흡연자와 비흡연자의 치주치료 후 치주병균의 임상적 상태와 유병률

60명의 환자(30명의 흡연자(SM) 및 30명의 비흡연자(NS)가 이 연구에 참여하도록 선택될 것이다. 모든 과목은 브라질 리우데자네이루주 Nova Friburgo에 있는 Fluminense Federal University 치의학부 치주과에서 모집합니다. 연구 프로토콜은 Fluminense Federal University 의과대학 윤리위원회의 승인을 받았습니다(프로토콜 번호: CAAE - 0070.0.258.000-10). 참여하기 전에 모든 환자에게 목적과 절차를 충분히 설명하고 결과적으로 헬싱키 선언에 따라 서면 동의를 받았습니다. 의료 및 치과 병력을 수집하고 환자는 사전 선별 방문에서 임상 평가를 받게 됩니다.

임상 검사, 미생물 수집 및 치주 치료 이전 임상 검사, 시가 소비 연도 및 일일 소비량에 대한 정보를 기록하여 연구 대상 흡연자와 비흡연자를 선택합니다. 숙련된 치주 전문의가 프로토콜 절차를 위해 치아의 임상 치주 파라미터를 수행합니다. 선택된 각 치아는 치주 탐침 PCP15(PCP-UNC15)를 사용하여 플라크 지수(PI), 탐침 출혈(BOP), 포켓 탐침 깊이(PPD), 치은 후퇴(GR), 임상 부착 수준(CAL)에 대해 측정됩니다. , Hu-Friedy, Chicago, IL), 6개 부위(mesio-buccal, medioboccal, disto-buccal, mesio-lingual, medio-lingual, disto-lingual)가 기록될 것이다. 탐침 깊이(PPD) > 5mm인 부위가 미생물학적 분석을 위해 선택됩니다. 임상 측정 후 치은연상 바이오필름을 멸균 거즈로 제거합니다. 치은 열구 샘플은 30초 동안 가장 깊은 포켓에서 멸균 종이 포인트를 사용하여 각 환자에서 가장 깊은 PPD(>5mm)가 있는 4개 부위에서 채취됩니다. 각 부위의 풀링된 생물막은 Tris -EDTA 완충액(10mM Tris-Hcl, 0.1mM EDTA, pH 7.5)을 포함하는 2개의 마이크로튜브에서 분리되고 -20°C에서 보관됩니다. 샘플은 중합효소 연쇄 반응 - PCR에 의해 미생물학적으로 분석됩니다. 치주 치료는 첫 달에 4회, 그 후 1년이 될 때까지 한 달에 한 번씩 스케일링과 계획 치근으로 구성됩니다. 치주 치료 후 기준선, 3개월, 6개월 및 1년에 환자를 임상적으로 평가하고 미생물학적 수집을 합니다.

미생물학적 평가 - PCR 분석 DNA는 100 ng/mL의 표준 농도를 얻기 위해 260 nm에서 분광광도계(Genesys 10UV, Rochester, NY, USA)에서 추출 및 정량화되고 후속 PCR을 위해 -20 °C에 보관됩니다. 반응. 간략하게, 샘플은 리세 용액(추출 버퍼 및 프로테이나제 K)에 제출된 다음 클로로포름:이소아밀-알코올을 사용하여 정제된 다음 이소프로판올 및 70% 에탄올로 DNA 침전됩니다. DNA는 TE 버퍼(10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, pH 7.5, 10μg/mL RNAse 포함)에 재현탁됩니다. 미생물 분자 식별은 Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis 및 Candida dublinienses에 대한 특정 프라이머를 사용한 PCR에 의해 수행됩니다. PCR 증폭은 TGradient 96(Biometra, Germany)용 GeneAmp PCR 시스템 2400(Perkin-Elmer - Applied Biosystems)을 사용하여 각 프라이머 쌍에 특정한 열 조건에서 수행됩니다. PCR 산물은 2% 아가로즈 겔과 Tris-borate-EDTA 실행 완충액(pH 8.0)에서 전기영동으로 분리됩니다. 분자 질량 사다리(100 bp DNA 사다리, Gibco, Grand Island, NY, USA)는 아가로스 겔에서 실행하기 위해 포함됩니다. DNA는 0.1µl의 Sybr Safe/mL(Invitrogen, CA, USA)로 염색되고 UV 조명(Pharmacia LKB-MacroVue, San Gabriel, CA, USA)에서 시각화됩니다. 이미지의 사진을 찍고(Image Mater - LISCAP, VDS, Pharmacia Biotech Piscataway, NJ, USA) 분석합니다.