정액 처리를 위한 Density Gradient와 Swimming Down 사이의 평가 연구
연구 개요
상태
정황
상세 설명
다른 ART 절차에 사용되는 정액 처리는 죽은 정자뿐만 아니라 구조적 또는 형태가 비정상적인 정자를 분리하는 데 필수적인 단계입니다. 정액 제제는 정액액과 현재 세포 및 오염된 고름 세포 또는 박테리아 세포를 제거하기 위해 유지됩니다.
다양한 프로토콜 중에서 Density Gradient 및 swim-up이 가장 일반적입니다. 불량한 운동성 및 숫자 샘플의 경우 밀도 구배가 표시됩니다. 생산 또는 분리된 정자 형태 처리 절차에 대한 최종 평가는 아직 평가되지 않았습니다.
서로 다른 연구 기준을 사용하여 아래로 내려가면서 주로 사용된 프로토콜 Density Gradient(DG)의 출력을 다른 프로토콜과 비교하기 위한 평가 연구 준비는 더 나은 처리 절차를 위한 보다 명확한 평가를 할 수 있습니다.
평가를 위해 배치된 사례는 정액 샘플이 운동성에 대한 WHO 2010 정상 값 내에 있고 개수가 5백만/ml 이상인 경우였습니다. 두 가지 준비 기술로 처리하기 위해 모든 샘플을 두 부분으로 나눕니다.
37.0 Dc에서 48시간 동안 운동성 모니터링, 비정상 형태, 히알루로난 친화성 테스트 및 오염 박테리아 성장을 사용하여 두 출력에 대해 수행되는 준비 후 평가.
본 연구에서는 가공 중 정자에 가해지는 물리적 및 시간 스트레스 인터페이스의 단점 효과를 보여주고 원심 분리 인터페이스 또는 더 많은 처리 시간 없이 처리된 정자에서 생성된 결과와 아웃풋 결과를 비교할 것입니다. 정자는 자연스러운 움직임과 정상적인 행동으로 스스로를 분리합니다.
평가는 세 가지 범주로 이루어집니다.
- 최종 출력 품질: 순 고도로 진보적인 정자 및 그 수(정자 형태, 수 및 운동성): 우리의 결과는 더 높은 수와 점진적으로 운동하는 정자의 비율이 더 높은 SD 방법에서 검색된 더 음운적으로 정상적인 정자를 보여주었기 때문입니다.
생성된 정자의 품질: 37.0 Ds에서 2일 동안 정자 활력 테스트 또는 정자 운동력 모니터링을 통해. 운동성은 24시간 및 48시간 후에 평가될 것이다. 두 판독값 모두 밀도 구배를 사용하여 처리된 부분에서 시간이 많이 소요됨에 따라 정자 운동성과 활력이 더 많이 감소한 것으로 나타났습니다. SD를 사용하여 처리된 부분은 훨씬 더 나은 판독값을 보였습니다.
정자 후처리의 또 다른 기능적 활동은 히알루로난에 대한 정자 친화도를 평가할 때 HBA 테스트 슬라이드를 사용하는 것입니다. 이 테스트 또는 분석은 여전히 유지되는 정자의 생리적 활동을 나타냅니다. HBA는 그룹 연구에서 더 높은 유의미한 결과를 보여주었습니다.
- 분리 품질을 나타내는 데 사용되는 최종 평가: 정액 조작 및 처리 중 오염 및 이월 효과를 사용하여 모니터링됩니다. 일상적인 배양 배지(혈액 한천)를 사용하여 박테리아 세포의 존재 및 부재 또는 처리 및 조작 동안 각 부분에서 5미크론을 평가하는 박테리아 오염.
연구 유형
등록 (실제)
연락처 및 위치
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- WHO 2010 스탠더에 따르면 운동성이 10% 이상인 정액
- WHO 2010 스탠더에 따르면 정자 수가 5mil/ml 이상인 정액
제외 기준:
- 정액량 1.0ml 미만
- 액화시간이 60분 이상인 정액
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
- 관찰 모델: 케이스 컨트롤
- 시간 관점: 유망한
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
개입 / 치료 |
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밀도 구배 처리
Density Gradient(80/40%)를 사용하여 처리된 정액 부분 회전 1200 rpm/20분 1200 rpm/5분 세척 1200 rpm/5분 재세척 형태 평가를 위한 Diff-Quik 염색 등급 A 및 B에 대한 운동성 평가 농도(mil/ml) 24 H 반감기 48 H 반감기 HBA 테스트 세균 오염 |
Papanicolaou 염색(haematoxylin, orange G6 및 EA50)은 호염기성 및 호산성 세포 구성 요소 사이의 명확한 차이를 제공하여 정자 형태 평가 및 미성숙 정자 존재 평가에 유용한 염색질 패턴의 상세한 검사를 가능하게 합니다. 세포질 염색은 이온 강도, pH, 세포 부서 및 염색의 구성(OG6 및 EA50)에 따라 빨간색과 녹색 사이에서 달라질 수 있습니다. 정액의 처리된 부분에 대한 형태학적 평가. 분리 과정으로 정자의 형태학적 이상을 최소화해야 합니다.
다른 이름들:
더 나은 분리 방법은 처리 후 더 진보적인 정자를 보장합니다. (WHO 2010) 참조로 점수를 매긴 A 및 B 척도를 사용하여 등급을 매깁니다.
