Kliniske tilstande og forekomst af parodontopatogener hos rygere og ikke-rygere efter periodontal terapi

Tres patienter (30 rygere (SM) og 30 ikke-rygere (NS) vil blive udvalgt til at deltage i denne undersøgelse. Alle fag vil blive rekrutteret fra afdelingen for periodontologi, tandlægeskolen, Fluminense Federal University, Nova Friburgo, Rio de Janeiro State, Brasilien. Studieprotokollen blev godkendt (protokolnummer: CAAE - 0070.0.258.000-10) af den etiske komité på School of Medicine, Fluminense Federal University. Forud for deltagelse vil formålet og procedurerne blive forklaret fuldt ud til alle patienter, som derfor gav skriftligt informeret samtykke i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen. Medicinske historier og tandlægehistorier vil blive taget, og patienter vil modtage klinisk evaluering ved præscreeningsbesøg.

Klinisk undersøgelse, mikrobiologisk indsamling og parodontal terapi Tidligere klinisk undersøgelse, oplysninger om års forbrug af cigarer og mængden af ​​dagligt forbrug vil blive registreret for at vælge rygere og ikke-rygere forsøgspersoner til undersøgelsen. En erfaren parodontist vil udføre kliniske parodontale parametre i tænder til protokolproceduren. Hver valgt tand vil blive målt for: Plaque Index (PI), Bleeding On Probe (BOP), Pocket Probing Depth (PPD), Gingival Recession (GR), Clinical Attachment Level (CAL) ved hjælp af en periodontal sonde PCP15 (PCP-UNC15) , Hu-Friedy, Chicago, IL), vil seks steder (mesio-buccal, mediobuccal, disto-buccal, mesio-lingual, medio-lingual, disto-lingual) blive registreret. Steder med sonderingsdybde (PPD) > 5 mm vil blive udvalgt til mikrobiologisk analyse. Efter kliniske målinger vil den supragingivale biofilm blive fjernet med steril gaze. Gingival crevikulære prøver vil blive taget fra 4 steder med den dybeste PPD (>5 mm) i hver patient ved hjælp af en steril papirspids fra den dybeste lomme i 30 sekunder. Poolede biofilm fra hvert sted vil blive adskilt i to mikrorør indeholdende Tris-EDTA-buffer (10 mM Tris-Hcl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5) og blev opbevaret ved -20°C. Prøverne vil blive analyseret mikrobiologisk ved Polymerase Chain Reaction - PCR. Paradentosebehandling vil bestå af afskalning og planlægning af rod, 4 gange i den første måned og derefter en gang om måneden indtil 1 år. Patienterne vil blive klinisk evalueret, og mikrobiologiske indsamlinger vil blive foretaget ved baseline, 3 måneder, 6 måneder og 1 år efter parodontal behandling.

Mikrobiologisk evaluering - PCR-assays DNA vil blive ekstraheret og kvantificeret i et spektrofotometer ved 260 nm (Genesys 10UV, Rochester, NY, USA), for at opnå en standardkoncentration på 100 ng/mL og opbevares ved -20 °C til efterfølgende PCR reaktioner. Kort fortalt vil prøver blive underkastet en lise-opløsning (ekstraktionsbuffer og proteinase K) og derefter oprenset med chloroform:isoamil-alkohol, efterfulgt af DNA-udfældning med isopropanol og 70% ethanol. DNA'et vil blive resuspenderet i TE-buffer (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 7,5, med 10 μg/mL RNAse). Mikrobiel molekylær identifikation vil blive udført ved PCR med specifikke primere for Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis og Candida dublises. PCR-amplifikation vil blive udført med et GeneAmp PCR-system 2400 (Perkin-Elmer - Applied Biosystems) for TGradient 96 (Biometra, Tyskland) under termiske betingelser, der er specifikke for hvert par primere. PCR-produkterne vil blive adskilt ved elektroforese i 2% agarosegeler og tris-borat-EDTA-løbebuffer (pH 8,0). Molekylmassestigen (100 bp DNA-stige, Gibco, Grand Island, NY, USA) vil blive inkluderet til kørsel i agarosegelen. DNA'et vil blive farvet med 0,1 µl Sybr Safe/ml (Invitrogen, CA, USA) og visualiseret under UV-belysning (Pharmacia LKB-MacroVue, San Gabriel, CA, USA). Fotografier af billederne vil blive taget (Image Mater - LISCAP, VDS, Pharmacia Biotech Piscataway, NJ, USA) og analyseret.