감염 및 원인 불명의 불임
원인 불명의 원발성 불임이 있는 여성의 예후 표지자
- 배경: 여성의 경우 설명되지 않는 불임은 자궁내막의 다양한 세포 및 분자 결함, 불리한 면역 반응 및 면역학적 요인과 관련이 있습니다. 자연 살해(NK) 세포는 탈락막에서 가장 풍부한 백혈구 집단을 구성하기 때문에 포함됩니다. 탈락막 NK 세포가 광범위하게 조사되었지만 자궁내막 eNK 세포에 대한 연구는 여전히 포괄적인 연구가 부족합니다. eNK 빈도의 감소는 불임 상태, 특히 수반되는 헤르페스바이러스 바이러스혈증의 존재와 관련이 있습니다. 헤르페스 바이러스는 면역 억제적이고 올바른 태반 형성에 중요한 면역 탈출 HLA-G 및 HLA-E 분자로 사용하기 때문에 불임 보조 인자를 나타낼 수 있습니다.
- 목표: 생식 의학에서 정확한 진단이 없으면 치료 실패로 이어지기 때문에 이 제안은 원인 불명의 여성 불임에 대한 진단 인자로서 eNK 세포 특성 규명에 중점을 둡니다. 헤르페스 바이러스 감염과 HLA-G 및 HLA-E 발현을 고려하여 보조 요인도 평가할 것입니다.
- 방법: 말초 혈액 및 자궁내막 NK 세포는 면역 표현형이 될 것이고 세포 수 및 활성화 상태(CD107a, IL-6, IL-10, IL-17)는 불임 상태와 상관관계가 있을 것입니다. 헤르페스 바이러스의 의미는 HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV 및 HHV-8 특정 프라이머 및 PCR 기술에 의한 말초 혈액 및 자궁 내막 홍조 샘플 분석의 DNA에 의해 평가됩니다. HLA-G 및 HLA-E 발현은 말초 혈액 및 자궁내막 환경에서 유세포 분석 및 ELISA 테스트에 의해 분석되고 이들 수용체(KIRs, LILRB1/2, NKG2A)의 NK 세포 발현과 상관 관계가 있습니다.
- 예상 결과: 우리의 예비 결과를 기반으로 헤르페스 바이러스 감염과 HLA-G 및 HLA-E 발현을 보조 인자로 하여 설명할 수 없는 원발성 불임의 예후 마커로 NK 세포를 식별할 것으로 기대합니다. 이러한 데이터는 불임 여성의 관리에 중요합니다.
연구 개요
상태
정황
상세 설명
주요 목표 이 프로젝트의 주요 과제는 설명할 수 없는 원발성 불임에 대한 예후 지표로서 NK 세포의 잠재적인 역할을 정의하는 것입니다. 이 목표를 달성하기 위해 우리는 설명할 수 없는 불임 여성 100명을 대상으로 전향적 연구를 수행할 것입니다. 말초 혈액 및 자궁 내막 NK 세포는 면역 표현형이 결정되고 활성화 상태가 분석됩니다. 한편, 헤르페스 바이러스 감염의 존재는 말초 혈액에서 평가되고 NK 분석 결과와 상관됩니다. 이러한 데이터는 NK 세포 상태에 대한 보조 인자로서 헤르페스바이러스 감염의 의미를 평가하여 불임 여성 상태에서 NK 세포의 역할을 명확히 할 것입니다. 이 데이터는 설명할 수 없는 불임에 대한 예측 마커로 NK 세포 분석을 사용하는 원리의 증거를 제공할 것입니다.
2차 목적 2차 목적은 불임의 NK 세포 상태에 기초하여 메커니즘을 평가하는 것입니다. HLA-G 및 HLA-E 발현은 헤르페스바이러스 감염에 의해 변형되기 때문에(9), 면역 탈출 메커니즘으로서 이러한 항원은 올바른 배아 이식을 담당합니다(14). 자궁내막 환경. 한편, HLA-G 및 HLA-E 유전적 다형성을 분석할 것이다. 이러한 결과는 pNK 및 eNK 세포에서 헤르페스바이러스 감염, KIR, LILRB 및 NKG2A 수용체 발현의 존재와 상관관계가 있을 것입니다. 이러한 데이터는 불임 여성의 NK 세포 활성화 및 헤르페스바이러스 감염 조절에 있어 HLA-G 및 HLA-E 발현 및 유전적 배경의 의미를 명확히 할 것입니다.
