SEXI: 외상성 신경과 비외상성 신경의 좌골 발현 및 차등 단백질 식별 (SEXI)
이 연구의 목적은 좌골 신경의 "손상된" 말단에 나타날 수 있는 다른 단백질을 밝히고 이를 "손상되지 않은" 절단된 신경의 다른 말단과 비교하는 것입니다. 절단된 좌골 신경의 "정상적인" 말단과 "외상을 입은" 말단을 비교함으로써 연구원들은 특히 통증과 관련이 있을 수 있는 단백질을 식별하기를 희망합니다. 예를 들어, 신경의 비외상성 말단에는 단백질 X가 없지만 외상성 신경 말단에는 많은 단백질 X가 있는 경우, 단백질 X는 연구자들이 더 연구하고 그것이 있는지 확인하기를 원하는 단백질이 될 것입니다. 통증 감각에 어떤 역할을 합니다.
다른 연구에서는 특정 통증 관련 단백질이 있으며 외상 후 증가하거나 감소할 수 있음을 보여주었습니다. 연구자들이 통증과 관련된 특정 단백질을 식별할 수 있다면 결국 이러한 단백질을 차단하고 통증 감각을 감소시키는 약물 개발로 이어질 수 있습니다.
연구 개요
상태
정황
상세 설명
최종 절단 수정 및 폐쇄가 예정된 피험자는 연구에 참여하기 위해 접근할 것입니다. 연구 참가자의 계획된 절단 교정 당일에 연구원은 신경 표본 검색을 조정하기 위해 수술 직원과 연락을 취할 것입니다. 무릎 위 절단 환자의 경우 좌골 신경 표본을 채취하고, 무릎 아래 또는 무릎 절단 환자의 경우 경골 신경 표본을 채취합니다. 무릎의 오금와(popliteal fossa)에서 경골신경과 비골신경으로 갈라진 후). 외과의는 표본의 근위 끝에 봉합사를 배치하여 신경의 비외상성 끝을 표시하고 샘플링된 신경의 종방향 위치 추정치를 제공합니다(즉, 무릎 관절선에서 원위 10cm, 무릎 관절 수준에서 무릎 근위 15cm). 각 샘플은 메스를 사용하여 동일한 방식으로 절제됩니다. 조직이 외과의에 의해 절제되면 피험자의 연구 식별 번호(해당 피험자로부터 두 개의 샘플을 채취하는 경우 접미사 "A" 또는 "B")가 표시된 플라스틱 시험관에 넣습니다. 연구 직원에게 옮겨 즉시 액체 질소에서 동결. 냉동 표본은 분석 전에 -80°C에서 보관될 연구 프로그램 부서 실험실로 전달됩니다. 근위, 중간 및 말단 샘플은 DRP 실험실에서 획득하고 신경의 나머지 부분은 향후 분석을 위해 -80 냉동고에서 교체됩니다. 샘플은 처리 및 분석을 위해 안전한 항공 우편을 통해 Duke University로 보내집니다. 샘플 처리 작업은 듀크 대학의 동료들이 질량 분광법 분석 직전에 수행합니다. 공동 작업자 Dr Moseley의 실험실 책임에는 단백질 추출 및 분석이 모두 포함됩니다. 샘플당 추출 수는 길이에 따라 2에서 약 50까지 다양합니다. 공동 작업자 Dr Van de ven의 실험실 책임에는 샘플 취급, 병리학적 검사, 조직학적 검사를 위한 얇은 조각 제거 및 RNA, DNA 및 단백질 추출을 위한 세그먼트 균질화가 포함됩니다.
개별 세그먼트는 얼음 위에서 해동되고 해동 즉시 균질화됩니다. 균질화 방법은 가장 높은 용존 단백질 함량을 생성하도록 최적화됩니다. 시험할 방법에는 초음파 처리, 실험실 블렌더에 의한 기계적 중단, 포터 장치에 따른 수동 절단에 의한 기계적 중단 및 동결 해동이 포함됩니다.
시험할 버퍼 및 용매 시스템 변수에는 염 농도, pH 및 버퍼 유형, 카오트로프 농도(요소 및 티오요소), DMSO와 같은 유기 공용매의 존재 및 비이온성 세제의 존재가 포함됩니다. 모든 균질화는 프로테아제 억제제가 있는 상태에서 0~4°C에서 수행됩니다.
단백질 분석을 위해 고성능 액체 크로마토그래피/전자분무 질량 분석법을 보완 경로로 사용하여 건강한 조직과 외상 조직 사이의 단백질 발현 차이를 발견할 것입니다. 가용성 및 가용화 단백질의 고체상 추출에 이어 UV 흡광도 및/또는 총 이온 전류로 감지된 단백질 피크의 분리를 위한 조건을 최적화하고 추출된 단백질의 다른 세트에 집중하기 위해 두 가지 이상의 조건 세트를 사용할 수 있습니다. 우리는 세포질 단백질을 분리하기 위해 높은 다공성 C-18 역상 컬럼을 사용하고 막 단백질을 위해 C-4를 사용할 것입니다. 연구 운영 서비스(ROS)에서 Shimadzu LCMS-IT-TOF 질량 분석기와 일치하는 표준 이온화, 단편화 및 검출 방법이 사용됩니다.
RNA 분석을 위해 추출된 RNA는 Duke Center for Genomic and Computational Biology Genomic Technologies 코어로 보내집니다. 거기에서 Agilent 2100bioanalyzer와 Affymetrix GeneChip 분석을 사용하여 RNA 품질을 결정합니다. Duke Center for Genomic and Computational Biology에서 근무하는 생물통계학자 David Corcoran이 데이터 분석을 수행합니다.
이 연구에서는 치료 표준에 대한 변경 사항이 구현되지 않습니다. 그렇지 않으면 좌골 신경 표본은 인간 조직으로 폐기됩니다. 이 표본을 사용하여 진행 중인 다른 조사는 없습니다.
좌골 신경의 분석에 이어, 2차 결과 변수를 결정하기 위해 피험자의 차트에서 데이터(인구 통계, 부상 및 통증 치료 정보와 수술 전 통증 점수)를 수집합니다. (부록 B - 사례 보고서 양식 참조)
연구 유형
등록 (예상)
연락처 및 위치
연구 장소
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Maryland
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Bethesda, Maryland, 미국, 20889
- Walter Reed National Military Medical Center
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참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 기관 정책에 따라 연구의 연구 특성에 대한 인식을 나타내는 정보에 입각한 동의를 제공할 수 있는 18세 이상의 남녀
- 연구에 참여하기 전에 각 피험자로부터 서면 동의서를 받아야 합니다.
- OIF/OND 또는 OEF를 지원하는 전투 중 즉석 폭발 장치(IED) 폭발, 총성 또는 차량 전복에 노출된 결과로 발생한 외상성 하지(무릎 위 또는 무릎 아래) 절단.
- Walter Reed National Military Medical Center의 초기 병원 입원 중 예정된 최종 절단 개정
제외 기준:
- 정보에 입각한 동의를 제공할 수 없음
- 외상성 또는 외과적 발 절단
- 사지 구조 실패 후 Walter Reed Army Medical Center 또는 다른 미국 대륙(CONUS) 병원에서 발생하는 절단
- 길이 5cm 미만의 신경 표본
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
공동 작업자 및 조사자
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
기본 완료 (예상)
연구 완료 (예상)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (추정)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
마지막으로 확인됨
추가 정보
이 연구와 관련된 용어
기타 연구 ID 번호
- 359367-12
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