Evaluační studie mezi gradientem hustoty a plaváním dolů pro zpracování spermatu
Přehled studie
Postavení
Podmínky
Detailní popis
Zpracování spermatu, které se má použít pro různé postupy ART, je základním krokem k izolaci mrtvých spermií, stejně jako spermií s abnormální strukturou nebo morfologií. Preparace spermatu bude udržovat odstranit semenné tekutiny a přítomné buňky a kontaminovat buňky hnisu nebo bakteriální buňky.
Mezi různými protokoly jsou nejběžnější gradient hustoty a plavání. Pro špatnou pohyblivost a počet vzorků je indikován gradient hustoty. Zatímco konečné hodnocení postupů zpracování produkovaných nebo separovaných forem spermií nebylo dosud hodnoceno.
Příprava na hodnotící studii pro porovnání výstupu hlavního použitého protokolu Density Gradient (DG) s jiným protokolem, jako je plavání dolů s použitím různých kritérií studie, může zajistit jasnější hodnocení pro lepší postupy zpracování.
Případy uspořádané pro hodnocení, kdy vzorky spermatu byly v rámci normálních hodnot motility WHO 2010 a jejich počet byl vyšší než 5 milionů/ml. Všechny vzorky se rozdělí na dvě části pro zpracování dvěma technikami přípravy.
Hodnocení po přípravě pro dva výstupy se provádí pomocí: monitorování motility po dobu 48 hodin při 37,0 Dc, abnormálních forem, testování afinity k hyaluronanu a kontaminujícího bakteriálního růstu.
V této studii ukážeme nevýhodný vliv fyzického a časového stresového rozhraní aplikovaného na spermie během zpracování a porovnáme výstupní výsledky s výsledky získanými ze spermií zpracovaných bez centrifugačního rozhraní nebo delšího času zpracování. Jak se spermie oddělí svým přirozeným pohybem a normálním chováním.
Hodnocení bude ve třech kategoriích:
- Výsledná kvalita výstupu: jako čisté vysoce progresivní spermie a jejich počet (morfologie, počet a motilita spermií): protože naše výsledky ukázaly fonologicky normálnější spermie získané SD metodou s vyšším počtem a vyšším procentem progresivně pohyblivých spermií.
Kvalita produkovaných spermií: prostřednictvím monitorování testování vitality spermií nebo síly motility spermií během 2 dnů při 37,0 Ds. Pohyblivost bude hodnocena po 24 hodinách a 48 hodinách. Obě měření ukázala větší pokles motility a vitality spermií s časovou náročností u porcí zpracovaných pomocí hustotního gradientu. Zatímco části zpracované pomocí SD vykazovaly výrazně lepší hodnoty.
Další funkční aktivitou postprocesingu spermií je použití HBA testovacího sklíčka, kdy hodnotíme afinitu spermií k hyaluronanu. Toto testování nebo test ukazuje, že fyziologická aktivita spermií je stále zachována. Zatímco HBA vykazovala vyšší signifikantní výsledky při skupinové studii plavání dolů.
- Závěrečné hodnocení, které slouží k prezentaci kvality separace: je sledováno pomocí kontaminace a přenosu efektu při manipulaci a zpracování spermatu. Bakteriální kontaminace pomocí rutinního kultivačního média (krevní agar) k vyhodnocení 5 mikronů z každé části na přítomnost a nepřítomnost jakýchkoli bakteriálních buněk nebo během zpracování a manipulace.
Typ studie
Zápis (Aktuální)
Kontakty a umístění
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Popis
Kritéria pro zařazení:
- Sperma s pohyblivostí více než 10 % podle pozorovatelů WHO 2010
- Sperma s počtem spermií vyšším než 5 mil/ml podle standardů WHO 2010
Kritéria vyloučení:
- Objem spermatu menší než 1,0 ml
- Sperma s dobou zkapalnění delší než 60 min
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
- Observační modely: Case-Control
- Časové perspektivy: Budoucí
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Zpracování gradientu hustoty
Část spermatu zpracovaná s použitím gradientu hustoty (80/40 %) Odstřeďování při 1200 otáčkách za minutu/20 min Promývání při 1200 otáčkách za minutu/5 min Promývání při 1200 otáčkách za minutu/5 min poté je třeba provést vyhodnocení pomocí: barvení Diff-Quik pro hodnocení morfologie Vyhodnocení motility pro stupeň A a B Koncentrace (mil/ml) 24 H poločas 48 H poločas HBA Testování Bakteriální kontaminace |
Papanicolaouovo barvení (hematoxylin, oranž G6 a EA50) poskytuje jasný rozdíl mezi bazofilními a acidofilními buněčnými složkami a umožňuje tak podrobné vyšetření chromatinového vzoru, což je užitečné při hodnocení morfologie spermií a hodnocení přítomnosti nezralých spermií. Cytoplazmatické barvení se může lišit mezi červenou a zelenou v závislosti na iontové síle, pH a složení buněčného oddělení a barvení (OG6 a EA50). Morfologické hodnocení pro zpracované části spermatu. Protože separační proces musí minimalizovat morfologické abnormální spermie.
Ostatní jména:
Lepší separační metoda zajistí progresivnější spermie po zpracování. Hodnocení pomocí stupnice A a B podle (WHO 2010) odkazů.
Ostatní jména:
počet izolovaných spermií Použití Maklerovy komory pro počet spermií pro každou porci po zpracování.
