一项前瞻性、多中心、随机对照临床试验：探讨无干扰胚胎培养系统在提高胚胎体外发育潜能中的应用 (Embryos UECS)

在研究期间，若满足以下任一条件，参与者将被排除进一步参与。排除标准：1）获取≤1个卵母细胞；2）临床数据不完整；3）对照组或干预组中患者胚胎需在第3天进行移植或冷冻保存，导致延长培养至囊胚阶段的研究方案中断；4）患者撤回知情同意书。

随机化程序

1. 详细的卵母细胞随机化程序如下：每位患者的所有卵丘-卵母细胞复合物（COCs）将以1:1的比例随机分配到对照组或实验组。若获取的卵母细胞数量为奇数，经过1:1随机化后，剩余的单个卵母细胞将根据预生成的计算机随机化表中相应数字的奇偶性进行分配。偶数表示分配到对照组，奇数表示分配到干预组。

   此外，根据2024年伊斯坦布尔专家共识的建议，受精后未见两个原核（2PN）的受精卵在对照组和实验组中均将被视为可用胚胎。此类胚胎不会被丢弃，并将在其各自分配的培养系统中继续后续培养。辅助生殖技术周期中的取卵、卵母细胞处理和受精方法将根据患者的临床指征和生殖医学中心的标准操作程序进行。

2. 胚胎移植的详细随机化程序如下：若两组的最佳质量胚胎等级相同，移植胚胎的选择组别将基于预生成的计算机随机序列确定。偶数随机数表示选择对照组的最佳质量胚胎进行单囊胚移植，奇数随机数表示选择干预组的最佳质量胚胎。

干预中止或修改标准：1）若发生实验室事故，如培养箱故障或培养基污染，胚胎将立即转移至备用培养箱或培养皿，事件将记录在病例报告表（CRF）中。2）若参与者撤回同意，干预将立即中止。撤回前产生的数据将根据意向性治疗原则保留用于分析。

提高依从性和监测措施的策略：1）实验室质量控制：每日自动记录温度和CO2水平并进行手动校准；所有培养箱将配备24小时远程报警监控。2）程序标准化：制定并严格执行标准操作程序（SOP）；培养基更换将由两名工作人员独立验证。

3）盲法评估：囊胚分级将由对分组分配不知情的高级胚胎学家进行，所有评估图像将存档。

试验期间禁止的伴随干预：试验期间不允许进行以下干预：辅助孵化（AH）、胚胎胶或其他特殊胚胎操作程序；使用研究方案未指定的培养箱或培养基；以及在实验组中，培养期间打开培养室或培养皿盖进行手动观察或培养基更换。

结局指标计算

1. 主要结局指标临床妊娠率：临床妊娠周期数占胚胎移植周期总数的比例。

   时间范围：胚胎移植后4-7周定义：临床妊娠定义为胚胎移植后4-7周通过超声检测到宫内妊娠囊，或流产产物病理学确认。

2. 次要结局指标

1. 体外受精正常受精率：体外受精中受精后第1天观察到两个原核（2PN）和两个极体（2PB）的卵母细胞数占受精卵母细胞总数的比例。时间范围：受精后第1天卵胞浆内单精子注射正常受精率：卵胞浆内单精子注射中受精后第1天观察到2PN和2PB的卵母细胞数占注射的MII期卵母细胞总数的比例。时间范围：受精后第1天

2. 卵裂率：第2天卵裂期胚胎数占正常受精卵母细胞总数的比例。

   时间范围：受精后第2天

3. 第3天优质胚胎率：第3天优质胚胎数占正常受精卵母细胞总数的比例。

   时间范围：受精后第3天

4. 第3天可用胚胎率：第3天可用胚胎数占正常受精卵母细胞总数的比例。

   时间范围：受精后第3天

5. 优质囊胚形成率：优质囊胚数占正常受精卵母细胞总数的比例。

   时间范围：受精后第5/6天

6. 第5/6天可用囊胚率：第5/6天可用囊胚数占正常受精卵母细胞总数的比例。

   时间范围：受精后第5/6天

7. 囊胚形成率：第5/6天形成的囊胚总数占正常受精卵母细胞总数的比例。

   时间范围：受精后第5/6天

8. 着床率：胚胎移植后检测到的妊娠囊数占移植囊胚总数的比例。

时间范围：胚胎移植后约4-7周（9）生化妊娠率：胚胎移植后血清β-hCG阳性但超声未检测到妊娠囊的周期数占胚胎移植周期总数的比例。

时间范围：胚胎移植后约14天（10）早期流产率：临床妊娠周期中妊娠12周内发生自然流产的周期比例。时间范围：妊娠12周内（11）持续妊娠率：临床妊娠后妊娠持续至少12周的周期数占胚胎移植周期总数的比例。

