Et prospektivt, multicenter, randomiseret kontrolleret klinisk forsøg med et uforstyrret embryokultursystem til forbedring af embryers in vitro udviklingspotentiale (Embryos UECS)

Under studiet vil deltagerne blive udelukket fra yderligere deltagelse, hvis en af følgende betingelser er opfyldt. Udelukkelseskriterier: 1) Indsamling af ≤1 ægcelle; 2) Ufuldstændige kliniske data; 3) Patienter i enten kontrolgruppen eller interventionsgruppen, hvis embryoer krævede overførsel eller kryokonservering på dag 3, hvilket resulterede i afbrydelse af studieprotokollen for udvidet dyrkning til blastocyststadiet; 4) Patienter, der trak deres informerede samtykke tilbage.

Randomiseringsprocedure

1. Den detaljerede ægcellerandomiseringsprocedure er som følger: Alle cumulus-ægcellekomplekser (COCs) fra hver patient vil blive tilfældigt fordelt i et forhold på 1:1 til kontrolgruppen eller eksperimentgruppen. Hvis antallet af indsamlede ægceller er ulige, vil den resterende enkeltægcelle efter 1:1-randomisering blive tildelt på grundlag af pariteten af det tilsvarende nummer i en forudgenereret computerrandomiseringstabel. Et lige tal angiver tildeling til kontrolgruppen, hvorimod et ulige tal angiver tildeling til interventionsgruppen.

   Desuden vil zygoter uden synlige to pronuclei (2PN) efter befrugtning i henhold til anbefalingerne fra Istanbul Ekspertkonsensus 2024 blive betragtet som anvendelige embryoer i både kontrol- og eksperimentgruppen. Sådanne embryoer vil ikke blive kasseret og vil fortsætte efterfølgende dyrkning inden for deres respektive tildelte dyrkningssystemer. Ægcelleindvinding, ægcellebehandling og befrugtningsmetoder i ART-cykler vil blive udført i henhold til patienternes kliniske indikationer og reproduktionsmedicinsk centers standard procedurer.

2. Den detaljerede randomiseringsprocedure for embryooverførsel er som følger: Hvis de bedst kvalitetsembryoer fra de to grupper er af samme grad, vil gruppen, hvorfra embryoet til overførsel vælges, blive bestemt på grundlag af en forudgenereret computerrandomiseringssekvens. Et lige tilfældigt tal angiver valg af det bedst kvalitetsembryo fra kontrolgruppen til enkelt blastocystoverførsel, hvorimod et ulige tilfældigt tal angiver valg af det bedst kvalitetsembryo fra interventionsgruppen.

Kriterier for afbrydelse eller ændring af interventionen: 1) Ved laboratorieulykker, såsom inkubatorfejl eller kontaminering af dyrkningsmedium, vil embryoer straks blive overført til en backup-inkubator eller -dyrkningsskål, og hændelsen vil blive dokumenteret i caserapportformularen (CRF). 2) Hvis en deltager trækker samtykket tilbage, vil interventionen blive afbrudt øjeblikkeligt. Data genereret før tilbagetrækning vil blive bevaret til analyse i henhold til intention-to-treat-princippet.

Strategier for at forbedre overholdelse og monitoreringsforanstaltninger: 1) Laboratoriekvalitetskontrol: Temperatur og CO2-niveauer vil blive automatisk registreret dagligt og manuelt kalibreret; alle inkubatorer vil være udstyret med 24-timers fjernalarmovervågning. 2) Procedurestandardisering: Standard procedurer (SOPs) vil blive etableret og strengt implementeret; udskiftning af dyrkningsmedium vil blive verificeret uafhængigt af to medarbejdere.

3) Blind vurdering: Blastocystgradering vil blive udført af senior embryologer, der er blinde for gruppetildeling, og alle vurderingsbilleder vil blive arkiveret.

Forbudte samtidige interventioner under forsøget: Følgende interventioner vil ikke være tilladt under forsøget: assisteret klækning (AH), embryolim eller andre særlige embryomanipulationsprocedurer; brug af inkubatorer eller dyrkningsmedier, der ikke er specificeret i studieprotokollen; og, i eksperimentgruppen, åbning af dyrkningskammeret eller skåldækslet under dyrkning for manuel observation eller mediumudskiftning.