이러한 목표의 달성은 6개의 작업 패키지/목표(WP)로 달성됩니다.
- 불임 여성 특성화(WP1) (1-20개월) 원인 불명의 불임 여성 100명과 대조군 여성 30명을 모집합니다. 이 여성들을 임상적으로 평가하여 임상 데이터베이스를 구축할 것입니다. 각 여성으로부터 말초 혈액 샘플, 자궁 내막 생검 및 자궁 홍조를 얻습니다.
- NK 세포 면역-표현형(WP2)(1-20개월) 말초 혈액 및 자궁내막의 NK 세포는 아형 백분율(CD56, CD16, CD9, CD49a) 및 KIR, LILRB-1 및 -2 및 억제 신호를 생성하는 HLA-G 및 HLA-E 분자와 상호작용하는 것으로 알려진 CD94/NKG2A 수용체.
- Th1, Th2, Th17 및 LIF(WP3). (1-20개월) Th1, Th2, Th17 및 LIF 수준은 활성화 상태를 평가하기 위해 혈장 및 자궁 홍조 샘플에서 분석됩니다. 결과는 NK 세포 수와 상관 관계가 있습니다.
- 헤르페스 바이러스 감염(WP4)(12-24개월) 헤르페스 바이러스 DNA(HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV 및 HHV-8) 존재를 말초 혈액 및 자궁 홍조에서 분석합니다.
- HLA-G(WP5)(12-24mth) HLA-G 분자는 막(HLA-G1) 및 가용성(HLA-G5, mRNA 대체 스플라이싱에서, sHLA-G1, 막 흘리기에서) 분자로 표현됩니다. 막 및 가용성 HLA-G의 발현은 말초 혈액 및 자궁내막에서 평가될 것이다. HLA-G 발현은 14개 염기쌍(rs66554220)의 삽입/결실 다형성(ins/del)에 의해 제어되며, 여기서 14bp의 결실은 더 높은 수준의 HLA-G를 생성하는 mRNA를 안정화시킵니다(15). 불임 상태에서 HLA-G 발현 수준의 의미를 평가하기 위해 rs66554220 다형성에 대해 여성의 유전자형을 분석합니다.
- HLA-E(WP6)(12-24mth) HLA-E 분자는 막 및 가용성 분자로 모두 표현됩니다. 막 및 가용성 HLA-E의 발현은 말초 혈액 및 자궁내막에서 평가될 것이다. HLA-E의 2개의 비동의 대립유전자, HLA-ER(E*0101) 및 HLA-EG(E*0103)(16)가 확인되었으며, 여기서 EG 단백질의 HLA-E 발현은 ER보다 높았다. 우리는 불임의 의미를 평가하기 위해 HLA-E 다형성에 대한 여성의 유전형을 분석할 것입니다.
연구 유형
등록 (실제)
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
샘플링 방법
연구 인구
설명
스터디 그룹에 대한 포함 기준:
- 21-38세,
- 원발성 불임(생아 출산 없음),
- 규칙적인 월경 주기(24-35일),
- 체질량 지수(BMI) ≤ 25, FSH <10 mUI/mL,
- 월경 주기의 2-3일째 E2 < 50pg/ml. 난관 개통성 평가를 위해 입학 시 모집합니다.
대조군에 대한 포함 기준:
- 21-35세,
- 거의 한 번의 출생,
- 규칙적인 월경 주기(24-35일),
- BMI ≤ 25, FSH <10 mUI/mL,
- 월경 주기의 2-3일에 E2 < 50pg/mL
제외 기준:
- 자궁 내막염,
- 자궁 내막증,
- 난관 인자,
- 배란 기능 장애,
- 해부학 적 자궁 병리.
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
- 관찰 모델: 보병대
- 시간 관점: 유망한
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
개입 / 치료 |
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불임 여성
연구 그룹의 포함 기준은 다음과 같습니다: 21-38세, 원발성 불임(생아 출산 없음), 규칙적인 월경 주기(24-35일), 체질량 지수(BMI) ≤ 25, FSH <10 mUI/mL , 월경 주기의 2-3일째에 E2 < 50pg/ml.
그들은 난관 개통성 평가를 위해 입학 시 모집될 것입니다.
