Une étude clinique prospective, multicentrique, randomisée et contrôlée d'un système de culture embryonnaire non perturbé pour améliorer le potentiel de développement in vitro des embryons (Embryos UECS)

Pendant l'étude, les participants seront exclus de toute participation supplémentaire si l'une des conditions suivantes est remplie. Critères d'élimination : 1) Récupération de ≤1 ovocyte ; 2) Données cliniques incomplètes ; 3) Patients du groupe témoin ou du groupe d'intervention dont les embryons ont nécessité un transfert ou une cryoconservation au jour 3, entraînant l'interruption du protocole d'étude pour la culture prolongée jusqu'au stade blastocyste ; 4) Patients ayant retiré leur consentement éclairé.

Procédure de randomisation

1. La procédure détaillée de randomisation des ovocytes est la suivante : tous les complexes cumulus-ovocyte (COC) de chaque patient seront répartis aléatoirement dans un rapport 1:1 entre le groupe témoin et le groupe expérimental. Si le nombre d'ovocytes récupérés est impair, après randomisation 1:1, l'ovocyte restant sera attribué sur la base de la parité du numéro correspondant dans une table de randomisation informatique pré-générée. Un nombre pair indique une attribution au groupe témoin, tandis qu'un nombre impair indique une attribution au groupe d'intervention.

   De plus, conformément aux recommandations du consensus d'experts d'Istanbul 2024, les zygotes sans deux pronuclei (2PN) visibles après fécondation seront considérés comme des embryons utilisables dans les groupes témoin et expérimental. Ces embryons ne seront pas écartés et poursuivront leur culture ultérieure dans leurs systèmes de culture assignés respectifs. La récupération des ovocytes, le traitement des ovocytes et les méthodes de fécondation dans les cycles d'AMP seront réalisés selon les indications cliniques des patients et les procédures opératoires standard du centre de médecine de la reproduction.

2. La procédure détaillée de randomisation pour le transfert d'embryons est la suivante : Si les embryons de meilleure qualité des deux groupes sont de même grade, le groupe dont l'embryon pour le transfert est sélectionné sera déterminé sur la base d'une séquence de randomisation informatique pré-générée. Un nombre aléatoire pair indique la sélection de l'embryon de meilleure qualité du groupe témoin pour un transfert de blastocyste unique, tandis qu'un nombre aléatoire impair indique la sélection de l'embryon de meilleure qualité du groupe d'intervention.

Critères d'arrêt ou de modification de l'intervention : 1) En cas d'accidents de laboratoire, tels qu'une défaillance d'incubateur ou une contamination du milieu de culture, les embryons seront immédiatement transférés dans un incubateur de secours ou une boîte de culture, et l'incident sera documenté dans le cahier d'observation (CRF). 2) Si un participant retire son consentement, l'intervention sera immédiatement interrompue. Les données générées avant le retrait seront conservées pour analyse selon le principe en intention de traiter.

Stratégies pour améliorer l'adhésion et mesures de surveillance : 1) Contrôle qualité du laboratoire : La température et les niveaux de CO2 seront enregistrés automatiquement quotidiennement et calibrés manuellement ; tous les incubateurs seront équipés d'une surveillance par alarme à distance 24 heures sur 24. 2) Standardisation des procédures : Des procédures opératoires standard (SOP) seront établies et strictement mises en œuvre ; le remplacement du milieu de culture sera vérifié indépendamment par deux membres du personnel.

3) Évaluation en aveugle : Le classement des blastocystes sera effectué par des embryologistes seniors en aveugle de l'attribution des groupes, et toutes les images d'évaluation seront archivées.

Interventions concomitantes interdites pendant l'essai : Les interventions suivantes ne seront pas autorisées pendant l'essai : éclosion assistée (AH), colle embryonnaire ou autres procédures spéciales de manipulation d'embryons ; utilisation d'incubateurs ou de milieux de culture non spécifiés dans le protocole d'étude ; et, dans le groupe expérimental, ouverture de la chambre de culture ou du couvercle de la boîte pendant la culture pour observation manuelle ou remplacement du milieu.