Beregning af udfaldsmål

1. Primært udfaldsmål Klinisk graviditetsrate: Andelen af kliniske graviditetscykler blandt det samlede antal embryooverførselscykler.

   Tidsramme: 4-7 uger efter embryooverførsel Definition: Klinisk graviditet defineres som tilstedeværelsen af en intrauterin graviditetssæk påvist ved ultralydsscanning 4-7 uger efter embryooverførsel, eller patologisk bekræftelse af abortprodukter.

2. Sekundære udfaldsmål

1. Normal befrugtningsrate i IVF: Andelen af ægceller med to pronuclei (2PN) og to pollegemer (2PB) observeret på dag 1 blandt det samlede antal inseminerede ægceller i IVF. Tidsramme: Dag 1 efter befrugtning Normal befrugtningsrate i ICSI: Andelen af ægceller med 2PN og 2PB observeret på dag 1 blandt det samlede antal injicerede metafase II (MII) ægceller. Tidsramme: Dag 1 efter befrugtning

2. Klargøringssats: Andelen af klargøringsstadieembryoer på dag 2 blandt det samlede antal normalt befrugtede ægceller.

   Tidsramme: Dag 2 efter befrugtning

3. Dag 3 godkvalitetsembryorate: Andelen af godkvalitetsembryoer på dag 3 blandt det samlede antal normalt befrugtede ægceller.

   Tidsramme: Dag 3 efter befrugtning

4. Dag 3 anvendelig embryorate: Andelen af anvendelige embryoer på dag 3 blandt det samlede antal normalt befrugtede ægceller.

   Tidsramme: Dag 3 efter befrugtning

5. Godkvalitets blastocystdannelsesrate: Andelen af godkvalitets blastocyster blandt det samlede antal normalt befrugtede ægceller.

   Tidsramme: Dag 5/6 efter befrugtning

6. Dag 5/6 anvendelig blastocystrate: Andelen af anvendelige blastocyster på dag 5/6 blandt det samlede antal normalt befrugtede ægceller.

   Tidsramme: Dag 5/6 efter befrugtning

7. Blastocystdannelsesrate: Andelen af samlede dannede blastocyster på dag 5/6 blandt det samlede antal normalt befrugtede ægceller.

   Tidsramme: Dag 5/6 efter befrugtning

8. Implantationsrate: Andelen af graviditetssække påvist efter embryooverførsel blandt det samlede antal overførte blastocyster.

Tidsramme: Cirka 4-7 uger efter embryooverførsel (9) Biokemisk graviditetsrate: Andelen af cykler med positivt serum β-hCG efter embryooverførsel, men ingen graviditetssæk påvist ved ultralydsscanning, blandt det samlede antal embryooverførselscykler.

Tidsramme: Cirka 14 dage efter embryooverførsel (10) Tidlig abortrate: Andelen af spontane abortcykler inden for 12 uger af graviditeten blandt de kliniske graviditetscykler. Tidsramme: Inden for 12 uger af graviditeten (11) Igangværende graviditetsrate: Andelen af cykler med en levedygtig graviditet, der fortsætter til mindst 12 uger efter klinisk graviditet, blandt det samlede antal embryooverførselscykler.

Tidsramme: Ved eller efter 12 uger af graviditeten (12) Levendefødselsrate (første embryooverførsel) Andelen af første embryooverførselscykler, der resulterer i mindst én levendefødsel. Tidsramme: Ved fødslen

Rekruttering: Deltagere vil blive rekrutteret fra infertile patienter, der planlægger at gennemgå IVF- eller ICSI-cykler på de 12 reproduktionsmedicinske centre, der deltager i dette forsøg. Indledende screening vil blive udført af trænede læger, der er fortrolige med studieprocedurerne, blandt patienter, der besøger reproduktionsmedicinske centre. For potentielle deltagere, der opfylder berettigelseskriterierne, vil undersøgeren introducere studiet for begge partnere, inklusive dets formål, procedurer, potentielle risici og fordele, og vil give tilstrækkelig tid til, at de kan overveje, om de er villige til at deltage. Alle spørgsmål, parret rejser vedrørende studiet, vil blive fuldt ud adresseret. Efter fuldt og detaljeret informeret samtykke er indhentet, vil begge partnere og undersøgeren fælles underskrive det informerede samtykkeskema.

