Kliniske tilstander og prevalens av periodontopatogener hos røykere og ikke-røykere etter periodontal terapi

Seksti pasienter (30 røykere (SM) og 30 ikke-røykere (NS) vil bli valgt ut til å delta i denne studien. Alle fagene vil bli rekruttert fra Institutt for periodontologi, School of Dentistry, Fluminense Federal University, Nova Friburgo, Rio de Janeiro State, Brasil. Studieprotokollen ble godkjent (protokollnummer: CAAE - 0070.0.258.000-10) av den etiske komiteen ved School of Medicine, Fluminense Federal University. Før deltakelse vil formålet og prosedyrene bli fullstendig forklart til alle pasienter, som følgelig ga skriftlig informert samtykke i samsvar med Helsinki-erklæringen. Medisinske og tannlegehistorier vil bli tatt, og pasienter vil motta klinisk evaluering ved prescreeningbesøk.

Klinisk undersøkelse, mikrobiologisk samler og periodontal terapi Tidligere klinisk undersøkelse, informasjon om år med forbruk av sigarer og mengde daglig forbruk vil bli registrert for å velge røykere og ikke-røykere for studien. En erfaren periodontist vil utføre kliniske periodontale parametere i tenner for protokollprosedyren. Hver valgt tann vil bli målt for: Plaque Index (PI), Bleeding On Probe (BOP), Pocket Probing Depth (PPD), Gingival Resession (GR), Clinical Attachment Level (CAL) ved bruk av en periodontal probe PCP15 (PCP-UNC15) , Hu-Friedy, Chicago, IL), vil seks steder (mesio-bukkal, mediobukkal, disto-bukkal, mesio-lingual, medio-lingual, disto-lingual) bli registrert. Steder med sonderingsdybde (PPD) > 5 mm vil bli valgt for mikrobiologisk analyse. Etter kliniske målinger vil den supragingivale biofilmen fjernes med sterilt gasbind. Gingival crevikulære prøver vil bli tatt fra 4 steder med den dypeste PPD (>5 mm) i hver pasient ved å bruke en steril papirspiss fra den dypeste lommen i 30 sekunder. Sammenslåtte biofilmer fra hvert sted vil bli separert i to mikrorør som inneholder Tris-EDTA-buffer (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5) og ble lagret ved -20°C. Prøvene vil bli analysert mikrobiologisk ved Polymerase Chain Reaction - PCR. Periodontal behandling vil bestå av skalering og planlegging av rot, 4 ganger den første måneden og deretter en gang i måneden til fullført 1 år. Pasienter vil bli klinisk evaluert og mikrobiologiske innsamlinger vil bli gjort ved baseline, 3 måneder, 6 måneder og 1 år etter periodontal behandling.

Mikrobiologisk evaluering - PCR-analyser DNA vil bli ekstrahert og kvantifisert i et spektrofotometer ved 260 nm (Genesys 10UV, Rochester, NY, USA), for å oppnå en standardkonsentrasjon på 100 ng/mL og lagret ved -20 °C for påfølgende PCR reaksjoner. I korte trekk vil prøvene sendes til en lise-løsning (ekstraksjonsbuffer og proteinase K) og deretter renses ved bruk av kloroform:isoamil-alkohol, etterfulgt av DNA-utfelling med isopropanol og 70 % etanol. DNAet vil bli resuspendert i TE-buffer (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5, med 10 μg/mL RNAse). Mikrobiell molekylær identifikasjon vil bli utført ved PCR med spesifikke primere for Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis og Candida dublises. PCR-amplifisering vil bli utført med et GeneAmp PCR-system 2400 (Perkin-Elmer - Applied Biosystems) for TGradient 96 (Biometra, Tyskland) under termiske forhold spesifikke for hvert par primere. PCR-produktene vil bli separert ved elektroforese i 2 % agarosegeler og tris-borat-EDTA-løpebuffer (pH 8,0). Molekylmassestigen (100 bp DNA-stige, Gibco, Grand Island, NY, USA) vil bli inkludert for kjøring i agarosegelen. DNAet vil bli farget med 0,1 µl Sybr Safe/ml (Invitrogen, CA, USA) og visualisert under UV-belysning (Pharmacia LKB-MacroVue, San Gabriel, CA, USA). Fotografier av bildene vil bli tatt (Image Mater - LISCAP, VDS, Pharmacia Biotech Piscataway, NJ, USA) og analysert.