微生物叢の多様性と組成、およびポリフェノールのバイオアベイラビリティ

研究者らは、定期的な排便（週5回以上）があり、植物性食品を含まない食事を喜んで摂取する成人10人を対象に、無作為化制御給餌クロスオーバー試験を実施することを提案しています. この試験には、クロスオーバー間に 2 週間のウォッシュアウト期間がある 2 つの 5 日間の介入フェーズが含まれます。 介入段階では、すべての食事が被験者に提供されます。 被験者は、30グラムの一致するプラセボまたはFWCPを含むConまたはFWCPダイエットのいずれかを受け取るようにランダムに割り当てられます。 用量は、米国でのフラボノイドと PAC の平均摂取量であるそれぞれ 157 mg と 95 mg/d に匹敵する十分な量のフラボノイドと PAC を提供するために選択されます。 植物性食品を含まない食事は、動物ベースの成分のみを含むように処方されます. すべての食事は、ヘレン・ラスムッセン博士、RD によって設計および監督され、代謝研究ユニットのキッチンで準備されます。 自宅または職場で消費するために、パックされた冷凍食品が被験者に提供されます。 コーヒー、紅茶、およびその他の植物由来の飲料は、介入段階では許可されません。

すべての被験者は、研究に登録する前にインフォームドコンセントを提供する必要があります。 個人は、除外基準に従って研究の適格性についてスクリーニングされます。次のとおりです。 2) 癌、心血管疾患、胃腸疾患など、医師が診断した疾患の積極的な治療。 3) 栄養補助食品の定期的な使用; 4) 登録の2か月前または研究中に計画された大腸内視鏡検査; 5) 標準的な血液生化学の値は、研究担当医の裁量に基づいて決定的に異常です。 6) 週 14 回以上のアルコールの使用。 他のすべての適格基準を満たし、血液生化学の値が正常範囲内にある被験者は、研究への参加を求められます。

試験中、適格な被験者は、5〜7週間にわたって1回のスクリーニング訪問と9回の調査訪問に参加する必要があります。 訪問 2 および 6 の終わりに、被験者はランダムに割り当てられた冷凍食を受け取り、研究食を 5 日間消費し始めます。 被験者は、介入後の糞便サンプルが収集されるまで、5日以上研究食を摂取することができます。 糞便サンプル全体を密閉バッグに入れ、保冷剤を入れたクーラーに入れ、24 時間以内に MRU に輸送します。 朝のスポット尿と 30 mL の空腹時血液、および他のすべての臨床データを、各介入段階の前後に収集します。 収集されたすべてのサンプルは、使用するまで-80℃で保存されます。

ヒト試験のサンプルサイズは、植物性食品を含まない食事による胆汁耐性菌の増加に対する FWCP の効果と、腸球菌、ビフィズス菌、Eggerthella lenta、および Blautia coccoides-Eubacterium rectale の増加に基づいて推定されました。 電力計算のための胆汁耐性菌に対するFWCPの効果を示すデータが文献にないため、研究者は、提案されたクロスオーバー制御摂食試験で10人の被験者を採用して、仮説を検証します。

糞便ＤＮＡは、酵素消化およびビードビーティング工程、続いてＱＩＡａｍｐ Ｓｔｏｏｌ ＤＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）の使用によって抽出される。 16S rRNA 遺伝子アンプリコンは、V4 可変領域をターゲットとするバーコード プライマー セットを使用した PCR を使用して、抽出された DNA から生成されます。 アンプリコンは、Dr. Anne Kane が指揮するタフツ大学コア施設の Illumina ® MiSeq Sequencer でシーケンスされます。 微生物叢分析は、Qiime v 1.7 を使用して実行されます。 操作上の分類単位は、UClust を使用して生成されます。 アルファおよびベータ多様性パラメータは、Qiime を使用して計算されます。 尿中のフラボノイドとフェノール酸は、当社の通常の HPLC 電気化学検出法によって測定されます。 尿中のアントシアニンとそのグルクロニデート代謝物は、研究者が日常的に使用する LC-MS/MS アッセイによって定量化されます。 当研究室で確立したGC-MS法を用いて糞便中の短鎖脂肪酸を測定します。 糞便の糞便水中のpH値は、遠心分離後にpHメーターを使用して決定されます。 糞便中の個々の胆汁酸は、LC-QTOF-MS メソッドを使用して決定されます。 糞便中のTMAは、分光光度アッセイを使用して決定されます。