el grupo experimental, apertura de la cámara de cultivo o tapa de la placa durante el cultivo para observación manual o reemplazo de medio.

Cálculo de las medidas de resultado

1. Medida de resultado principal Tasa de embarazo clínico: La proporción de ciclos de embarazo clínico entre el número total de ciclos de transferencia de embriones.

   Marco temporal: 4-7 semanas después de la transferencia de embriones Definición: El embarazo clínico se define como la presencia de un saco gestacional intrauterino detectado por ultrasonografía 4-7 semanas después de la transferencia de embriones, o confirmación patológica de productos del aborto.

2. Medidas de resultado secundarias

1. Tasa de fertilización normal en FIV: La proporción de ovocitos con dos pronúcleos (2PN) y dos cuerpos polares (2PB) observados en el día 1 entre el número total de ovocitos inseminados en FIV. Marco temporal: Día 1 después de la fertilización Tasa de fertilización normal en ICSI: La proporción de ovocitos con 2PN y 2PB observados en el día 1 entre el número total de ovocitos en metafase II (MII) inyectados. Marco temporal: Día 1 después de la fertilización

2. Tasa de división: La proporción de embriones en etapa de división en el día 2 entre el número total de ovocitos normalmente fertilizados.

   Marco temporal: Día 2 después de la fertilización

3. Tasa de embriones de buena calidad en día 3: La proporción de embriones de buena calidad en el día 3 entre el número total de ovocitos normalmente fertilizados.

   Marco temporal: Día 3 después de la fertilización

4. Tasa de embriones utilizables en día 3: La proporción de embriones utilizables en el día 3 entre el número total de ovocitos normalmente fertilizados.

   Marco temporal: Día 3 después de la fertilización

5. Tasa de formación de blastocistos de buena calidad: La proporción de blastocistos de buena calidad entre el número total de ovocitos normalmente fertilizados.

   Marco temporal: Día 5/6 después de la fertilización

6. Tasa de blastocistos utilizables en día 5/6: La proporción de blastocistos utilizables en el día 5/6 entre el número total de ovocitos normalmente fertilizados.

   Marco temporal: Día 5/6 después de la fertilización

7. Tasa de formación de blastocistos: La proporción de blastocistos totales formados en el día 5/6 entre el número total de ovocitos normalmente fertilizados.

   Marco temporal: Día 5/6 después de la fertilización

8. Tasa de implantación: La proporción de sacos gestacionales detectados después de la transferencia de embriones entre el número total de blastocistos transferidos.

Marco temporal: Aproximadamente 4-7 semanas después de la transferencia de embriones (9) Tasa de embarazo bioquímico: La proporción de ciclos con β-hCG sérica positiva después de la transferencia de embriones pero sin saco gestacional detectado por ultrasonografía entre el número total de ciclos de transferencia de embriones.

Marco temporal: Aproximadamente 14 días después de la transferencia de embriones (10) Tasa de aborto temprano: La proporción de ciclos de aborto espontáneo que ocurren dentro de las 12 semanas de embarazo entre los ciclos de embarazo clínico. Marco temporal: Dentro de las 12 semanas de embarazo (11) Tasa de embarazo en curso: La proporción de ciclos con un embarazo viable que continúa al menos 12 semanas después del embarazo clínico entre el número total de ciclos de transferencia de embriones.

Marco temporal: En o más allá de las 12 semanas de embarazo (12) Tasa de nacidos vivos (primera transferencia de embriones) La proporción de ciclos de primera transferencia de embriones que resultan en al menos un nacido vivo. Marco temporal: Al parto

Reclutamiento: Los participantes serán reclutados de pacientes infértiles que planean someterse a ciclos de FIV o ICSI en los 12 centros de medicina reproductiva que participan en este ensayo. El cribado inicial será realizado por médicos capacitados familiarizados con los procedimientos del estudio entre los pacientes que asisten a los centros de medicina reproductiva. Para los participantes potenciales que cumplan los criterios de elegibilidad, el investigador presentará el estudio a ambas parejas, incluyendo su propósito, procedimientos, riesgos potenciales y beneficios, y proporcionará tiempo suficiente para que consideren si están dispuestos a participar. Todas las preguntas planteadas por la pareja respecto al estudio serán respondidas completamente. Después de obtener el consentimiento informado completo y detallado, ambas parejas y el investigador firmarán conjuntamente el formulario de consentimiento informado.

