Conditions cliniques et prévalence des parodontopathogènes chez les fumeurs et les non-fumeurs après un traitement parodontal

Soixante patients (30 fumeurs (SM) et 30 non-fumeurs (NS) seront sélectionnés pour participer à cette étude. Tous les sujets seront recrutés au Département de parodontologie, École de médecine dentaire, Université fédérale de Fluminense, Nova Friburgo, État de Rio de Janeiro, Brésil. Le protocole d'étude a été approuvé (numéro de protocole : CAAE - 0070.0.258.000-10) par le comité d'éthique de l'École de médecine de l'Université fédérale de Fluminense. Avant la participation, le but et les procédures seront entièrement expliqués à tous les patients, qui ont par conséquent donné leur consentement éclairé par écrit conformément à la Déclaration d'Helsinki. Les antécédents médicaux et dentaires seront pris et les patients recevront une évaluation clinique lors des visites de présélection.

Examen clinique, prélèvements microbiologiques et thérapie parodontale Un examen clinique antérieur, des informations sur les années de consommation de cigares et la quantité de consommation quotidienne seront enregistrés pour sélectionner les sujets fumeurs et non-fumeurs pour l'étude. Un parodontiste expérimenté effectuera des paramètres parodontaux cliniques dans les dents pour la procédure de protocole. Chaque dent sélectionnée sera mesurée pour : l'indice de plaque (PI), le saignement à la sonde (BOP), la profondeur de sondage de poche (PPD), la récession gingivale (GR), le niveau d'attachement clinique (CAL) à l'aide d'une sonde parodontale PCP15 (PCP-UNC15 , Hu-Friedy, Chicago, IL), six sites (mésio-buccal, médiobuccal, disto-buccal, mésio-lingual, médio-lingual, disto-lingual) seront enregistrés. Les sites avec une profondeur de sondage (PPD) > 5 mm seront sélectionnés pour l'analyse microbiologique. Après des mesures cliniques, le biofilm supragingival sera retiré avec de la gaze stérile. Des échantillons de crevicule gingival seront prélevés sur 4 sites avec le PPD le plus profond (> 5 mm) chez chaque patient à l'aide d'une pointe de papier stérile de la poche la plus profonde pendant 30 secondes. Les biofilms regroupés de chaque site seront séparés dans deux microtubes contenant du tampon Tris-EDTA (Tris-Hcl 10 mM, EDTA 0,1 mM, pH 7,5) et stockés à -20 °C. Les échantillons seront analysés microbiologiquement par Polymerase Chain Reaction - PCR. Le traitement parodontal consistera en un détartrage et une planification radiculaire, 4 fois le premier mois et ensuite une fois par mois jusqu'à 1 an complet. Les patients seront évalués cliniquement et des prélèvements microbiologiques seront effectués au départ, 3 mois, 6 mois et 1 an après le traitement parodontal.

Évaluation microbiologique - Essais PCR L'ADN sera extrait et quantifié dans un spectrophotomètre à 260 nm (Genesys 10UV, Rochester, NY, USA), afin d'obtenir une concentration standard de 100 ng/mL et stocké à -20 °C pour la PCR ultérieure réactions. En bref, les échantillons seront soumis à une solution de lise (tampon d'extraction et protéinase K) puis purifiés à l'aide de chloroforme: isoamil-alcool, suivi d'une précipitation de l'ADN avec de l'isopropanol et de l'éthanol à 70 %. L'ADN sera remis en suspension dans du tampon TE (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5, avec 10 μg/mL RNAse). L'identification moléculaire microbienne sera réalisée par PCR avec des amorces spécifiques pour Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis et Candida dublinienses. L'amplification PCR sera réalisée avec un système PCR GeneAmp 2400 (Perkin-Elmer - Applied Biosystems) pour TGradient 96 (Biometra, Allemagne) dans des conditions thermiques spécifiques pour chaque paire d'amorces. Les produits de PCR seront séparés par électrophorèse dans des gels d'agarose à 2 % et un tampon de tris-borate-EDTA (pH 8,0). L'échelle de masse moléculaire (échelle d'ADN de 100 bp, Gibco, Grand Island, NY, USA) sera incluse pour fonctionner dans le gel d'agarose. L'ADN sera coloré avec 0,1 µl de Sybr Safe/mL (Invitrogen, CA, USA) et visualisé sous éclairage UV (Pharmacia LKB-MacroVue, San Gabriel, CA, USA). Des photographies des images seront prises (Image Mater - LISCAP, VDS, Pharmacia Biotech Piscataway, NJ, USA) et analysées.