Calcul des mesures de résultat

1. Mesure de résultat primaire Taux de grossesse clinique : La proportion de cycles de grossesse clinique parmi le nombre total de cycles de transfert d'embryons.

   Délai : 4-7 semaines après le transfert d'embryons Définition : La grossesse clinique est définie par la présence d'un sac gestationnel intra-utérin détecté par échographie 4-7 semaines après le transfert d'embryons, ou confirmation pathologique de produits de fausse couche.

2. Mesures de résultat secondaires

1. Taux de fécondation normale en FIV : La proportion d'ovocytes avec deux pronuclei (2PN) et deux corps polaires (2PB) observés au jour 1 parmi le nombre total d'ovocytes inséminés en FIV. Délai : Jour 1 après fécondation Taux de fécondation normale en ICSI : La proportion d'ovocytes avec 2PN et 2PB observés au jour 1 parmi le nombre total d'ovocytes métaphase II (MII) injectés. Délai : Jour 1 après fécondation

2. Taux de clivage : La proportion d'embryons au stade de clivage au jour 2 parmi le nombre total d'ovocytes normalement fécondés.

   Délai : Jour 2 après fécondation

3. Taux d'embryons de bonne qualité au jour 3 : La proportion d'embryons de bonne qualité au jour 3 parmi le nombre total d'ovocytes normalement fécondés.

   Délai : Jour 3 après fécondation

4. Taux d'embryons utilisables au jour 3 : La proportion d'embryons utilisables au jour 3 parmi le nombre total d'ovocytes normalement fécondés.

   Délai : Jour 3 après fécondation

5. Taux de formation de blastocystes de bonne qualité : La proportion de blastocystes de bonne qualité parmi le nombre total d'ovocytes normalement fécondés.

   Délai : Jour 5/6 après fécondation

6. Taux de blastocystes utilisables au jour 5/6 : La proportion de blastocystes utilisables au jour 5/6 parmi le nombre total d'ovocytes normalement fécondés.

   Délai : Jour 5/6 après fécondation

7. Taux de formation de blastocystes : La proportion de blastocystes totaux formés au jour 5/6 parmi le nombre total d'ovocytes normalement fécondés.

   Délai : Jour 5/6 après fécondation

8. Taux d'implantation : La proportion de sacs gestationnels détectés après transfert d'embryons parmi le nombre total de blastocystes transférés.

Délai : Environ 4-7 semaines après le transfert d'embryons (9) Taux de grossesse biochimique : La proportion de cycles avec β-hCG sérique positive après transfert d'embryons mais sans sac gestationnel détecté par échographie parmi le nombre total de cycles de transfert d'embryons.

Délai : Environ 14 jours après le transfert d'embryons (10) Taux de fausse couche précoce : La proportion de cycles de fausse couche spontanée survenant dans les 12 semaines de grossesse parmi les cycles de grossesse clinique. Délai : Dans les 12 semaines de grossesse (11) Taux de grossesse évolutive : La proportion de cycles avec une grossesse viable continuant au moins 12 semaines après la grossesse clinique parmi le nombre total de cycles de transfert d'embryons.

Délai : À ou au-delà de 12 semaines de grossesse (12) Taux de naissance vivante (premier transfert d'embryons) La proportion de premiers cycles de transfert d'embryons aboutissant à au moins une naissance vivante. Délai : À l'accouchement

Recrutement : Les participants seront recrutés parmi les patients infertiles prévoyant de subir des cycles de FIV ou d'ICSI dans les 12 centres de médecine de la reproduction participant à cet essai. Un dépistage initial sera effectué par des médecins formés et familiers avec les procédures de l'étude parmi les patients fréquentant les centres de médecine de la reproduction. Pour les participants potentiels répondant aux critères d'éligibilité, l'investigateur présentera l'étude aux deux partenaires, y compris son objectif, ses procédures, ses risques potentiels et ses avantages, et leur donnera suffisamment de temps pour réfléchir à leur volonté de participer. Toutes les questions soulevées par le couple concernant l'étude seront pleinement traitées. Après obtention d'un consentement éclairé complet et détaillé, les deux partenaires et l'investigateur signeront conjointement le formulaire de consentement éclairé.

