Проспективное, многоцентровое, рандомизированное контролируемое клиническое исследование системы культивирования эмбрионов без помех для улучшения потенциала развития эмбрионов in vitro (Embryos UECS)

В ходе исследования участники будут исключены из дальнейшего участия при выполнении любого из следующих условий. Критерии исключения: 1) Получение ≤1 ооцита; 2) Неполные клинические данные; 3) Пациенты в контрольной группе или группе вмешательства, чьи эмбрионы требовали переноса или криоконсервации на 3-й день, что привело к прерыванию протокола исследования для продлённого культивирования до стадии бластоцисты; 4) Пациенты, отозвавшие информированное согласие.

Процедура рандомизации

1. Детальная процедура рандомизации ооцитов следующая: все комплексы кумулюс-ооцит (КОК) от каждого пациента будут случайным образом распределены в соотношении 1:1 в контрольную группу или экспериментальную группу. Если количество полученных ооцитов нечётное, после рандомизации 1:1 оставшийся одиночный ооцит будет распределён на основе чётности соответствующего номера в предварительно сгенерированной компьютерной таблице рандомизации. Чётное число указывает на назначение в контрольную группу, тогда как нечётное число указывает на назначение в группу вмешательства.

   Кроме того, в соответствии с рекомендациями Стамбульского экспертного консенсуса 2024 года, зиготы без видимых двух пронуклеусов (2ПН) после оплодотворения будут рассматриваться как пригодные эмбрионы как в контрольной, так и в экспериментальной группах. Такие эмбрионы не будут отбракованы и продолжат последующее культивирование в своих назначенных системах культивирования. Забор ооцитов, обработка ооцитов и методы оплодотворения в циклах ВРТ будут проводиться в соответствии с клиническими показаниями пациентов и стандартными операционными процедурами центра репродуктивной медицины.

2. Детальная процедура рандомизации для переноса эмбрионов следующая: Если эмбрионы наилучшего качества из двух групп имеют одинаковый сорт, группа, из которой будет выбран эмбрион для переноса, будет определена на основе предварительно сгенерированной компьютерной последовательности рандомизации. Чётное случайное число указывает на выбор эмбриона наилучшего качества из контрольной группы для переноса одной бластоцисты, тогда как нечётное случайное число указывает на выбор эмбриона наилучшего качества из группы вмешательства.

Критерии прекращения или изменения вмешательства: 1) В случае лабораторных инцидентов, таких как неисправность инкубатора или загрязнение культуральной среды, эмбрионы будут немедленно перенесены в резервный инкубатор или чашку для культивирования, и инцидент будет зафиксирован в карте наблюдения (CRF). 2) Если участник отзывает согласие, вмешательство будет немедленно прекращено. Данные, полученные до отзыва, будут сохранены для анализа в соответствии с принципом намерения лечить.

Стратегии для повышения соблюдения и меры мониторинга: 1) Контроль качества лаборатории: Температура и уровень CO2 будут автоматически записываться ежедневно и вручную калиброваться; все инкубаторы будут оборудованы круглосуточным дистанционным мониторингом с сигнализацией. 2) Стандартизация процедур: Будут установлены и строго соблюдаться стандартные операционные процедуры (СОП); замена культуральной среды будет проверяться независимо двумя сотрудниками.

3) Слепая оценка: Оценка бластоцист будет проводиться старшими эмбриологами, не знающими распределения по группам, и все изображения оценки будут архивированы.

Запрещённые сопутствующие вмешательства во время исследования: Следующие вмешательства не будут разрешены во время исследования: вспомогательный хэтчинг (ВХ), эмбриональный клей или другие специальные процедуры манипуляции с эмбрионами; использование инкубаторов или культуральных сред, не указанных в протоколе исследования; и, в экспериментальной группе, открытие крышки культуральной камеры или чашки во время культивирования для ручного наблюдения или замены среды.

