미생물 다양성과 구성 및 폴리페놀 생체이용률

연구자들은 정기적으로 배변을 하고(주당 5회 이상) 식물성 식품이 없는 식단을 기꺼이 섭취하는 성인 10명을 대상으로 무작위, 통제된 수유, 교차 시험을 실시할 것을 제안합니다. 시험에는 크로스오버 사이에 2주 휴약 기간이 있는 2개의 5-d 개입 단계가 포함됩니다. 모든 식사는 개입 단계 동안 피험자에게 제공됩니다. 대상자는 30g 일치 위약 또는 FWCP를 포함하는 Con 또는 FWCP 다이어트를 받도록 무작위로 지정됩니다. 투여량은 미국에서 각각 157mg 및 95mg/d의 평균 플라보노이드 및 PAC 섭취량과 비교할 수 있는 충분한 양의 플라보노이드 및 PAC를 제공하기 위해 선택됩니다. 식물성 식품이 없는 식단은 동물성 성분만을 포함하도록 공식화됩니다. 모든 식사는 Helen Rasmussen, PhD, RD가 설계하고 감독하며 Metabolic Research Unit의 주방에서 준비됩니다. 집이나 직장에서 먹을 수 있도록 포장된 냉동 식사가 피험자에게 제공됩니다. 커피, 차 및 기타 식물성 음료는 개입 단계에서 허용되지 않습니다.

모든 피험자는 연구에 등록하기 전에 정보에 입각한 동의를 제공해야 합니다. 다음과 같이 제외 기준에 따라 연구 적격성에 대해 개인을 선별할 것입니다: 1) 연구 3개월 전에 항생제 약물 또는 분변 미생물에 영향을 미치는 것으로 알려진 약물을 복용하지 않았습니다. 2) 암, 심혈관 질환, 위장관 질환과 같은 의사 진단 질병에 대한 적극적인 치료; 3) 식이 보조제의 정기적인 사용; 4) 등록 2개월 전 또는 연구 중에 예정된 대장내시경 검사; 5) 연구 의사의 재량에 따라 표준 혈액 생화학 값이 매우 비정상적임; 및 6) 주당 14회 이상의 알코올 섭취. 다른 모든 적격성 기준을 충족하고 정상 범위 내의 혈액 생화학 값을 가진 피험자는 연구에 참여하도록 요청받을 것입니다.

시험 기간 동안 적격 피험자는 5-7주 동안 1회의 스크리닝 방문과 9회의 연구 방문에 참석해야 합니다. 방문 2 및 6 종료 시, 피험자는 무작위로 할당된 냉동 식사를 받고 5일 동안 연구 식사를 섭취하기 시작합니다. 피험자는 개입 후 대변 샘플이 수집될 때까지 연구 식사 ≥5 da를 소비할 수 있습니다. 전체 대변 샘플은 밀봉된 백에 넣은 다음 얼음 팩이 있는 쿨러에 넣고 24시간 이내에 MRU로 운반합니다. 아침 반점 소변과 30mL의 공복 혈액 및 기타 모든 임상 데이터는 각 개입 단계 전후에 수집됩니다. 수집된 모든 샘플은 사용할 때까지 -80도에서 보관됩니다.

FWCP가 무식물성 식이로 인한 담즙 내성 박테리아의 증가와 Enterococcus, Bifidobacterium, Eggerthella lenta 및 Blautia coccoides-Eubacterium rectale의 증가에 미치는 영향을 기반으로 인간 실험의 샘플 크기를 추정했습니다. 검정력 계산을 위해 FWCP가 담즙 내성 박테리아에 미치는 영향을 설명하는 문헌 데이터가 없기 때문에 연구자들은 제안된 교차 제어 급식 실험에서 우리의 가설을 테스트하기 위해 10명의 피험자를 고용할 것입니다.

대변 ​​DNA는 QIAamp 대변 DNA 미니 키트(Qiagen)를 사용한 후 효소 분해 및 비드 박동 단계를 통해 추출됩니다. 16S rRNA 유전자 앰플리콘은 V4 가변 영역을 대상으로 하는 바코드 프라이머 세트와 함께 PCR을 사용하여 추출된 DNA에서 생성됩니다. Amplicon은 Anne Kane 박사가 감독하는 Tufts University Core Facility의 Illumina ® MiSeq Sequencer에서 시퀀싱됩니다. Microbiota 분석은 Qiime v 1.7을 사용하여 수행됩니다. 운영 분류 단위는 UClust를 사용하여 생성됩니다. 알파 및 베타 다양성 매개변수는 Qiime을 사용하여 계산됩니다. 요중 플라보노이드 및 페놀산은 일상적인 HPLC-전기화학적 검출 방법으로 결정됩니다. 소변 내 안토시아닌과 그 글루쿠로니데이트 대사산물은 연구자가 일상적으로 사용하는 LC-MS/MS 분석으로 정량화됩니다. 분변 단쇄 지방산은 우리 실험실에서 확립된 GC-MS 방법을 사용하여 결정됩니다. 대변의 배설물의 pH 값은 원심분리 후 pH 미터를 사용하여 결정됩니다. 대변의 개별 담즙산은 LC-QTOF-MS 방법을 사용하여 결정됩니다. 대변의 TMA는 분광광도계 분석을 사용하여 결정됩니다.