Mise en aveugle : Aucune (étude ouverte)

Collecte des données

1. Les données de base seront collectées après obtention du consentement éclairé écrit, y compris les taux d'hormones sexuelles sériques (E2, LH, FSH, PRL, P et T aux jours 2-5 du cycle menstruel), le compte de follicules antraux (AFC) et l'analyse de sperme de routine. D'autres tests de laboratoire requis pour la prise en charge clinique de routine pendant la stimulation ovarienne, la récupération d'ovocytes et les cycles de transfert d'embryons congelés seront effectués selon la pratique standard mais ne seront pas inclus comme mesures de résultat de l'étude.
2. Pendant la période d'intervention, le nombre total d'ovocytes récupérés et le nombre attribué aux groupes témoin et expérimental seront enregistrés. Si le nombre total d'ovocytes est impair, la méthode utilisée pour l'attribution aléatoire du dernier ovocyte sera également documentée. De 16-18 heures après la fécondation (jour 1) jusqu'au stade blastocyste (jour 5/6), les résultats de la fécondation, le développement embryonnaire quotidien et les paramètres environnementaux de l'incubateur (y compris la température et la concentration en gaz) seront enregistrés en temps réel par les embryologistes dans le cahier d'observation (CRF).
3. Les données de résultat incluront toutes les mesures de résultat primaires et secondaires. Pour assurer la qualité des données, les données de résultat clés seront vérifiées en double, tout le personnel de l'étude recevra une formation standardisée et un nettoyage régulier des données sera effectué pour identifier les entrées manquantes, incohérentes ou incorrectes. Pour améliorer la rétention des participants et l'achèvement du suivi, les investigateurs fourniront des explications détaillées de l'étude à l'inscription, des documents écrits de l'étude, des coordonnées dédiées et une compensation financière appropriée.

Gestion des données (1) La saisie des données sera effectuée simultanément à la collecte des données cliniques. Les requêtes identifiées pendant la saisie ou la revue des données seront documentées par écrit et résolues par l'investigateur principal. Tous les changements seront documentés et conservés avec les CRF. Toutes les données de l'étude seront gardées confidentielles et ne pourront être divulguées à des tiers sans autorisation écrite du promoteur.

(2) Après achèvement de la revue des données et confirmation de l'exactitude des données, la base de données sera verrouillée conjointement par le centre coordinateur, les centres collaborateurs et le statisticien. Aucun changement ne sera autorisé après le verrouillage de la base de données. Le plan d'analyse statistique sera finalisé avant le verrouillage de la base de données.

Analyse statistique (1) Populations d'analyse L'ensemble d'analyse complet (FAS) inclura tous les participants randomisés qui reçoivent au moins une intervention de l'étude et disposent de données d'évaluation post-intervention, suivant le principe en intention de traiter. Les données manquantes dans le FAS seront traitées en utilisant la méthode de la dernière observation reportée (LOCF).

L'ensemble per protocole (PPS) inclura les participants qui complètent le traitement et le suivi selon le protocole sans déviations majeures du protocole affectant l'efficacité. Le PPS sera utilisé comme ensemble d'analyse principal pour l'évaluation de l'efficacité.