Enmascaramiento: Ninguno (abierto)

Recopilación de datos

1. Los datos basales se recopilarán después de obtener el consentimiento informado por escrito, incluyendo niveles de hormonas sexuales séricas (E2, LH, FSH, PRL, P y T en los días 2-5 del ciclo menstrual), recuento de folículos antrales (AFC) y análisis de semen rutinario. Otras pruebas de laboratorio requeridas para el manejo clínico rutinario durante la estimulación ovárica, recuperación de ovocitos y ciclos de transferencia de embriones congelados se realizarán según la práctica estándar pero no se incluirán como medidas de resultado del estudio.
2. Durante el período de intervención, se registrará el número total de ovocitos recuperados y el número asignado a los grupos de control y experimental. Si el número total de ovocitos es impar, también se documentará el método utilizado para la asignación aleatoria del último ovocito. Desde 16-18 horas después de la fertilización (Día 1) hasta la etapa de blastocisto (Día 5/6), los resultados de la fertilización, el desarrollo embrionario diario y los parámetros ambientales de la incubadora (incluyendo temperatura y concentración de gases) se registrarán en el formulario de reporte de casos (CRF) en tiempo real por embriólogos.
3. Los datos de resultado incluirán todas las medidas de resultado principales y secundarias. Para garantizar la calidad de los datos, los datos clave de resultado se verificarán dos veces, todo el personal del estudio recibirá capacitación estandarizada y se realizará una limpieza regular de datos para identificar entradas faltantes, inconsistentes o incorrectas. Para mejorar la retención de participantes y la finalización del seguimiento, los investigadores proporcionarán explicaciones detalladas del estudio en la inscripción, materiales de estudio por escrito, información de contacto dedicada y compensación financiera apropiada.

Gestión de datos (1) La entrada de datos se realizará simultáneamente con la recopilación de datos clínicos. Las consultas identificadas durante la entrada o revisión de datos se documentarán por escrito y serán resueltas por el investigador principal. Todos los cambios se documentarán y conservarán junto con los CRF. Todos los datos del estudio se mantendrán confidenciales y no podrán ser divulgados a terceros sin autorización escrita del patrocinador.

(2) Después de completar la revisión de datos y confirmar la precisión de los datos, la base de datos será bloqueada conjuntamente por el centro principal, los centros colaboradores y el estadístico. No se permitirán cambios después del bloqueo de la base de datos. El plan de análisis estadístico se finalizará antes del bloqueo de la base de datos.

Análisis estadístico (1) Poblaciones de análisis El Conjunto de Análisis Completo (FAS) incluirá a todos los participantes aleatorizados que reciban al menos una intervención del estudio y tengan datos de evaluación posteriores a la intervención, siguiendo el principio de intención de tratar. Los datos faltantes en el FAS se manejarán utilizando el método de la última observación llevada hacia adelante (LOCF).

El Conjunto por Protocolo (PPS) incluirá a los participantes que completen el tratamiento y seguimiento de acuerdo con el protocolo sin desviaciones importantes del protocolo que afecten la eficacia. El PPS se utilizará como el conjunto de análisis principal para la evaluación de eficacia.