다른 이름들:
분리된 정자 수 처리 후 각 부분에 대한 정자 수를 위해 Makler 챔버를 사용합니다.
다른 이름들:
활성 운동성 대 비운동성 정자의 비율. 24시간 배양 후 각 샘플에 대한 현미경 검사를 통해 점진적 운동성 정자와 비진행성 또는 비운동성 정자를 평가합니다.
다른 이름들:
활성 운동성 대 비운동성 정자의 비율. 48시간 배양 후 각 샘플에 대한 현미경 검사를 통해 점진적 운동성 정자와 비진행성 또는 비운동성 정자를 평가합니다.
다른 이름들:
Hyaluronic Binding Assay(HBA®)는 정액 분석에서 의심되는 남성 불임에 대한 중요한 진단 도구입니다. 몇 분 만에 HBA® 슬라이드는 샘플에서 성숙한 결합 정자의 비율에 대한 답을 제공합니다(HBA® 점수 %). HBA 슬라이드를 사용하여 각 샘플에서 생리학적으로 활성인 정자를 세고 세 번째 조사 암의 후처리 계수를 참조하여 활성 정자의 백분율을 계산할 수 있습니다.
다른 이름들:
최종 세척된 10 미크론 샘플에 대해 Blood Agar 배양 플레이트를 사용하여 일상적인 세균 배양을 수행하여 처리 중 이월로 인한 세균 오염의 존재를 확인합니다.
다른 이름들:
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아래로 수영 처리
스윔다운(100%)을 사용하여 처리된 정액 부분 스윔다운 처리를 위해 실온에서 30분 1200rpm/5분으로 세척 1200r.p.m/5분으로 재세척 형태 평가를 위한 Diff-Quik 염색 등급 A 및 B에 대한 운동성 평가 농도(mil/ml) 24 H 반감기 48 H 반감기 HBA 테스트 세균 오염 |
Papanicolaou 염색(haematoxylin, orange G6 및 EA50)은 호염기성 및 호산성 세포 구성 요소 사이의 명확한 차이를 제공하여 정자 형태 평가 및 미성숙 정자 존재 평가에 유용한 염색질 패턴의 상세한 검사를 가능하게 합니다. 세포질 염색은 이온 강도, pH, 세포 부서 및 염색의 구성(OG6 및 EA50)에 따라 빨간색과 녹색 사이에서 달라질 수 있습니다. 정액의 처리된 부분에 대한 형태학적 평가. 분리 과정으로 정자의 형태학적 이상을 최소화해야 합니다.
다른 이름들:
더 나은 분리 방법은 처리 후 더 진보적인 정자를 보장합니다. (WHO 2010) 참조로 점수를 매긴 A 및 B 척도를 사용하여 등급을 매깁니다.
다른 이름들:
분리된 정자 수 처리 후 각 부분에 대한 정자 수를 위해 Makler 챔버를 사용합니다.
다른 이름들:
활성 운동성 대 비운동성 정자의 비율. 24시간 배양 후 각 샘플에 대한 현미경 검사를 통해 점진적 운동성 정자와 비진행성 또는 비운동성 정자를 평가합니다.
다른 이름들:
활성 운동성 대 비운동성 정자의 비율. 48시간 배양 후 각 샘플에 대한 현미경 검사를 통해 점진적 운동성 정자와 비진행성 또는 비운동성 정자를 평가합니다.
다른 이름들:
Hyaluronic Binding Assay(HBA®)는 정액 분석에서 의심되는 남성 불임에 대한 중요한 진단 도구입니다. 몇 분 만에 HBA® 슬라이드는 샘플에서 성숙한 결합 정자의 비율에 대한 답을 제공합니다(HBA® 점수 %). HBA 슬라이드를 사용하여 각 샘플에서 생리학적으로 활성인 정자를 세고 세 번째 조사 암의 후처리 계수를 참조하여 활성 정자의 백분율을 계산할 수 있습니다.
다른 이름들:
최종 세척된 10 미크론 샘플에 대해 Blood Agar 배양 플레이트를 사용하여 일상적인 세균 배양을 수행하여 처리 중 이월로 인한 세균 오염의 존재를 확인합니다.
다른 이름들:
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연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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HBA
기간: 1 일
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친화도는 처리된 샘플 10µL에서 생성된 비운동성 정자의 백분율에 따라 측정됩니다.
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1 일
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비정상적인 형태
기간: 1 일
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처리 후 정상적으로 염색된 정자의 백분율
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1 일
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
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최종 농도
기간: 1 일
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농도는 원래의 운동성과 농도에 따른 변동, DG
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1 일
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24시간 운동성
기간: 1 일
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37.0 Dc 배양 후 운동성 평가
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1 일
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48시간 운동성
기간: 2일
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37.0 Dc 배양 후 운동성 평가
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2일
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기타 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
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세균 오염
기간: 2일
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박테리아 세포가 없는지 확인하기 위해 처리된 샘플의 5미크론에 대한 박테리아 배양.
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2일
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공동 작업자 및 조사자
수사관
- 연구 책임자: Ahmad M Metwalley, Adliyah
간행물 및 유용한 링크
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작
기본 완료 (실제)
연구 완료 (실제)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (추정)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (추정)
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마지막으로 확인됨
추가 정보
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