Mikrobiota mangfold og sammensetning og polyfenol biotilgjengelighet

Etterforskere foreslår å gjennomføre en randomisert, kontrollert fôring, crossover-forsøk på 10 voksne som har regelmessig avføring (≥5 ganger/uke) og er villige til å innta en diett fri for plantemat. Forsøket vil inkludere to 5-dagers intervensjonsfaser med en 2-ukers utvaskingsperiode mellom overgangene. Alle måltider vil bli gitt til forsøkspersonene i intervensjonsfasene. Forsøkspersoner vil bli tilfeldig tildelt til å motta enten Con- eller FWCP-diett som inneholder 30 gram matchet placebo eller FWCP. Dosen velges for å gi tilstrekkelige mengder flavonoid og PAC som kan sammenlignes med gjennomsnittlig flavonoid- og PAC-inntak på henholdsvis 157 mg og 95 mg/d i USA. Den plantematfrie dietten vil bli formulert til å inneholde kun animalske ingredienser. Alle måltider vil bli designet og overvåket av Helen Rasmussen, PhD, RD, og ​​tilberedes på kjøkkenet til Metabolic Research Unit. Pakkede frosne måltider vil bli gitt til personer som kan spises hjemme eller på jobb. Kaffe, te og andre plantebaserte drikker vil ikke være tillatt i intervensjonsfasene.

Alle forsøkspersoner vil bli pålagt å gi sitt informerte samtykke før de melder seg på studien. Enkeltpersoner vil bli screenet for studiekvalifisering i henhold til eksklusjonskriteriene, som følger: 1) ingen antibiotikamedisiner eller legemidler som er kjent for å påvirke fekal mikrobiota ble tatt 3 måneder før studien; 2) aktiv behandling for legediagnostiserte sykdommer, som kreft, hjerte- og karsykdommer, gastrointestinale sykdommer; 3) regelmessig bruk av kosttilskudd; 4) koloskopi 2 mnd før påmelding eller planlagt under studien; 5) verdier av standard blodbiokjemi er kritisk unormale basert på studielegens skjønn; og 6) bruk av ≥14/uke servering av alkohol. Forsøkspersoner som oppfyller alle andre kvalifikasjonskriterier og har verdier for blodbiokjemi innenfor normale områder, vil bli bedt om å delta i studien.

Under forsøket vil kvalifiserte forsøkspersoner bli pålagt å delta på 1 screeningbesøk og 9 studiebesøk over 5-7 uker. På slutten av besøk 2 og 6 vil forsøkspersonene motta de tilfeldig tildelte frosne måltidene og begynne å innta studiemåltidene i 5 dager. Forsøkspersonene kan innta studiemåltidene ≥5 da til avføringsprøven etter intervensjon er samlet inn. Hele avføringsprøven legges i en forseglet pose og deretter i en kjøler med isposer og transporteres til MRU innen 24 timer. Morgenpletturin og 30 ml fastende blod samt alle andre kliniske data vil bli samlet inn før og etter hver intervensjonsfase. Alle innsamlede prøver vil bli lagret ved -80 grader C frem til bruk.

Prøvestørrelsen til den menneskelige studien ble estimert basert på effekten av FWCP på den plantematfrie dietten indusert økning i galletolerante bakterier og på økningen i Enterococcus, Bifidobacterium, Eggerthella lenta og Blautia coccoides-Eubacterium rectale. Siden det ikke finnes data i litteraturen som illustrerer effekten av FWCP på galletolerante bakterier for kraftberegning, vil etterforskere bruke 10 forsøkspersoner i den foreslåtte crossover-kontrollerte fôringsprøven for å teste hypotesen vår.

Fekalt DNA vil bli ekstrahert ved enzymatisk fordøyelse og perleslagtrinn etterfulgt av bruk av QIAamp Stool DNA Mini Kit (Qiagen). 16S rRNA-genamplikoner vil bli generert fra det ekstraherte DNAet ved bruk av PCR med et strekkodet primersett rettet mot den variable V4-regionen. Amplikoner vil bli sekvensert på en Illumina ® MiSeq Sequencer ved Tufts University Core Facility som er regissert av Dr. Anne Kane. Mikrobiotaanalyse vil bli utført med Qiime v 1.7. Operasjonelle taksonomiske enheter vil bli generert ved hjelp av UClust. Alfa- og beta-diversitetsparametere vil bli beregnet ved hjelp av Qiime. Urinflavonoider og fenolsyrer vil bli bestemt ved vår rutinemessige HPLC-elektrokjemiske deteksjonsmetode. Antocyaniner og deres glukuronidatmetabolitter i urin vil bli kvantifisert av en LC-MS/MS-analyse som etterforskere bruker rutinemessig. Fekale kortkjedede fettsyrer vil bli bestemt ved hjelp av en GC-MS metode som er etablert i vårt laboratorium. pH-verdien i fekalvannet til avføringen vil bli bestemt ved hjelp av et pH-meter etter sentrifugering. Individuelle gallesyrer i feces vil bli bestemt ved hjelp av en LC-QTOF-MS metode. TMA i feces vil bli bestemt ved hjelp av en spektrofotometrisk analyse.