Méthodes statistiques

1. Tous les tests statistiques seront bilatéraux, et P ≤ 0,05 sera considéré comme statistiquement significatif. Les variables continues seront résumées en utilisant la moyenne, l'écart-type, la médiane, les valeurs minimales et maximales, selon le cas. Les variables catégorielles seront résumées en utilisant les fréquences et les pourcentages. Les analyses statistiques seront réalisées avec SPSS 25.0 ou R.
2. Les caractéristiques de base seront analysées de manière descriptive. La normalité des variables continues sera évaluée en utilisant des histogrammes et le test de Shapiro. Les variables distribuées normalement seront présentées sous forme de moyenne ± écart-type ; les variables non distribuées normalement seront présentées sous forme de médiane et d'intervalle interquartile.
3. Le taux de grossesse clinique, résultat primaire, sera comparé entre les groupes en utilisant le test du chi-carré stratifié de Cochran-Mantel-Haenszel (CMH), avec ajustement pour les caractéristiques de base et les effets centre en utilisant une régression logistique multivariée.
4. Les résultats secondaires, y compris le taux de fécondation, le taux de clivage, le taux de développement embryonnaire au jour 3, le taux de formation de blastocystes, le taux d'implantation, le taux de grossesse biochimique, le taux de fausse couche, le taux de grossesse évolutive et le taux de naissance vivante, seront également comparés entre les groupes en utilisant le test du chi-carré stratifié CMH.
5. Les taux d'abandon et les taux de retrait liés aux événements indésirables seront comparés entre les groupes en utilisant le test du chi-carré ou le test exact de Fisher. La durée de l'étude sera comparée en utilisant le test t pour échantillons indépendants ou le test de rang de Wilcoxon, selon le cas.

Surveillance des données Aucun comité indépendant de surveillance des données (DMC) formel ne sera établi pour cette étude, car il s'agit d'une étude clinique initiée par un investigateur impliquant des procédures d'AMP de routine et des interventions de culture d'embryons avec un risque anticipé relativement faible. La surveillance des données sera effectuée par du personnel qualifié en Bonne Pratique Clinique (GCP) de Suzhou Basecare Medical Corporation Ltd. ou du Sixième Hôpital Affilié, Université Sun Yat-sen.

Analyse intermédiaire et règles d'arrêt Une analyse intermédiaire est prévue lorsque 50% de la taille d'échantillon cible a été recrutée. L'analyse intermédiaire évaluera le résultat primaire (taux de grossesse clinique) et des résultats secondaires sélectionnés, y compris le taux de fécondation, le taux de clivage, le développement embryonnaire au jour 2/jour 3 et le taux de formation de blastocystes. Les données de sécurité, y compris tous les événements indésirables (EI) et événements indésirables graves (EIG), seront également examinées.

L'étude pourra être suspendue ou arrêtée prématurément dans les circonstances suivantes : Préoccupations de sécurité : si un problème de sécurité significatif est identifié dans l'un des groupes, tel qu'un taux élevé inattendu de développement embryonnaire anormal ; Preuve claire de bénéfice : si le groupe expérimental montre un taux de grossesse clinique significativement plus élevé que le groupe témoin (p < 0,001) et que la poursuite est jugée inutile ; Preuve claire d'infériorité/inutilité : si le groupe expérimental montre un taux de grossesse clinique significativement plus faible que le groupe témoin (p < 0,001).

L'investigateur principal examinera les résultats intermédiaires et fera des recommandations concernant la poursuite, la suspension ou l'arrêt de l'étude.

Effets indésirables (Événements indésirables) Tous les événements indésirables (EI) et événements indésirables graves (EIG) survenant pendant l'étude seront collectés, évalués, enregistrés, signalés et suivis.

Un EI est défini comme toute occurrence médicale défavorable ou aggravation d'une condition préexistante pendant la stimulation ovarienne ou d'autres procédures liées à l'étude, y compris les symptômes, signes ou résultats de laboratoire anormaux.

Un EIG est défini comme tout événement entraînant la mort, mettant en danger la vie, nécessitant une hospitalisation ou prolongeant l'hospitalisation, entraînant une incapacité/handicap persistant ou significatif, conduisant à une anomalie congénitale ou un défaut de naissance, ou étant autrement médicalement important.

Pour chaque EI/EIG, l'investigateur enregistrera le moment de survenue, la sévérité, la durée, les actions entreprises, l'issue et la relation avec l'intervention de l'étude. La causalité sera classée comme certainement liée, peut-être liée, peut-être non liée, certainement non liée ou non évaluable.

Les participants seront surveillés depuis le moment du consentement éclairé jusqu'à la fin du suivi par contact téléphonique ou en face-à-face. Pour les EIG, toutes les informations cliniques pertinentes et les données de suivi seront documentées dans les dossiers sources.

