Klinische omstandigheden en prevalentie van parodontopathogenen bij rokers en niet-rokers na parodontale therapie

Zestig patiënten (30 rokers (SM) en 30 niet-rokers (NS) zullen worden geselecteerd om aan dit onderzoek deel te nemen. Alle proefpersonen worden geworven bij de afdeling Parodontologie, School of Dentistry, Fluminense Federal University, Nova Friburgo, staat Rio de Janeiro, Brazilië. Het studieprotocol werd goedgekeurd (protocolnummer: CAAE - 0070.0.258.000-10) door de Ethische Commissie van de School of Medicine, Fluminense Federal University. Voorafgaand aan deelname zullen het doel en de procedures volledig worden uitgelegd aan alle patiënten, die vervolgens schriftelijke geïnformeerde toestemming hebben gegeven in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki. Medische en tandheelkundige geschiedenissen zullen worden afgenomen en patiënten zullen een klinische evaluatie krijgen tijdens prescreeningsbezoeken.

Klinisch onderzoek, microbiologische verzamelingen en parodontale therapie Eerder klinisch onderzoek, informatie over jarenlange consumptie van sigaren en hoeveelheid van dagelijkse consumptie zal worden geregistreerd om rokers en niet-rokers te selecteren voor het onderzoek. Een ervaren parodontoloog voert klinische parodontale parameters in tanden uit voor de protocolprocedure. Elke geselecteerde tand wordt gemeten op: Plaque Index (PI), Bleeding On Probe (BOP), Pocket Probing Depth (PPD), Gingival Recession (GR), Clinical Attachment Level (CAL) met behulp van een parodontale sonde PCP15 (PCP-UNC15 , Hu-Friedy, Chicago, IL), zullen zes locaties (mesio-buccaal, mediobuccaal, disto-buccaal, mesio-linguaal, medio-linguaal, disto-linguaal) worden opgenomen. Locaties met een sondeerdiepte (PPD) > 5 mm worden geselecteerd voor microbiologische analyse. Na klinische metingen wordt de supragingivale biofilm verwijderd met een steriel gaasje. Gingivale creviculaire monsters worden genomen van 4 locaties met de diepste PPD (> 5 mm) bij elke patiënt met behulp van een steriele papieren punt uit de diepste pocket gedurende 30 seconden. Samengevoegde biofilms van elke locatie zullen worden gescheiden in twee microbuisjes die Tris-EDTA-buffer bevatten (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5) en werden bewaard bij -20°C. De monsters worden microbiologisch geanalyseerd door Polymerase Chain Reaction - PCR. Parodontale behandeling zal bestaan ​​uit schalen en wortelplanning, 4 keer in de eerste maand en daarna eenmaal per maand tot het volledige jaar. Patiënten zullen klinisch worden geëvalueerd en er zullen microbiologische afnames worden gedaan bij baseline, 3 maanden, 6 maanden en 1 jaar na parodontale behandeling.

Microbiologische evaluatie - PCR-assays DNA wordt geëxtraheerd en gekwantificeerd in een spectrofotometer bij 260 nm (Genesys 10UV, Rochester, NY, VS), om een ​​standaardconcentratie van 100 ng/ml te verkrijgen en wordt bewaard bij -20 °C voor daaropvolgende PCR reacties. In het kort zullen monsters worden onderworpen aan een lise-oplossing (extractiebuffer en proteïnase K) en vervolgens worden gezuiverd met behulp van chloroform:isoamil-alcohol, gevolgd door DNA-precipitatie met isopropanol en 70% ethanol. Het DNA wordt opnieuw gesuspendeerd in TE-buffer (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5, met 10 μg/mL RNAse). Microbiële moleculaire identificatie zal worden uitgevoerd door PCR met specifieke primers voor Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis en Candida dublinienses. PCR-amplificatie zal worden uitgevoerd met een GeneAmp PCR-systeem 2400 (Perkin-Elmer - Applied Biosystems) voor TGradient 96 (Biometra, Duitsland) onder thermische omstandigheden die specifiek zijn voor elk paar primers. De PCR-producten zullen worden gescheiden door elektroforese in 2% agarosegels en Tris-boraat-EDTA-loopbuffer (pH 8,0). De molecuulmassaladder (100 bp DNA-ladder, Gibco, Grand Island, NY, VS) wordt meegeleverd om in de agarosegel te lopen. Het DNA wordt gekleurd met 0,1 µl Sybr Safe/ml (Invitrogen, CA, VS) en gevisualiseerd onder UV-verlichting (Pharmacia LKB-MacroVue, San Gabriel, CA, VS). Er worden foto's van de afbeeldingen gemaakt (Image Mater - LISCAP, VDS, Pharmacia Biotech Piscataway, NJ, VS) en geanalyseerd.