Расчёт показателей исходов

1. Основной показатель исхода Клиническая частота беременности: Доля циклов с клинической беременностью от общего числа циклов переноса эмбрионов.

   Временные рамки: 4-7 недель после переноса эмбрионов Определение: Клиническая беременность определяется как наличие внутриматочного гестационного мешка, обнаруженного при ультразвуковом исследовании через 4-7 недель после переноса эмбрионов, или патологическое подтверждение продуктов выкидыша.

2. Второстепенные показатели исходов

1. Нормальная частота оплодотворения при ЭКО: Доля ооцитов с двумя пронуклеусами (2ПН) и двумя полярными тельцами (2ПТ), наблюдаемыми на 1-й день, от общего числа инсеминированных ооцитов при ЭКО. Временные рамки: 1-й день после оплодотворения Нормальная частота оплодотворения при ИКСИ: Доля ооцитов с 2ПН и 2ПТ, наблюдаемыми на 1-й день, от общего числа инъецированных ооцитов метафазы II (MII). Временные рамки: 1-й день после оплодотворения

2. Частота дробления: Доля эмбрионов стадии дробления на 2-й день от общего числа нормально оплодотворённых ооцитов.

   Временные рамки: 2-й день после оплодотворения

3. Частота эмбрионов хорошего качества на 3-й день: Доля эмбрионов хорошего качества на 3-й день от общего числа нормально оплодотворённых ооцитов.

   Временные рамки: 3-й день после оплодотворения

4. Частота пригодных эмбрионов на 3-й день: Доля пригодных эмбрионов на 3-й день от общего числа нормально оплодотворённых ооцитов.

   Временные рамки: 3-й день после оплодотворения

5. Частота образования бластоцист хорошего качества: Доля бластоцист хорошего качества от общего числа нормально оплодотворённых ооцитов.

   Временные рамки: 5/6-й день после оплодотворения

6. Частота пригодных бластоцист на 5/6-й день: Доля пригодных бластоцист на 5/6-й день от общего числа нормально оплодотворённых ооцитов.

   Временные рамки: 5/6-й день после оплодотворения

7. Частота образования бластоцист: Доля всех образовавшихся бластоцист на 5/6-й день от общего числа нормально оплодотворённых ооцитов.

   Временные рамки: 5/6-й день после оплодотворения

8. Частота имплантации: Доля обнаруженных гестационных мешков после переноса эмбрионов от общего числа перенесённых бластоцист.

Временные рамки: Приблизительно 4-7 недель после переноса эмбрионов (9) Биохимическая частота беременности: Доля циклов с положительным сывороточным β-ХГЧ после переноса эмбрионов, но без обнаружения гестационного мешка при ультразвуковом исследовании, от общего числа циклов переноса эмбрионов.

Временные рамки: Приблизительно 14 дней после переноса эмбрионов (10) Частота ранних выкидышей: Доля циклов спонтанного выкидыша, произошедших в течение 12 недель беременности, от циклов с клинической беременностью. Временные рамки: В течение 12 недель беременности (11) Частота продолжающейся беременности: Доля циклов с жизнеспособной беременностью, продолжающейся как минимум до 12 недель после клинической беременности, от общего числа циклов переноса эмбрионов.

Временные рамки: На 12-й неделе беременности или позже (12) Частота живорождений (первый перенос эмбрионов) Доля первых циклов переноса эмбрионов, которые приводят как минимум к одному живорождению. Временные рамки: При родах

Набор участников: Участники будут набираться из бесплодных пациентов, планирующих пройти циклы ЭКО или ИКСИ в 12 центрах репродуктивной медицины, участвующих в этом исследовании. Первичный скрининг будет проводиться обученными врачами, знакомыми с процедурами исследования, среди пациентов, посещающих центры репродуктивной медицины. Для потенциальных участников, соответствующих критериям включения, исследователь представит исследование обоим партнёрам, включая его цель, процедуры, потенциальные риски и преимущества, и предоставит достаточное время для рассмотрения их готовности к участию. Все вопросы, заданные парой относительно исследования, будут полностью разъяснены. После получения полного и подробного информированного согласия оба партнёра и исследователь совместно подпишут форму информированного согласия.