Métodos estadísticos

1. Todas las pruebas estadísticas serán bilaterales, y P ≤ 0,05 se considerará estadísticamente significativo. Las variables continuas se resumirán utilizando media, desviación estándar, mediana, mínimo y máximo valores, según corresponda. Las variables categóricas se resumirán utilizando frecuencias y porcentajes. Los análisis estadísticos se realizarán utilizando SPSS 25.0 o R.
2. Las características basales se analizarán descriptivamente. La normalidad de las variables continuas se evaluará utilizando histogramas y la prueba de Shapiro. Las variables distribuidas normalmente se presentarán como media ± desviación estándar; las variables no distribuidas normalmente se presentarán como mediana y rango intercuartil.
3. La tasa de embarazo clínico, el resultado principal, se comparará entre grupos utilizando la prueba de chi-cuadrado estratificada de Cochran-Mantel-Haenszel (CMH), con ajuste por características basales y efectos del centro mediante regresión logística multivariable.
4. Los resultados secundarios, incluyendo la tasa de fertilización, tasa de división, tasa de desarrollo embrionario en día 3, tasa de formación de blastocistos, tasa de implantación, tasa de embarazo bioquímico, tasa de aborto, tasa de embarazo en curso y tasa de nacidos vivos, también se compararán entre grupos utilizando la prueba de chi-cuadrado estratificada de CMH.
5. Las tasas de abandono y las tasas de retiro relacionadas con eventos adversos se compararán entre grupos utilizando la prueba de chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher. La duración del estudio se comparará utilizando la prueba t de muestras independientes o la prueba de suma de rangos de Wilcoxon, según corresponda.

Monitorización de datos No se establecerá un Comité de Monitorización de Datos (DMC) independiente formal para este estudio, porque este es un estudio clínico iniciado por investigadores que involucra procedimientos de TRA rutinarios e intervenciones de cultivo de embriones con riesgo anticipado relativamente bajo. La monitorización de datos será realizada por personal calificado en Buenas Prácticas Clínicas (BPC) de Suzhou Basecare Medical Corporation Ltd. o El Sexto Hospital Afiliado, Universidad Sun Yat-sen.

Análisis interino y pautas de detención Se planea un análisis interino cuando se haya inscrito el 50% del tamaño de muestra objetivo. El análisis interino evaluará el resultado principal (tasa de embarazo clínico) y resultados secundarios seleccionados, incluyendo tasa de fertilización, tasa de división, desarrollo embrionario en día 2/día 3 y tasa de formación de blastocistos. Los datos de seguridad, incluyendo todos los eventos adversos (EA) y eventos adversos graves (EAG), también serán revisados.

El estudio puede ser suspendido o terminado anticipadamente bajo las siguientes circunstancias: Preocupaciones de seguridad: si se identifica un problema de seguridad significativo en cualquiera de los grupos, como una tasa inesperadamente alta de desarrollo embrionario anormal; Evidencia clara de beneficio: si el grupo experimental muestra una tasa de embarazo clínico significativamente mayor que el grupo de control (p < 0,001) y se considera innecesaria la continuación; Evidencia clara de inferioridad/futilidad: si el grupo experimental muestra una tasa de embarazo clínico significativamente menor que el grupo de control (p < 0,001).

El investigador principal revisará los resultados interinos y hará recomendaciones respecto a la continuación, suspensión o terminación del estudio.

Daños (Eventos adversos) Todos los eventos adversos (EA) y eventos adversos graves (EAG) que ocurran durante el estudio serán recopilados, evaluados, registrados, reportados y seguidos.

Un EA se define como cualquier ocurrencia médica desfavorable o empeoramiento de una condición preexistente durante la estimulación ovárica u otros procedimientos relacionados con el estudio, incluyendo síntomas, signos o hallazgos de laboratorio anormales.

Un EAG se define como cualquier evento que resulte en muerte, ponga en peligro la vida, requiera hospitalización o prolongación de la hospitalización, resulte en discapacidad/incapacidad persistente o significativa, conduzca a anomalía congénita o defecto de nacimiento, o sea médicamente importante de otro modo.

Para cada EA/EAG, el investigador registrará el tiempo de inicio, severidad, duración, acciones tomadas, resultado y relación con la intervención del estudio. La causalidad se clasificará como definitivamente relacionada, posiblemente relacionada, posiblemente no relacionada, definitivamente no relacionada o no evaluable.

Los participantes serán monitorizados desde el momento del consentimiento informado hasta el final del seguimiento a través de contacto telefónico o cara a cara. Para los EAG, toda la información clínica relevante y los datos de seguimiento serán documentados en los registros fuente.