Blinding: Ingen (Åben-label)

Dataindsamling

1. Baselinedata vil blive indsamlet efter skriftligt informeret samtykke er indhentet, inklusive serum kønshormonniveauer (E2, LH, FSH, PRL, P og T på menstruationscyklus dag 2-5), antral follikeltælling (AFC) og rutinemæssig sædanalyse. Andre laboratorieprøver, der kræves til rutinemæssig klinisk håndtering under ovarialstimulation, ægcelleindvinding og frosne embryooverførselscykler, vil blive udført i henhold til standard praksis, men vil ikke blive inkluderet som studieudfaldsmål.
2. Under interventionsperioden vil det samlede antal indsamlede ægceller og antallet tildelt kontrol- og eksperimentgrupperne blive registreret. Hvis det samlede antal ægceller er ulige, vil metoden brugt til tilfældig tildeling af den sidste ægcelle også blive dokumenteret. Fra 16-18 timer efter befrugtning (dag 1) til blastocyststadiet (dag 5/6), vil befrugtningsresultater, daglig embryoudvikling og inkubator miljøparametre (inklusive temperatur og gaskoncentration) blive registreret i caserapportformularen (CRF) i realtid af embryologer.
3. Udfaldsdata vil inkludere alle primære og sekundære udfaldsmål. For at sikre datakvalitet vil nøgleudfaldsdata blive dobbelttjekket, alle studiemedarbejdere vil modtage standardiseret træning, og regelmæssig datarensning vil blive udført for at identificere manglende, inkonsistente eller forkerte indtastninger. For at forbedre deltagerfastholdelse og opfølgningsfuldførelse vil undersøgere give detaljerede studieforklaringer ved tilmelding, skriftlige studiematerialer, dedikeret kontaktinformation og passende økonomisk kompensation.

Datastyring (1) Dataindtastning vil blive udført samtidig med klinisk dataindsamling. Spørgsmål identificeret under dataindtastning eller gennemgang vil blive dokumenteret skriftligt og løst af hovedundersøgeren. Alle ændringer vil blive dokumenteret og opbevaret sammen med CRF'erne. Alle studiedata vil holdes fortrolige og må ikke offentliggøres for tredjeparter uden skriftlig autorisation fra sponsor.

(2) Efter afslutning af datagennemgang og bekræftelse af datanøjagtighed, vil databasen blive låst fælles af det førende center, samarbejdende centre og statistikeren. Ingen ændringer vil være tilladt efter databaselås. Den statistiske analyseplan vil blive finaliseret før databaselås.

Statistisk analyse (1) Analysepopulationer Fuldt analysesæt (FAS) vil inkludere alle randomiserede deltagere, der modtager mindst én studieintervention og har post-interventionsvurderingsdata, i henhold til intention-to-treat-princippet. Manglende data i FAS vil blive håndteret ved brug af last observation carried forward (LOCF) metoden.

Per-protokol sæt (PPS) vil inkludere deltagere, der gennemfører behandling og opfølgning i henhold til protokollen uden større protokolaftvigelser, der påvirker effektiviteten. PPS vil blive brugt som det primære analysessæt til effektivitetsvurdering.