Ослепление: Отсутствует (Открытое)

Сбор данных

1. Базовые данные будут собраны после получения письменного информированного согласия, включая уровни половых гормонов в сыворотке (Э2, ЛГ, ФСГ, ПРЛ, П и Т на 2-5 дни менструального цикла), подсчёт антральных фолликулов (ПАФ) и рутинный анализ спермы. Другие лабораторные тесты, необходимые для рутинного клинического ведения во время стимуляции яичников, забора ооцитов и циклов переноса замороженных эмбрионов, будут проводиться согласно стандартной практике, но не будут включены в показатели исходов исследования.
2. В период вмешательства будет записано общее количество полученных ооцитов и количество, распределённое в контрольную и экспериментальную группы. Если общее количество ооцитов нечётное, также будет задокументирован метод, использованный для случайного распределения последнего ооцита. С 16-18 часов после оплодотворения (1-й день) до стадии бластоцисты (5/6-й день), исходы оплодотворения, ежедневное развитие эмбрионов и параметры среды инкубатора (включая температуру и концентрацию газов) будут записываться в карту наблюдения (CRF) в реальном времени эмбриологами.
3. Данные исходов будут включать все основные и второстепенные показатели исходов. Для обеспечения качества данных ключевые данные исходов будут перепроверены, весь исследовательский персонал получит стандартизированное обучение, и будет проводиться регулярная очистка данных для выявления пропущенных, противоречивых или некорректных записей. Для повышения удержания участников и завершения наблюдения исследователи предоставят подробные разъяснения по исследованию при включении, письменные материалы по исследованию, специальную контактную информацию и соответствующую финансовую компенсацию.

Управление данными (1) Ввод данных будет выполняться одновременно со сбором клинических данных. Вопросы, выявленные во время ввода или проверки данных, будут задокументированы в письменной форме и разрешены главным исследователем. Все изменения будут задокументированы и сохранены вместе с CRF. Все данные исследования будут храниться конфиденциально и не могут быть раскрыты третьим лицам без письменного разрешения спонсора.

(2) После завершения проверки данных и подтверждения их точности база данных будет заблокирована совместно ведущим центром, сотрудничающими центрами и статистиком. После блокировки базы данных изменения не будут разрешены. План статистического анализа будет окончательно утверждён до блокировки базы данных.

Статистический анализ (1) Аналитические популяции Полный аналитический набор (FAS) будет включать всех рандомизированных участников, получивших как минимум одно исследовательское вмешательство и имеющих данные оценки после вмешательства, следуя принципу намерения лечить. Пропущенные данные в FAS будут обработаны с использованием метода последнего перенесённого наблюдения (LOCF).

Набор по протоколу (PPS) будет включать участников, которые завершили лечение и наблюдение в соответствии с протоколом без серьёзных отклонений от протокола, влияющих на эффективность. PPS будет использоваться в качестве основного аналитического набора для оценки эффективности.