Ostatní jména:
procento aktivních pohyblivých k nepohyblivým spermiím. Mikroskopické vyšetření každého vzorku po 24 hodinách inkubace, aby se vyhodnotily progresivně pohyblivé spermie a ty neprogresivní nebo nepohyblivé.
Ostatní jména:
procento aktivních pohyblivých k nepohyblivým spermiím. Mikroskopické vyšetření každého vzorku po 48 hodinách inkubace, aby se vyhodnotily progresivně pohyblivé spermie a ty neprogresivní nebo nepohyblivé.
Ostatní jména:
Hyaluronic Binding Assay (HBA®) je důležitým diagnostickým nástrojem pro podezření na mužskou neplodnost při analýze spermatu. HBA® sklíčko poskytuje během několika minut odpověď na podíl zralých vazebných spermií ve vzorku (HBA® skóre %). Pomocí HBA sklíčka můžeme spočítat fyziologicky aktivní spermie u každého vzorku a vypočítat procento aktivních spermií s ohledem na počet po zpracování ze 3. vyšetřovacího ramene.
Ostatní jména:
Rutinní bakteriální kultivace s použitím kultivačních ploten s krevním agarem na 10 mikronových nakonec promytých vzorcích, aby se potvrdila přítomnost jakékoli bakteriální kontaminace způsobené přenosem během zpracování.
Ostatní jména:
|
|
Plavání dolů Zpracování
Část spermatu zpracovaná plaváním dolů (100 %) 30 minut při pokojové teplotě zpracování pro plavání omývání při 1200 ot./min./5 min. promývání při 1200 ot./min./5 min. poté je třeba provést vyhodnocení pomocí: barvení Diff-Quik pro hodnocení morfologie Vyhodnocení motility pro stupeň A a B Koncentrace (mil/ml) 24 H poločas 48 H poločas HBA Testování Bakteriální kontaminace |
Papanicolaouovo barvení (hematoxylin, oranž G6 a EA50) poskytuje jasný rozdíl mezi bazofilními a acidofilními buněčnými složkami a umožňuje tak podrobné vyšetření chromatinového vzoru, což je užitečné při hodnocení morfologie spermií a hodnocení přítomnosti nezralých spermií. Cytoplazmatické barvení se může lišit mezi červenou a zelenou v závislosti na iontové síle, pH a složení buněčného oddělení a barvení (OG6 a EA50). Morfologické hodnocení pro zpracované části spermatu. Protože separační proces musí minimalizovat morfologické abnormální spermie.
Ostatní jména:
Lepší separační metoda zajistí progresivnější spermie po zpracování. Hodnocení pomocí stupnice A a B podle (WHO 2010) odkazů.
Ostatní jména:
počet izolovaných spermií Použití Maklerovy komory pro počet spermií pro každou porci po zpracování.
Ostatní jména:
procento aktivních pohyblivých k nepohyblivým spermiím. Mikroskopické vyšetření každého vzorku po 24 hodinách inkubace, aby se vyhodnotily progresivně pohyblivé spermie a ty neprogresivní nebo nepohyblivé.
Ostatní jména:
procento aktivních pohyblivých k nepohyblivým spermiím. Mikroskopické vyšetření každého vzorku po 48 hodinách inkubace, aby se vyhodnotily progresivně pohyblivé spermie a ty neprogresivní nebo nepohyblivé.
Ostatní jména:
Hyaluronic Binding Assay (HBA®) je důležitým diagnostickým nástrojem pro podezření na mužskou neplodnost při analýze spermatu. HBA® sklíčko poskytuje během několika minut odpověď na podíl zralých vazebných spermií ve vzorku (HBA® skóre %). Pomocí HBA sklíčka můžeme spočítat fyziologicky aktivní spermie u každého vzorku a vypočítat procento aktivních spermií s ohledem na počet po zpracování ze 3. vyšetřovacího ramene.
Ostatní jména:
Rutinní bakteriální kultivace s použitím kultivačních ploten s krevním agarem na 10 mikronových nakonec promytých vzorcích, aby se potvrdila přítomnost jakékoli bakteriální kontaminace způsobené přenosem během zpracování.
Ostatní jména:
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
HBA
Časové okno: 1 den
|
Afinita se měří podle procenta nepohyblivých spermií produkovaných z 10 ul zpracovaného vzorku.
|
1 den
|
|
Neobvyklé tvary
Časové okno: 1 den
|
Procento normálně obarvených spermií po zpracování
|
1 den
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Závěrečné soustředění
Časové okno: 1 den
|
Koncentrace kolísala podle původní motility a koncentrace, DG
|
1 den
|
|
24hodinová pohyblivost
Časové okno: 1 den
|
Hodnocení motility po 37,0 Dc inkubaci
|
1 den
|
|
48hodinová pohyblivost
Časové okno: 2 dny
|
Hodnocení motility po 37,0 Dc inkubaci
|
2 dny
|
Další výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Bakteriální kontaminace
Časové okno: 2 dny
|
bakteriální kultura pro 5 mikronů zpracovaných vzorků k zajištění nepřítomnosti bakteriálních buněk.
|
2 dny
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Sponzor
Vyšetřovatelé
- Ředitel studie: Ahmad M Metwalley, Adliyah
Publikace a užitečné odkazy
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia
Primární dokončení (Aktuální)
Dokončení studie (Aktuální)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Odhad)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Odhad)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- AlBarakaSD2
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .