Zika 바이러스에 대한 수직 노출과 아동 신경 발달에 대한 결과(ZIKVIRUSIFF) (ZIKVIRUSIFF)

이 연구의 주요 목표는 임신부터 생후 3년 말까지 수직적 ZIKV 전파의 자연사 및 임상 및 신경학적 장애, 특히 소두증의 발병률과 관련된 위험 요소의 존재를 평가하는 것입니다.

ZIKV 감염이 주요 노출이 될 임신 3년 말까지 종적 연구가 수행될 것입니다.

샘플 크기는 지카 바이러스에 노출된 어린이 500명입니다. 샘플 크기는 브라질의 일반적인 소두증 유병률(2:10.000)을 기준으로 드문 사례에 대해 계산되었습니다. ZIKAV에 노출된 임산부의 사례 수 증가가 예상됩니다.

이 연구는 Fernandes Figueira National Institute for Health of Women and Children(IFF)에서 수행됩니다. 임산부는 FioCruz/RJ에서 온 IFF의 산전 진료 클리닉과 Centro de Saúde Escola Germano Sinval Faria(CDEGSF)의 가족 건강 전략 부서에서 선발됩니다. 우리는 또한 SMS Rio de Janeiro의 임상 가족에서 임산부를 모집할 것입니다.

선정 기준 연구 모집단은 피부 발진, 관절통 관련 발열, 근육통, 비화농성 결막염 또는 두통과 함께 ZIKAV 감염과 양립할 수 있는 증상을 나타내는 임산부와 동시에 노출 가능성이 확인된 무증상 임산부로 구성됩니다. . RT-PCR 양성인 환자를 포함합니다.

IFF 및 CSGSF에서 산전 추적 조사 중인 모든 임산부는 재태 연령에 관계없이 초기에 노출되지 않은 것으로 적격합니다.

제외 기준 태아기 또는 출산 중에 염색체 이상이 발견된 임산부는 제외됩니다.

노출의 정의 ZIKAV 감염의 약 80%가 무증상이라는 사실을 감안할 때 노출은 진단 테스트(PCR 또는 혈청학적 검사)에서 양성으로 확인됩니다. 현재까지 PCR 검사만 가능하고 질병의 급성기에만 양성으로 남아 있기 때문에 향후 혈청학적 검사의 가용성을 고려할 때 노출 그룹을 정의하는 데 일부 전략이 사용될 것입니다.

상기한 바와 같이, 증상이 있는 여성은 RT-PCR에 의한 감염 진단 확인 및 뎅기열, 칙쿤군하, CMV, 톡소플라스마증 및 풍진에 대한 혈청학적 검사를 위해 의뢰될 것이다.

증상이 있거나 없는 여성은 임신 3분기와 출생 시 혈청학적 검사를 위해 혈액을 채취합니다. 혈액 샘플은 특정 혈청학적 검사가 가능한 경우 ZIKA 혈청학적 검사를 위해 생체 저장소에 보관됩니다. 이러한 순차 샘플은 개발 단계에 있는 혈청학적 테스트를 검증하는 데에도 사용됩니다.

비교대상 노출군은 혈청학적 검사 결과를 바탕으로 구성한다. 혈액 샘플에서 향후 Zika 감염의 존재를 나타내는 무증상 개인은 노출된 그룹으로 이동합니다.

특정 검사(급성기의 PCR 및 추후 혈청학적 검사)에 대해 양성 결과를 나타내는 코호트의 임산부는 감염에 노출된 것으로 간주되는 반면, 음성 결과가 있는 임산부는 노출되지 않은 것으로 간주됩니다.

이 두 번째 그룹은 무증상 및 유증상으로 분류할 수 있습니다. 세 번째 그룹은 음성 IgG 및 IgM으로 입증된 지카 바이러스가 없는 어머니에게서 태어난 정상적인 어린이가 될 것입니다. 각 어린이는 출생 후 3년 동안 추적됩니다.

분석할 결과 주요 결과는 12, 18, 24-36개월에 Bayley Score 3rd edition을 사용하여 소두증 및/또는 발달 지연이 될 것입니다.

2차 연구 결과는 다음과 같다: 임신 초음파 상태, 태반 손상, 안구, 청력, 심장, 어린이의 영양 상태 및 출생에서 3세까지의 신경발달 변화, 임산부의 사망, 낙태, 태아 사망, 임신 중 사망 인생의 첫 3년.

데이터 수집:

임산부의 포함은 연구의 첫 24개월 동안 발생할 것입니다. 결과를 확인하기 위해 각 어린이는 출생부터 생후 3년이 될 때까지 추적됩니다. 데이터 수집을 위한 총 연구 기간은 5년입니다. 조사기간은 2016년 1월~2022년 3월이다.

데이터는 의료 서비스와 연결되고 연구 모집단에 지원을 제공하는 의료 전문가가 수집합니다.

임신, 출생 및 생후 첫 3년에 대한 데이터는 약속 후 설문지를 사용하여 각 여성과의 인터뷰에서 얻을 것입니다. 또한 기록을 위한 데이터는 이러한 목적을 위해 준비된 양식으로 수집됩니다.

데이터 수집 양식(CRF/DCF)은 서비스 간의 모든 차원에서 구성되고 검증됩니다. 연구 흐름도와 각 절차 및 치료 수준에 대한 POP가 준비됩니다.

• 사회경제적 특성(교육, 1인당 가구 소득, 주거 조건, 위생 및 쓰레기 수거) 건강 상태(공동상병).
• ZIKAV 노출 이력: Zika에 감염된 친척, 이웃 및 직장 동료 식별

연구 인구의 후속 조치

임산부의 후속 조치:

연구에 포함된 임산부는 Fernandes Figueira 국립 브라질 여성 건강 연구소의 산전 클리닉에서 추적될 것입니다.

임산부를 연구에 포함시킨 후, 상담은 매달 이루어지며 검사는 다음 프로토콜에 따라 수행됩니다.

• 삼 분기마다 태아 초음파
• 지카, 뎅기열, 치쿤구니아, CMV, 톡소플라스마증, 풍진에 대한 혈청학적 검사
• 증상이 있는 임산부의 경우 지카 바이러스에 대한 PCR
• 브라질 보건부 장관 Stork Network에서 권장하는 산전 검사
• 브라질 황새 네트워크에서 권장하는 산전 검사 관련 선천적 기형이 있는 경우 양수를 채취할 수 있습니다.

도플러:

탯줄에 초음파를 가하여 제대 동맥의 초음파 사진을 얻어 박동 지수(PI), 저항 지수(RI) 및 최고 수축기 속도(PSV)를 평가합니다.

혈청 및 기타 인간 분비물의 바이러스 검출 환자의 바이러스 검출을 위해 제조업체의 지침에 따라 RTP 병원체(Stratec Biomedical AG, Birkenfeld, Germany) 키트를 사용하여 혈청 및/또는 소변(200ml)에서 RNA를 추출합니다. 분리된 RNA는 Lanciotti et al., 2008 및 Faye et al., 2013에 기술된 바와 같이 실시간 /RT-PCR 반응에서 주형 역할을 합니다.

혈청 및 기타 인간 분비물에서 바이러스 검출 게놈 시퀀싱을 위해 바이러스 게놈의 특정 영역을 RT-PCR 방법으로 증폭합니다. 이렇게 얻은 제품은 아가로스 겔 전기영동으로 정제한 다음 QIAquick Gel Extraction(Qiagen) 키트를 사용하여 겔에서 추출합니다. 추출 후 재료는 Low DNA Mass Ladder(Life Technologies) 표준을 사용하여 밴드 강도 간 비교를 통해 아가로스 젤에서 정량화됩니다. 시퀀싱에 필요한 양은 Fiocruz 시퀀싱 플랫폼으로 전달됩니다. 시퀀스는 Bioedit(v. 7.0.5.3) 프로그램, MEGA(v. 5:05) 프로그램.

태반 및 면역조직화학의 분석 신선한 태반은 병리학적 해부학 및 세포병리학과(DAPC/DPAC)로 전달되어 최대 48시간 동안 냉장고에 보관됩니다. 태반 분석 루틴에 따라 설명하고 무게를 재고 사진을 찍습니다. 융모막 판, 탯줄 및 막의 파편을 제거하고 액체 질소에서 동결합니다. 태반 판(5개 영역), 탯줄(최소 2개 영역) 및 융모막(1개 단편)은 완충 포르말린 최대 시간: 30시간으로 고정됩니다. 그런 다음 조직학적 처리를 위해 절단되고 파라핀에 내장됩니다.

유세포 분석법에 의한 태반 세포 및 산모 및 제대혈 및 어린이 구강 면봉의 표현형 특성화 태반 조각을 수집하고 멸균 DMEM(Sigma; St. Louis, MO, [USA]) 배양 배지(4°C)에서 유지하고 절단합니다. 여러 조각(두께: 1-2 mm)으로. 절단 후 DMEM에서 세척하고 콜라게나아제 1A(Sigma; _)(300U/mg; 1% DMEM) 효소에서 해리 주기를 거칩니다. 해리는 6-8주기(약한 교반, 37°C, 각각 10분)에서 발생합니다. 이렇게 얻은 세포 현탁액을 원심분리(1000 rpm; 4°C; 10분)하고 펠릿을 소태아혈청(FCS; 10%; Sigma; _; 4°C)이 있는 DMEM에 넣어 /불활성화/ 콜라게나제 효소 /액션 /활성?을 억제합니다. 해리된 물질은 [그러면] 걸러질 것입니다 /안으로 /통해? 막([기공 직경:] 70mm). 그런 다음 세포는 다음 절차에 사용하기 위해 Neubauer 챔버에서 계산됩니다. 산모와 제대혈은 항응고제로 EDTA가 들어 있는 적절한 튜브에 채혈됩니다. 혈청은 바이러스 검출에 사용되며 백혈구 세포는 적혈구 용해 후 표시됩니다.\