Statistiske metoder

1. Alle statistiske tests vil være tosidede, og P ≤ 0,05 vil blive betragtet som statistisk signifikant. Kontinuerte variable vil blive opsummeret ved brug af middelværdi, standardafvigelse, median, minimum og maksimumværdier, som passende. Kategoriske variable vil blive opsummeret ved brug af frekvenser og procenter. Statistiske analyser vil blive udført ved brug af SPSS 25.0 eller R.
2. Baselinekarakteristika vil blive analyseret deskriptivt. Normalitet af kontinuerte variable vil blive vurderet ved brug af histogrammer og Shapiro-testen. Normalfordelte variable vil blive præsenteret som middelværdi ± standardafvigelse; ikke-normalfordelte variable vil blive præsenteret som median og interkvartilområde.
3. Klinisk graviditetsrate, det primære udfald, vil blive sammenlignet mellem grupper ved brug af Cochran-Mantel-Haenszel (CMH) stratificeret chi-i-anden-test, med justering for baselinekarakteristika og centereffekter ved brug af multivariabel logistisk regression.
4. Sekundære udfald, inklusive befrugtningsrate, klargøringssats, dag 3 embryoudviklingsrate, blastocystdannelsesrate, implantationsrate, biokemisk graviditetsrate, abortrate, igangværende graviditetsrate og levendefødselsrate, vil også blive sammenlignet mellem grupper ved brug af CMH stratificeret chi-i-anden-test.
5. Dropout-rater og bivirkningsrelaterede tilbagetrækningsrater vil blive sammenlignet mellem grupper ved brug af chi-i-anden-testen eller Fishers eksakte test. Studievarighed vil blive sammenlignet ved brug af den uafhængige stikprøve t-test eller Wilcoxons rangsumtest, som passende.

Datamonitorering Der vil ikke blive etableret et formelt uafhængigt Data Monitoring Committee (DMC) for dette studie, fordi dette er en undersøger-initieret klinisk undersøgelse, der involverer rutinemæssige ART-procedurer og embryodyrkningsinterventioner med relativt lav forventet risiko. Datamonitorering vil blive udført af personer kvalificeret i Good Clinical Practice (GCP) fra Suzhou Basecare Medical Corporation Ltd. eller The Sixth Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University.

Interimanalyse og stoppeguider En interimanalyse er planlagt, når 50% af det målrettede stikprøvestørrelse er inkluderet. Interimanalysen vil evaluere det primære udfald (klinisk graviditetsrate) og udvalgte sekundære udfald, inklusive befrugtningsrate, klargøringssats, dag 2/dag 3 embryoudvikling og blastocystdannelsesrate. Sikkerhedsdata, inklusive alle bivirkninger (AEs) og alvorlige bivirkninger (SAEs), vil også blive gennemgået.

Studiet kan blive suspenderet eller afsluttet tidligt under følgende omstændigheder: Sikkerhedsbekymringer: hvis et signifikant sikkerhedsproblem identificeres i enten gruppe, såsom en uventet høj rate af unormal embryoudvikling; Klart bevis for fordel: hvis eksperimentgruppen viser en signifikant højere klinisk graviditetsrate end kontrolgruppen (p < 0,001) og fortsættelse anses for unødvendig; Klart bevis for underlegenhed/nytteløshed: hvis eksperimentgruppen viser en signifikant lavere klinisk graviditetsrate end kontrolgruppen (p < 0,001).

Hovedundersøgeren vil gennemgå interimresultaterne og give anbefalinger vedrørende studiefortsættelse, suspension eller afslutning.

Skader (Bivirkninger) Alle bivirkninger (AEs) og alvorlige bivirkninger (SAEs), der forekommer under studiet, vil blive indsamlet, vurderet, registreret, rapporteret og fulgt op.

En AE defineres som enhver uønsket medicinsk hændelse eller forværring af en eksisterende tilstand under ovarialstimulation eller andre studie-relaterede procedurer, inklusive symptomer, tegn eller abnormale laboratoriefund.

En SAE defineres som enhver hændelse, der resulterer i død, er livstruende, kræver hospitalsindlæggelse eller forlængelse af hospitalsindlæggelse, resulterer i vedvarende eller signifikant handicap/uførhed, fører til medfødt misdannelse eller fødselsdefekt, eller ellers er medicinsk vigtig.

For hver AE/SAE vil undersøgeren registrere starttidspunktet, alvorlighed, varighed, trufne foranstaltninger, udfald og relation til studieinterventionen. Årsagssammenhæng vil blive klassificeret som bestemt relateret, muligvis relateret, muligvis urelateret, bestemt urelateret eller ikke vurderbar.

Deltagere vil blive overvåget fra tidspunktet for informeret samtykke indtil slutningen af opfølgningen gennem telefon- eller ansigt-til-ansigt kontakt. For SAEs vil al relevant klinisk information og opfølgningsdata blive dokumenteret i kildedokumenterne.

Revision Interne revisioner vil blive udført regelmæssigt af hospitalet for at sikre fortsat protokoloverholdelse.