时间范围：妊娠12周或以后（12）活产率（首次胚胎移植）首次胚胎移植周期中至少产生一次活产的周期比例。时间范围：分娩时

招募：参与者将招募自计划在本试验参与的12家生殖医学中心接受体外受精或卵胞浆内单精子注射周期的不孕患者。初始筛选将由熟悉研究程序的培训医师在生殖医学中心就诊的患者中进行。对于符合资格标准的潜在参与者，研究者将向夫妇双方介绍研究，包括其目的、程序、潜在风险和益处，并提供充足时间供他们考虑是否愿意参与。夫妇提出的所有关于研究的问题将得到充分解答。在获得充分详细的知情同意后，夫妇双方和研究者将共同签署知情同意书。

盲法：无（开放标签）

数据收集

1. 基线数据将在获得书面知情同意后收集，包括血清性激素水平（月经周期第2-5天的E2、LH、FSH、PRL、P和T）、窦卵泡计数（AFC）和常规精液分析。卵巢刺激、取卵和冷冻胚胎移植周期中常规临床管理所需的其他实验室检测将按照标准实践进行，但不作为研究结局指标。
2. 在干预期间，将记录获取的卵母细胞总数以及分配到对照组和实验组的数量。若卵母细胞总数为奇数，用于最后一个卵母细胞随机分配的方法也将记录。从受精后16-18小时（第1天）到囊胚阶段（第5/6天），受精结果、每日胚胎发育和培养箱环境参数（包括温度和气体浓度）将由胚胎学家实时记录在病例报告表（CRF）中。
3. 结局数据将包括所有主要和次要结局指标。为确保数据质量，关键结局数据将进行双重检查，所有研究人员将接受标准化培训，并定期进行数据清理以识别缺失、不一致或不正确的条目。为提高参与者保留和随访完成率，研究者将在入组时提供详细研究说明、书面研究材料、专用联系方式和适当的经济补偿。

数据管理（1）数据录入将与临床数据收集同时进行。数据录入或审查期间识别的疑问将书面记录并由主要研究者解决。所有更改将记录并与CRFs一起保留。所有研究数据将保密，未经申办者书面授权不得向第三方披露。

（2）完成数据审查并确认数据准确性后，数据库将由牵头中心、合作中心和统计师共同锁定。数据库锁定后不允许任何更改。统计分析计划将在数据库锁定前最终确定。

统计分析（1）分析人群全分析集（FAS）将包括所有随机化、接受至少一次研究干预并具有干预后评估数据的参与者，遵循意向性治疗原则。FAS中的缺失数据将使用末次观测值结转（LOCF）方法处理。

符合方案集（PPS）将包括根据方案完成治疗和随访、无影响疗效的重大方案偏离的参与者。PPS将作为疗效评估的主要分析集。

统计方法

1. 所有统计检验将为双侧检验，P≤0.05将被认为具有统计学意义。连续变量将酌情使用均值、标准差、中位数、最小值和最大值进行总结。分类变量将使用频数和百分比进行总结。统计分析将使用SPSS 25.0或R进行。
2. 基线特征将进行描述性分析。连续变量的正态性将使用直方图和Shapiro检验评估。正态分布变量将表示为均值±标准差；非正态分布变量将表示为中位数和四分位距。
3. 主要结局临床妊娠率将使用Cochran-Mantel-Haenszel（CMH）分层卡方检验进行组间比较，并使用多变量逻辑回归调整基线特征和中心效应。
4. 次要结局，包括受精率、卵裂率、第3天胚胎发育率、囊胚形成率、着床率、生化妊娠率、流产率、持续妊娠率和活产率，也将使用CMH分层卡方检验进行组间比较。
5. 脱落率和不良事件相关退出率将使用卡方检验或Fisher精确检验进行组间比较。研究持续时间将酌情使用独立样本t检验或Wilcoxon秩和检验进行比较。