Статистические методы

1. Все статистические тесты будут двусторонними, и P ≤ 0,05 будет считаться статистически значимым. Непрерывные переменные будут обобщены с использованием среднего значения, стандартного отклонения, медианы, минимума и максимума, в зависимости от ситуации. Категориальные переменные будут обобщены с использованием частот и процентов. Статистические анализы будут выполнены с использованием SPSS 25.0 или R.
2. Базовые характеристики будут проанализированы описательно. Нормальность непрерывных переменных будет оценена с использованием гистограмм и теста Шапиро. Нормально распределённые переменные будут представлены как среднее ± стандартное отклонение; ненормально распределённые переменные будут представлены как медиана и межквартильный размах.
3. Клиническая частота беременности, основной исход, будет сравнена между группами с использованием стратифицированного хи-квадрат теста Кохрена-Мантеля-Хензеля (CMH), с поправкой на базовые характеристики и эффекты центра с использованием многомерной логистической регрессии.
4. Второстепенные исходы, включая частоту оплодотворения, частоту дробления, частоту развития эмбрионов на 3-й день, частоту образования бластоцист, частоту имплантации, биохимическую частоту беременности, частоту выкидышей, частоту продолжающейся беременности и частоту живорождений, также будут сравнены между группами с использованием стратифицированного хи-квадрат теста CMH.
5. Частоты выбывания и отзывов, связанных с нежелательными явлениями, будут сравнены между группами с использованием хи-квадрат теста или точного теста Фишера. Продолжительность исследования будет сравнена с использованием t-теста для независимых выборок или критерия суммы рангов Уилкоксона, в зависимости от ситуации.

Мониторинг данных Формальный независимый Комитет по мониторингу данных (DMC) не будет создан для этого исследования, поскольку это клиническое исследование, инициированное исследователем, включающее рутинные процедуры ВРТ и вмешательства по культивированию эмбрионов с относительно низким ожидаемым риском. Мониторинг данных будет выполняться персоналом, квалифицированным в надлежащей клинической практике (GCP), из компании Suzhou Basecare Medical Corporation Ltd. или Шестой больницы Университета Сунь Ятсена.

Промежуточный анализ и критерии прекращения Промежуточный анализ планируется, когда будет набрано 50% целевого размера выборки. Промежуточный анализ оценит основной исход (клиническую частоту беременности) и выбранные второстепенные исходы, включая частоту оплодотворения, частоту дробления, развитие эмбрионов на 2/3-й день и частоту образования бластоцист. Данные безопасности, включая все нежелательные явления (НЯ) и серьёзные нежелательные явления (СНЯ), также будут рассмотрены.

Исследование может быть приостановлено или досрочно прекращено при следующих обстоятельствах: Проблемы безопасности: если выявлена значительная проблема безопасности в любой из групп, например, неожиданно высокая частота аномального развития эмбрионов; Ясные доказательства пользы: если экспериментальная группа показывает значительно более высокую клиническую частоту беременности, чем контрольная группа (p < 0,001), и продолжение считается ненужным; Ясные доказательства неэффективности/бесполезности: если экспериментальная группа показывает значительно более низкую клиническую частоту беременности, чем контрольная группа (p < 0,001).

Главный исследователь рассмотрит промежуточные результаты и даст рекомендации относительно продолжения, приостановки или прекращения исследования.

Вред (Нежелательные явления) Все нежелательные явления (НЯ) и серьёзные нежелательные явления (СНЯ), возникающие во время исследования, будут собираться, оцениваться, записываться, отчитываться и отслеживаться.

НЯ определяется как любое неблагоприятное медицинское событие или ухудшение ранее существовавшего состояния во время стимуляции яичников или других процедур, связанных с исследованием, включая симптомы, признаки или аномальные лабораторные находки.

СНЯ определяется как любое событие, которое приводит к смерти, угрожает жизни, требует госпитализации или продления госпитализации, приводит к стойкой или значительной инвалидности/нетрудоспособности, приводит к врождённой аномалии или пороку развития, или является иным образом важным с медицинской точки зрения.

Для каждого НЯ/СНЯ исследователь запишет время начала, тяжесть, продолжительность, предпринятые действия, исход и связь с исследовательским вмешательством. Причинность будет классифицирована как определённо связанная, возможно связанная, возможно не связанная, определённо не связанная или не поддающаяся оценке.

Участники будут отслеживаться с момента получения информированного согласия до конца наблюдения через телефонный или личный контакт. Для СНЯ вся соответствующая клиническая информация и данные наблюдения будут задокументированы в исходных записях.