Auditoría Se realizarán auditorías internas regularmente por el hospital para garantizar el cumplimiento continuo del protocolo.

El contenido de la auditoría incluirá: Integridad de datos: revisión de archivos de participantes, CRF, registros de laboratorio y formularios de consentimiento informado para confirmar integridad, precisión y consistencia lógica; Cumplimiento de procedimientos: revisión de procedimientos clave del estudio, incluyendo cultivo de embriones, aleatorización y entrada de datos, para garantizar adherencia a los SOP; Gestión de participantes: verificación de procedimientos de inscripción, seguimiento y retiro; Mantenimiento de equipos: revisión de registros de operación y mantenimiento para incubadoras, microscopios y otros equipos relevantes.

Los hallazgos de la auditoría se enviarán al equipo de estudio y al patrocinador dentro de los 10 días hábiles posteriores a la finalización de la auditoría, junto con recomendaciones para acciones correctivas.

Modificaciones del protocolo Cualquier modificación importante del protocolo, incluyendo cambios en criterios de elegibilidad, medidas de resultado o métodos estadísticos, será discutida por el equipo de estudio y confirmada por el investigador principal (IP) y el equipo estadístico. La notificación por escrito de enmiendas importantes se proporcionará a todos los miembros del equipo de estudio dentro de las 72 horas a través de canales de comunicación interna, junto con la línea de tiempo de implementación. El personal relevante recibirá capacitación adicional según sea necesario. Los participantes inscritos serán informados de enmiendas importantes por seguimiento telefónico o WeChat. Los comités de ética/IRB y registros de ensayos también serán notificados de acuerdo con los requisitos aplicables.

Consentimiento informado Los participantes potenciales serán contactados primero por un clínico familiarizado con el protocolo y procedimientos del estudio. Se explicará el propósito del estudio, procedimientos, riesgos potenciales y posibles beneficios, y se proporcionará una copia del formulario de consentimiento informado para revisión cuidadosa. Se dará a los participantes tiempo suficiente para hacer preguntas y considerar la participación. El consentimiento informado por escrito se obtendrá voluntariamente antes de realizar cualquier procedimiento específico del estudio. Tanto el participante como el investigador firmarán el formulario de consentimiento informado, que se conservará en los archivos del estudio.

En este estudio, los embriones pueden ser cultivados utilizando un sistema de cultivo cerrado sin perturbaciones, que se espera mejore las tasas de formación de blastocistos y embriones de buena calidad. Aparte del sistema de cultivo asignado, todos los procedimientos seguirán la práctica hospitalaria rutinaria y no se espera que introduzcan riesgos adicionales.

Confidencialidad Solo se recopilará información esencial del estudio, y los datos de los participantes se desidentificarán lo antes posible. El acceso a datos personales estará restringido según permisos basados en roles. Se prohibirá la transmisión de datos identificables a través de correo electrónico no seguro. Después de la finalización del estudio, la base de datos final se anonimizará y bloqueará. Monitores de datos independientes supervisarán los procedimientos de protección de datos y firmarán acuerdos de confidencialidad.

Declaración de intereses El investigador principal y los investigadores principales de los centros participantes declaran que no tienen conflictos de interés financieros u otros relacionados con este estudio.

Acceso a datos Todos los datos del estudio recopilados durante el ensayo se enviarán a El Sexto Hospital Afiliado, Universidad Sun Yat-sen. El investigador principal será responsable de la preparación del informe del estudio clínico y manuscritos, con aportes de los centros participantes. Los documentos relevantes del ensayo, incluyendo registros fuente, formularios de consentimiento informado firmados, CRF y otros registros del estudio, se conservarán para inspección, supervisión y análisis. El acceso al conjunto de datos final del ensayo estará limitado a investigadores y estadísticos autorizados.

Cuidado complementario y posterior al ensayo No aplica.

Política de divulgación Toda la información relacionada con el estudio se tratará como confidencial hasta la finalización del estudio y la revisión de los análisis estadísticos finales. Los resultados del estudio pueden ser publicados o presentados después de la autorización por el centro de estudio principal. No se divulgará información confidencial o propietaria.