Клинические состояния и распространенность пародонтопатогенов у курящих и некурящих после пародонтологического лечения

Шестьдесят пациентов (30 курильщиков (SM) и 30 некурящих (NS) будут отобраны для участия в этом исследовании. Все предметы будут набраны с кафедры пародонтологии Школы стоматологии Федерального университета Флуминенсе, Нова Фрибургу, штат Рио-де-Жанейро, Бразилия. Протокол исследования был одобрен (номер протокола: CAAE - 0070.0.258.000-10) Этическим комитетом Медицинского факультета Федерального университета Флуминенсе. Перед участием цель и процедуры будут полностью разъяснены всем пациентам, которые впоследствии дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. Будет собран медицинский и стоматологический анамнез, и пациенты пройдут клиническую оценку во время предварительных посещений.

Клиническое обследование, микробиологические сборы и пародонтальная терапия Предыдущее клиническое обследование, информация о годах потребления сигар и количестве ежедневного потребления будет записана для отбора курящих и некурящих субъектов для исследования. Опытный пародонтолог выполнит клинические параметры пародонта зубов для протокольной процедуры. Для каждого выбранного зуба будут измерены: индекс зубного налета (PI), кровотечение при зондировании (BOP), глубина зондирования кармана (PPD), рецессия десны (GR), уровень клинического прикрепления (CAL) с использованием пародонтального зонда PCP15 (PCP-UNC15). , Hu-Friedy, Чикаго, Иллинойс), будут зарегистрированы шесть участков (мезиально-щечный, медио-щечный, дисто-щечный, мезио-лингвальный, медио-лингвальный, дисто-лингвальный). Участки с глубиной зондирования (PPD) > 5 мм будут выбраны для микробиологического анализа. После клинических измерений наддесневая биопленка будет удалена стерильной марлей. Образцы десневой борозды будут взяты из 4 участков с самой глубокой десневой деформацией (> 5 мм) у каждого пациента с использованием стерильного бумажного штифта из самого глубокого кармана в течение 30 с. Объединенные биопленки из каждого участка будут разделены на две микропробирки, содержащие буфер Tris-EDTA (10 мМ Tris-Hcl, 0,1 мМ EDTA, pH 7,5), и будут храниться при -20°C. Образцы будут подвергнуты микробиологическому анализу с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Пародонтологическое лечение будет состоять из удаления зубного камня и планирования корня, 4 раза в первый месяц, а затем один раз в месяц до полного 1 года. Пациенты будут клинически оценены, и микробиологические сборы будут сделаны на исходном уровне, через 3 месяца, 6 месяцев и 1 год после лечения пародонта.

Микробиологическая оценка – анализы ПЦР ДНК будет извлечена и количественно определена на спектрофотометре при 260 нм (Genesys 10UV, Рочестер, штат Нью-Йорк, США) для получения стандартной концентрации 100 нг/мл и сохранена при -20 °C для последующей ПЦР. реакции. Вкратце, образцы будут помещены в раствор лизиса (буфер для экстракции и протеиназа К), а затем очищены с использованием хлороформа: изоамилового спирта с последующим осаждением ДНК изопропанолом и 70% этанолом. ДНК ресуспендируют в буфере TE (10 мМ трис-HCl, 0,1 мМ ЭДТА, pH 7,5, с 10 мкг/мл РНКазы). Молекулярная идентификация микробов будет проводиться методом ПЦР со специфическими праймерами для Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis и Candida dublinienses. ПЦР-амплификация будет проводиться на системе GeneAmp PCR 2400 (Perkin-Elmer - Applied Biosystems) для TGradient 96 (Biometra, Германия) в температурных условиях, специфичных для каждой пары праймеров. Продукты ПЦР будут разделены электрофорезом в 2% агарозных гелях и подвижном буфере Трис-борат-ЭДТА (рН 8,0). Лестница молекулярной массы (лестница ДНК 100 п.н., Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) будет включена для запуска в агарозном геле. ДНК окрашивают 0,1 мкл Sybr Safe/мл (Invitrogen, Калифорния, США) и визуализируют под УФ-освещением (Pharmacia LKB-MacroVue, Сан-Габриэль, Калифорния, США). Будут сделаны фотографии изображений (Image Mater - LISCAP, VDS, Pharmacia Biotech Piscataway, NJ, USA) и проанализированы.