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증식 단계(9-11일) 동안 연구를 수행하기로 선택했으며, 여기서 상주 eNK 세포만 자궁내막에 존재합니다. 샘플은 제안의 OU에서 일상적으로 사용되는 다음 방법으로 분석됩니다. - pNK 세포 분석: PBMC는 Ficoll 용액으로 정제되고 NK 세포는 항-CD56, CD16, CD9, CD49a, KIRs, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a eNK 세포 분석을 통해 유세포 분석기(FacsVantage, BD)로 분석됩니다. eNK 세포는 증식기 동안 자궁내막 생검에서 얻어지며, 초음파 스캔으로 결정되고 NK 세포 아형 및 KIR, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a 발현에 대해 유세포 분석으로 분석됩니다.
헤르페스 바이러스 검출: DNA는 HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV 및 HHV-8에 대한 특정 프라이머로 PCR 및 중첩 PCR로 분석됩니다.
sHLA-G 분석: 혈장 및 자궁내막 홍조에서 sHLA-G 정량화는 항-HLA-G(G233) 및 항-베타2-마이크로글로불린 HRP-결합 moAbs(Exbio)를 사용하여 ELISA로 수행됩니다.
게놈 DNA는 RealTime PCR에 의해 유전자형이 결정됩니다.
sHLA-E 분석: 항-HLA-E(3D12, eBioscience) 및 항-베타2-마이크로글로불린 HRP-결합 moAb(Exbio)를 사용하여 ELISA로 혈장 및 자궁내막 홍조에서 sHLA-E 정량화를 수행합니다.
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가임 여성
대조군에 대한 포함 기준은 다음과 같습니다: 21-35세, 거의 한 번 정상 출산, 규칙적인 월경 주기(24-35일), BMI ≤ 25, FSH < 10 mUI/mL, E2 < 50 pg/mL 월경주기의 2-3.
자궁내막염, 자궁내막증, 난관 인자, 배란 기능 장애, 해부학적 자궁 병리가 있는 여성은 제외됩니다.
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증식 단계(9-11일) 동안 연구를 수행하기로 선택했으며, 여기서 상주 eNK 세포만 자궁내막에 존재합니다. 샘플은 제안의 OU에서 일상적으로 사용되는 다음 방법으로 분석됩니다. - pNK 세포 분석: PBMC는 Ficoll 용액으로 정제되고 NK 세포는 항-CD56, CD16, CD9, CD49a, KIRs, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a eNK 세포 분석을 통해 유세포 분석기(FacsVantage, BD)로 분석됩니다. eNK 세포는 증식기 동안 자궁내막 생검에서 얻어지며, 초음파 스캔으로 결정되고 NK 세포 아형 및 KIR, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a 발현에 대해 유세포 분석으로 분석됩니다.
헤르페스 바이러스 검출: DNA는 HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV 및 HHV-8에 대한 특정 프라이머로 PCR 및 중첩 PCR로 분석됩니다.
sHLA-G 분석: 혈장 및 자궁내막 홍조에서 sHLA-G 정량화는 항-HLA-G(G233) 및 항-베타2-마이크로글로불린 HRP-결합 moAbs(Exbio)를 사용하여 ELISA로 수행됩니다.
게놈 DNA는 RealTime PCR에 의해 유전자형이 결정됩니다.
sHLA-E 분석: 항-HLA-E(3D12, eBioscience) 및 항-베타2-마이크로글로불린 HRP-결합 moAb(Exbio)를 사용하여 ELISA로 혈장 및 자궁내막 홍조에서 sHLA-E 정량화를 수행합니다.
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연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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여성 특발성 불임에서 NK 세포의 예후적 가치
기간: 20개월
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(e)NK CD56brightCD16-의 백분율
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20개월
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헤르페스바이러스 검출
기간: 16개월
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자궁 내막 세포에서 HHVs 감염의 존재
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16개월
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
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SHLA-G 및 sHLA-E 세포 pNK e eNK의 수준
기간: 16개월
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자궁 홍조 샘플의 sHLA-G 및 sHLA-E 수준
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16개월
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HLA-G 및 HLA-E 유전자 다형성
기간: 10개월
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HLA-G 및 HLA-E 유전자 다형성의 빈도
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10개월
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자궁내막 홍조 샘플의 사이토카인 수치
기간: 10개월
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Th1 및 Th2 사이토카인 수준
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10개월
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공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Giuseppe Lo Monte, M.D., Università di Ferarra
간행물 및 유용한 링크
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