Audit Des audits internes seront régulièrement menés par l'hôpital pour assurer le respect continu du protocole.

Le contenu de l'audit inclura : Intégrité des données : revue des dossiers des participants, CRF, registres de laboratoire et formulaires de consentement éclairé pour confirmer l'exhaustivité, l'exactitude et la cohérence logique ; Conformité procédurale : revue des procédures clés de l'étude, y compris la culture d'embryons, la randomisation et la saisie des données, pour assurer l'adhésion aux SOP ; Gestion des participants : vérification des procédures d'inscription, de suivi et de retrait ; Maintenance des équipements : revue des registres d'opération et de maintenance des incubateurs, microscopes et autres équipements pertinents.

Les résultats de l'audit seront soumis à l'équipe d'étude et au promoteur dans les 10 jours ouvrables après achèvement de l'audit, avec des recommandations pour des actions correctives.

Modifications du protocole Toute modification importante du protocole, y compris les changements aux critères d'éligibilité, aux mesures de résultat ou aux méthodes statistiques, sera discutée par l'équipe d'étude et confirmée par l'investigateur principal (IP) et l'équipe statistique. Une notification écrite des modifications majeures sera fournie à tous les membres de l'équipe d'étude dans les 72 heures via les canaux de communication internes, avec le calendrier de mise en œuvre. Le personnel concerné recevra une formation supplémentaire si nécessaire. Les participants inscrits seront informés des modifications importantes par suivi téléphonique ou WeChat. Les comités d'éthique/IRB et les registres d'essais seront également notifiés conformément aux exigences applicables.

Consentement éclairé Les participants potentiels seront d'abord approchés par un clinicien familier avec le protocole et les procédures de l'étude. L'objectif de l'étude, les procédures, les risques potentiels et les avantages possibles seront expliqués, et une copie du formulaire de consentement éclairé sera fournie pour examen attentif. Les participants auront suffisamment de temps pour poser des questions et envisager la participation. Le consentement éclairé écrit sera obtenu volontairement avant toute procédure spécifique à l'étude. Le participant et l'investigateur signeront le formulaire de consentement éclairé, qui sera conservé dans les dossiers de l'étude.

Dans cette étude, les embryons pourront être cultivés en utilisant un système de culture fermé non perturbé, ce qui devrait améliorer les taux de formation de blastocystes et d'embryons de bonne qualité. À part le système de culture assigné, toutes les procédures suivront la pratique hospitalière de routine et ne devraient pas introduire de risques supplémentaires.

Confidentialité Seules les informations essentielles de l'étude seront collectées, et les données des participants seront dé-identifiées le plus tôt possible. L'accès aux données personnelles sera restreint selon des permissions basées sur les rôles. La transmission de données identifiables par email non sécurisé sera interdite. Après achèvement de l'étude, la base de données finale sera anonymisée et verrouillée. Des surveillants de données indépendants superviseront les procédures de protection des données et signeront des accords de confidentialité.

Déclaration d'intérêts L'investigateur principal et les investigateurs principaux des centres participants déclarent n'avoir aucun conflit d'intérêt financier ou autre lié à cette étude.

Accès aux données Toutes les données de l'étude collectées pendant l'essai seront soumises au Sixième Hôpital Affilié, Université Sun Yat-sen. L'investigateur principal sera responsable de la préparation du rapport d'étude clinique et des manuscrits, avec la contribution des centres participants. Les documents pertinents de l'essai, y compris les dossiers sources, les formulaires de consentement éclairé signés, les CRF et autres registres de l'étude, seront conservés pour inspection, surveillance et analyse. L'accès à l'ensemble de données final de l'essai sera limité aux investigateurs et statisticiens autorisés.

Soins annexes et post-essai Non applicable.

Politique de diffusion Toutes les informations liées à l'étude seront traitées comme confidentielles jusqu'à l'achèvement de l'étude et la revue des analyses statistiques finales. Les résultats de l'étude pourront être publiés ou présentés après autorisation du centre d'étude coordinateur. Les informations confidentielles ou propriétaires ne seront pas divulguées.