Аудит Внутренние аудиты будут регулярно проводиться больницей для обеспечения постоянного соблюдения протокола.

Содержание аудита будет включать: Целостность данных: проверка файлов участников, CRF, лабораторных записей и форм информированного согласия для подтверждения полноты, точности и логической согласованности; Соблюдение процедур: проверка ключевых исследовательских процедур, включая культивирование эмбрионов, рандомизацию и ввод данных, для обеспечения соблюдения СОП; Управление участниками: проверка процедур включения, наблюдения и отзыва; Обслуживание оборудования: проверка записей эксплуатации и технического обслуживания инкубаторов, микроскопов и другого соответствующего оборудования.

Результаты аудита будут представлены исследовательской группе и спонсору в течение 10 рабочих дней после завершения аудита вместе с рекомендациями по корректирующим действиям.

Изменения протокола Любые важные изменения протокола, включая изменения критериев включения, показателей исходов или статистических методов, будут обсуждаться исследовательской группой и подтверждаться главным исследователем (PI) и статистической группой. Письменное уведомление о крупных изменениях будет предоставлено всем членам исследовательской группы в течение 72 часов через внутренние каналы связи вместе с графиком реализации. Соответствующий персонал получит дополнительное обучение по мере необходимости. Включённые участники будут проинформированы о важных изменениях по телефону или через WeChat. Этические комитеты/IRB и реестры исследований также будут уведомлены в соответствии с применимыми требованиями.

Информированное согласие Потенциальные участники сначала будут обращены клиницистом, знакомым с протоколом и процедурами исследования. Будут разъяснены цель, процедуры, потенциальные риски и возможные преимущества исследования, и будет предоставлена копия формы информированного согласия для тщательного ознакомления. Участникам будет предоставлено достаточно времени, чтобы задать вопросы и рассмотреть участие. Письменное информированное согласие будет получено добровольно до выполнения любых специфических для исследования процедур. Как участник, так и исследователь подпишут форму информированного согласия, которая будет храниться в файлах исследования.

В этом исследовании эмбрионы могут культивироваться с использованием ненарушаемой закрытой системы культивирования, что, как ожидается, улучшит частоту образования бластоцист и эмбрионов хорошего качества. За исключением назначенной системы культивирования, все процедуры будут следовать рутинной больничной практике и не ожидается, что они создадут дополнительные риски.

Конфиденциальность Будут собраны только необходимые данные исследования, и данные участников будут обезличены как можно раньше. Доступ к персональным данным будет ограничен в соответствии с разрешениями на основе ролей. Передача идентифицируемых данных через незащищённую электронную почту будет запрещена. После завершения исследования окончательная база данных будет анонимизирована и заблокирована. Независимые мониторы данных будут контролировать процедуры защиты данных и подписывать соглашения о конфиденциальности.

Декларация интересов Главный исследователь и главные исследователи участвующих центров заявляют, что у них нет финансовых или иных конфликтов интересов, связанных с этим исследованием.

Доступ к данным Все данные исследования, собранные во время испытания, будут представлены в Шестую больницу Университета Сунь Ятсена. Главный исследователь будет отвечать за подготовку отчёта о клиническом исследовании и рукописей, с участием участвующих центров. Соответствующие документы исследования, включая исходные записи, подписанные формы информированного согласия, CRF и другие исследовательские записи, будут сохранены для проверки, надзора и анализа. Доступ к окончательному набору данных испытания будет ограничен авторизованными исследователями и статистиками.

Вспомогательная и последующая помощь Не применимо.

Политика распространения Вся информация, связанная с исследованием, будет рассматриваться как конфиденциальная до завершения исследования и проверки окончательных статистических анализов. Результаты исследования могут быть опубликованы или представлены после авторизации ведущим исследовательским центром. Конфиденциальная или собственная информация не будет раскрыта.