微生物群多样性和组成以及多酚生物利用度

研究人员建议对 10 名定期排便（≥ 5 次/周）并且愿意食用不含植物性食物的饮食的成年人进行随机、对照喂养、交叉试验。 该试验将包括两个 5 天的干预阶段，交叉之间有 2 周的清除期。 在干预阶段，将向受试者提供所有膳食。 受试者将被随机分配接受含有 30 克匹配安慰剂或 FWCP 的 Con 或 FWCP 饮食。 选择剂量是为了提供足量的类黄酮和 PAC，这与美国分别为 157 mg 和 95 mg/d 的类黄酮和 PAC 平均摄入量相当。 不含植物性食物的饮食将配制为仅包含动物性成分。 所有膳食都将由 Helen Rasmussen 博士、研发人员设计和监督，并在代谢研究室的厨房准备。 将向受试者提供包装好的冷冻食品，供他们在家或工作时食用。 在干预阶段不允许喝咖啡、茶和其他植物性饮料。

在参加研究之前，所有受试者都需要提供知情同意书。 将根据排除标准筛选符合研究条件的个体，具体如下：1) 研究前 3 个月未服用抗生素药物或已知会影响粪便微生物群的药物； 2）积极治疗医生诊断的疾病，如癌症、心血管疾病、胃肠道疾病； 3) 定期使用任何膳食补充剂； 4) 入组前 2 个月或研究期间安排的结肠镜检查； 5) 根据研究医师的判断，标准血液生化指标严重异常；和 6) 使用 ≥ 14/wk 份量的酒精。 符合所有其他资格标准且血液生化值在正常范围内的受试者将被要求参加该研究。

在试验期间，符合条件的受试者将需要在 5-7 周内参加 1 次筛选访视和 9 次研究访视。 在访问 2 和 6 结束时，受试者将收到随机分配的冷冻餐并开始食用研究餐 5 天。 在收集干预后粪便样本之前，受试者可以食用 ≥ 5 天的研究餐。 整个粪便样本将放入密封袋中，然后放入装有冰袋的冷藏箱中，并在 24 小时内运送至 MRU。 将在每个干预阶段前后收集晨尿和 30 mL 空腹血以及所有其他临床数据。 所有收集的样品将储存在-80 摄氏度直至使用。

人体试验的样本量是根据 FWCP 对无植物性食物饮食诱导的耐胆汁细菌增加以及肠球菌、双歧杆菌、迟缓埃格氏菌和 Blautia coccoides-Eubacterium rectale 增加的影响进行估计的。 由于文献中没有数据说明 FWCP 对耐胆汁细菌的影响，因此研究人员将在拟议的交叉控制喂养试验中雇用 10 名受试者来检验我们的假设。

将通过酶消化和珠击步骤提取粪便 DNA，然后使用 QIAamp Stool DNA Mini Kit (Qiagen)。 16S rRNA 基因扩增子将从提取的 DNA 中生成，使用 PCR 和针对 V4 可变区的条形码引物组。 扩增子将在塔夫茨大学核心设施的 Illumina ® MiSeq 测序仪上进行测序，该设施由 Anne Kane 博士指导。 微生物群分析将使用 Qiime v 1.7 进行。 操作分类单元将使用 UClust 生成。 将使用 Qiime 计算 Alpha 和 Beta 多样性参数。 尿液中的类黄酮和酚酸将通过我们常规的 HPLC-电化学检测方法进行测定。 尿液中的花青素及其葡萄糖醛酸代谢物将通过研究人员常规使用的 LC-MS/MS 测定法进行量化。 将使用我们实验室建立的 GC-MS 方法测定粪便短链脂肪酸。 粪便粪水中的pH值将在离心后使用pH计测定。 将使用 LC-QTOF-MS 方法测定粪便中的个别胆汁酸。 粪便中的 TMA 将使用分光光度法测定。