태아 및 사산의 부검 조직병리학적 및 면역조직화학적 검사 및 영상 형태형성 연구는 ZIKAV 감염의 결과로 태아 및 사산의 뇌 및 기타 기관에서 수행됩니다. 파라핀의 일반적인 조직학적 처리 외에도 다른 장기는 동결되어 유전 물질 추출 및 바이러스 RNA 조사에 제출됩니다. 가능한 안구 변화를 평가하기 위해 안구도 분석됩니다.

신생아의 후속 조치:

신생아는 IFF의 외래환자 클리닉에서 3세까지 추적될 것이며, 첫 해에는 최소 6회 방문, 두 번째 및 세 번째 해에는 연간 4회 방문이 포함됩니다. ZIKA 바이러스에 수직 노출될 가능성이 있는 어린이 코호트를 추적하기 위해 소아과 감염병과와 소아과 외래 환자 클리닉 모두에 다학제 외래 환자 클리닉이 설립됩니다. 외래진료소에는 물리치료, 음성청각, 심리, 사회봉사 분야의 의료진과 전문인력이 배치된다. 의료진은 신경과, 소아심장내과, 안과, 의료유전학 등의 전문 분야와 협력해 환자를 추적하는 역할을 맡는다. 필요할 때마다 진단 또는 초기 접근 방식을 확립하기 위해 이러한 환자를 입원시킬 수 있습니다.

바이러스에 노출된 것으로 알려진 환자 또는 소두증이 있는 환자에게 권장되는 초기 평가는 다음 검사 및/또는 평가로 구성됩니다: 신경학적, 안구, 청력, 필요한 경우 EEG, ECG, RT-PCR용 제대혈 및 IgM. 재태 연령 및 환자 성별에 따라 Intergrowth Curve(2014)를 참조하여 머리 둘레를 정확하게 측정하는 데 중점을 둔 신생아의 인체 측정 데이터 및 신체 검사. 다른 기관을 손상/영향을 미칠 수 있는 이형 특성 또는 선천적 기형을 감지하기 위한 유전학의 평가.

영상 검사:

1. 천문초음파(USTF), 첫 번째 선택
2. TF가 기술적으로 가능하지 않은 경우 조영제 없는 두개골 단층촬영(CT)
3. 복부초음파
4. 심초음파
5. 필요한 경우 뇌 자기 공명 영상. g) 신생아 청력 선별검사(TAN):

1. 유발 광음향 방출(EOAE); 수명 24-48시간 2. 뇌간의 청각유발전위(PEATE/ABR): 소두증이 있는 어린이의 수명은 최대 1개월입니다. 불합격시에는 30일 이내에 재시험을 하여야 합니다. 재시험 실패 시 [NB]를 즉시 [_에게] 전달한다.

h) 안구 신생아 선별검사(TON):

1. 망막 적색 반사의 검사 및 테스트.
2. Eye Fund 검사(안저검사)
3. RetCam 문서화

후속 상담에서는 임상 추적, PC 측정, 물리 치료에 의한 발달 평가(조기 자극 포함), 이환율 및 사망률 평가가 유지됩니다. 생후 첫 해에 PEATE는 3개월마다 실시됩니다. 후속 진료소 방문은 생후 6개월까지는 매달, 6-12개월 동안은 2개월마다, 3년까지는 3개월마다 방문합니다. 돌아올 때마다 안과 평가(안저경 검사)를 실시합니다.

신경학적 후속 조치는 환자의 초기 상태에 따라 달라집니다. 소두증이 없는 환자는 출생, 30일, 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24, 36개월에 평가됩니다. 소두증 환자는 출생 시, 30일, 2~3개월마다 또는 필요한 경우 더 자주 평가됩니다.

운동 발달의 평가는 Dubowitz 검사(처음 72시간), Alberta Infant Motor Scale(AIMS; 아이가 걷거나 18개월의 삶을 마칠 때까지 3개월마다) 및 Bayley Test-3rd edition(12세)에 의해 수행됩니다. 18세 및 12-36개월 사이.

12, 24, 36개월에 신경발달, 인지발달, 언어능력에 미치는 영향에 대해 언어발달 평가를 시행한다.