数据监查本研究将不设立正式的独立数据监查委员会（DMC），因为这是一项研究者发起的临床研究，涉及常规辅助生殖技术程序和胚胎培养干预，预期风险相对较低。数据监查将由苏州贝康医疗股份有限公司或中山大学附属第六医院具有良好临床实践（GCP）资格的人员进行。

期中分析和停止指南计划在达到目标样本量的50%时进行期中分析。期中分析将评估主要结局（临床妊娠率）和选定的次要结局，包括受精率、卵裂率、第2/3天胚胎发育和囊胚形成率。安全性数据，包括所有不良事件（AEs）和严重不良事件（SAEs），也将被审查。

研究可能在以下情况下暂停或提前终止：安全性问题：若任一组中识别出重大安全问题，如异常胚胎发育率意外高；明确获益证据：若实验组临床妊娠率显著高于对照组（p<0.001）且认为继续研究不必要；明确劣效性/无效性证据：若实验组临床妊娠率显著低于对照组（p<0.001）。

主要研究者将审查期中结果，并就研究继续、暂停或终止提出建议。

伤害（不良事件）研究期间发生的所有不良事件（AEs）和严重不良事件（SAEs）将被收集、评估、记录、报告和随访。

AE定义为卵巢刺激或其他研究相关程序期间任何不利的医疗事件或原有病情恶化，包括症状、体征或异常实验室发现。

SAE定义为导致死亡、危及生命、需要住院或延长住院时间、导致持续或显著残疾/失能、导致先天异常或出生缺陷或其他具有医学重要性的事件。

对于每个AE/SAE，研究者将记录发生时间、严重程度、持续时间、采取的措施、结局以及与研究干预的关系。因果关系将分类为肯定相关、可能相关、可能无关、肯定无关或无法评估。

参与者将从知情同意时起至随访结束通过电话或面对面接触进行监测。对于SAEs，所有相关临床信息和随访数据将记录在源文件中。

稽查医院将定期进行内部稽查以确保持续方案依从性。

稽查内容将包括：数据完整性：审查参与者档案、CRFs、实验室记录和知情同意书以确认完整性、准确性和逻辑一致性；程序依从性：审查关键研究程序，包括胚胎培养、随机化和数据录入，以确保遵守SOPs；参与者管理：验证入组、随访和退出程序；设备维护：审查培养箱、显微镜和其他相关设备的操作和维护记录。

稽查结果将在稽查完成后10个工作日内提交给研究团队和申办者，并提出纠正措施建议。

方案修订任何重要方案修订，包括资格标准、结局指标或统计方法的更改，将由研究团队讨论并由主要研究者（PI）和统计团队确认。重大修订的书面通知将在72小时内通过内部沟通渠道提供给所有研究团队成员，并附上实施时间表。相关人员将根据需要接受额外培训。入组参与者将通过电话或微信随访告知重要修订。伦理委员会/机构审查委员会和试验注册机构也将根据适用要求通知。

知情同意潜在参与者将首先由熟悉研究方案和程序的临床医生接洽。将解释研究目的、程序、潜在风险和可能益处，并提供知情同意书副本供仔细审阅。参与者将获得充足时间提问和考虑参与。书面知情同意将在任何研究特定程序执行前自愿获得。参与者和研究者将签署知情同意书，并保留在研究档案中。

在本研究中，胚胎可能使用无干扰封闭培养系统进行培养，预期可提高囊胚形成率和优质胚胎率。除分配的培养系统外，所有程序将遵循常规医院实践，预计不会引入额外风险。

保密性仅收集必要的研究信息，参与者数据将尽早去标识化。个人数据访问将根据基于角色的权限进行限制。禁止通过不安全电子邮件传输可识别数据。研究完成后，最终数据库将匿名化并锁定。独立数据监查员将监督数据保护程序并签署保密协议。

利益声明主要研究者和参与中心的主要研究者声明与本研究无财务或其他利益冲突。

数据访问试验期间收集的所有研究数据将提交给中山大学附属第六医院。主要研究者将负责临床研究报告和手稿的撰写，并参考参与中心的意见。相关试验文件，包括源文件、签署的知情同意书、CRFs和其他研究记录，将保留以供检查、监督和分析。最终试验数据集的访问将仅限于授权研究者和统计师。

辅助和试验后护理不适用。

传播政策所有研究相关信息在研究完成和最终统计分析审查前将视为机密。研究结果可能在牵头研究中心授权后发表或展示。机密或专有信息将不被披露。