Revisionsindhold vil inkludere: Dataintegritet: gennemgang af deltagerfiler, CRF'er, laboratorieoptægninger og informerede samtykkeskemaer for at bekræfte fuldstændighed, nøjagtighed og logisk konsistens; Proceduroverholdelse: gennemgang af nøglestudieprocedurer, inklusive embryodyrkning, randomisering og dataindtastning, for at sikre overholdelse af SOPs; Deltagerhåndtering: verificering af tilmeldings-, opfølgning- og tilbagetrækningsprocedurer; Udstyrsvedligeholdelse: gennemgang af drift- og vedligeholdelsesoptægninger for inkubatorer, mikroskoper og andet relevant udstyr.

Revisionsresultater vil blive indsendt til studieteamet og sponsor inden for 10 arbejdsdage efter revisionsafslutning, sammen med anbefalinger til korrigerende handlinger.

Protokolændringer Eventuelle vigtige protokolændringer, inklusive ændringer af berettigelseskriterier, udfaldsmål eller statistiske metoder, vil blive diskuteret af studieteamet og bekræftet af hovedundersøgeren (PI) og statistiske team. Skriftlig meddelelse om større ændringer vil blive givet til alle studieteammedlemmer inden for 72 timer gennem interne kommunikationskanaler, sammen med implementeringstidsplanen. Relevante medarbejdere vil modtage yderligere træning efter behov. Indmeldte deltagere vil blive informeret om vigtige ændringer gennem telefon- eller WeChat-opfølgning. Etikkomitéer/IRBs og forsøgsregistre vil også blive underrettet i henhold til gældende krav.

Informeret samtykke Potentielle deltagere vil først blive kontaktet af en kliniker, der er fortrolig med studieprotokollen og procedurerne. Studiets formål, procedurer, potentielle risici og mulige fordele vil blive forklaret, og en kopi af det informerede samtykkeskema vil blive givet til omhyggelig gennemgang. Deltagere vil få tilstrækkelig tid til at stille spørgsmål og overveje deltagelse. Skriftligt informeret samtykke vil blive indhentet frivilligt, før nogen studie-specifikke procedurer udføres. Både deltageren og undersøgeren vil underskrive det informerede samtykkeskema, som vil blive opbevaret i studiefilerne.

I dette studie kan embryoer blive dyrket ved brug af et uforstyrret lukket dyrkningssystem, hvilket forventes at forbedre blastocystdannelses- og godkvalitetsembryorater. Bortset fra det tildelte dyrkningssystem vil alle procedurer følge rutinemæssig hospitalspraksis og forventes ikke at introducere yderligere risici.

Fortrolighed Kun essentiel studieinformation vil blive indsamlet, og deltagerdata vil blive anonymiseret så tidligt som muligt. Adgang til personlige data vil blive begrænset i henhold til rollebaserede tilladelser. Overførsel af identificerbare data gennem usikker e-mail vil være forbudt. Efter studieafslutning vil den endelige database blive anonymiseret og låst. Uafhængige datamonitorer vil overvåge databeskyttelsesprocedurer og underskrive fortrolighedsaftaler.

Interessserklæring Hovedundersøgeren og hovedundersøgerne på de deltagende centre erklærer, at de ikke har økonomiske eller andre interessekonflikter relateret til dette studie.

Adgang til data Alle studiedata indsamlet under forsøget vil blive indsendt til The Sixth Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University. Hovedundersøgeren vil være ansvarlig for udarbejdelse af den kliniske studierapport og manuskripter, med input fra deltagende centre. Relevante forsøgsdokumenter, inklusive kildedokumenter, underskrevne informerede samtykkeskemaer, CRF'er og andre studieoptægninger, vil blive opbevaret til inspektion, tilsyn og analyse. Adgang til det endelige forsøgsdatasæt vil være begrænset til autoriserede undersøgere og statistikere.

Bistående og efter-forsøg pleje Ikke relevant.

Spredningspolitik Al studie-relateret information vil blive behandlet som fortrolig indtil studieafslutning og gennemgang af de endelige statistiske analyser. Studieresultater kan blive publiceret eller præsenteret efter autorisation af det førende studiemedcenter. Fortrolig eller proprietær information vil ikke blive offentliggjort.