Infezioni e infertilità inspiegabile

Obiettivo primario La sfida principale di questo progetto è definire il potenziale ruolo delle cellule NK come marker prognostico per l'infertilità primaria non spiegata. Per raggiungere questo obiettivo eseguiremo uno studio prospettico su una coorte di 100 donne infertili inspiegabili. Le cellule NK del sangue periferico e dell'endometrio saranno immunofenotipizzate e sarà analizzato il loro stato di attivazione. Nel frattempo, la presenza di infezione da herpesvirus sarà valutata nel sangue periferico e correlata con i risultati dell'analisi NK. Questi dati chiariranno il ruolo delle cellule NK nelle condizioni femminili infertili, valutando l'implicazione dell'infezione da herpesvirus come cofattore per lo stato delle cellule NK. Questi dati forniranno una prova di principio dell'uso dell'analisi delle cellule NK come marcatore predittivo per l'infertilità inspiegabile.

Obiettivo secondario L'obiettivo secondario è valutare i meccanismi alla base dello stato delle cellule NK nell'infertilità. Poiché l'espressione di HLA-G e HLA-E è modificata dall'infezione da herpesvirus (9), come meccanismo di fuga immunitaria, e questi antigeni sono responsabili di un corretto impianto dell'embrione (14), analizzeremo i livelli di queste molecole nel sangue periferico e ambiente endometriale. Nel frattempo, verranno analizzati i polimorfismi genetici HLA-G e HLA-E. Questi risultati saranno correlati con la presenza di infezione da herpesvirus, espressione dei recettori KIR, LILRB e NKG2A sulle cellule pNK ed eNK. Questi dati chiariranno l'implicazione dell'espressione di HLA-G e HLA-E e il background genetico nel controllo dell'attivazione delle cellule NK e dell'infezione da herpesvirus nelle donne infertili.

Il raggiungimento di questi obiettivi sarà ottenuto con 6 pacchetti di lavoro/obiettivi (WP)

1. Caratterizzazione delle donne infertili (WP1) (1-20 mesi) Recluteremo 100 donne infertili non spiegate e 30 donne di controllo. Queste donne saranno valutate clinicamente, stabilendo un database clinico. Da ogni donna otterremo campioni di sangue periferico, biopsie dell'endometrio e lavaggio uterino.
2. Fenotipo immunitario delle cellule NK (WP2) (1-20mth) Le cellule NK del sangue periferico e dell'endometrio saranno analizzate per le percentuali dei sottotipi (CD56, CD16, CD9, CD49a) e per l'espressione di KIR, LILRB-1 e -2 e Recettori CD94/NKG2A, noti per interagire con le molecole HLA-G e HLA-E producendo segnali inibitori.
3. Th1, Th2, Th17 e LIF (WP3). (1-20 mth) I livelli di Th1, Th2, Th17 e LIF saranno analizzati in campioni di plasma e di lavaggio uterino, per valutare lo stato di attivazione. I risultati saranno correlati con la conta delle cellule NK.
4. Infezione da Herpesvirus (WP4) (12-24mth) La presenza del DNA di Herpesvirus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV e HHV-8) sarà analizzata nel sangue periferico e nel lavaggio uterino.
5. HLA-G (WP5) (12-24mth) Le molecole HLA-G sono espresse sia come molecole di membrana (HLA-G1) che solubili (HLA-G5, dallo splicing alternativo dell'mRNA; sHLA-G1, dallo shedding della membrana). L'espressione della membrana e dell'HLA-G solubile sarà valutata nel sangue periferico e nell'endometrio. L'espressione di HLA-G è controllata da un polimorfismo di inserzione/delezione (ins/del) di 14 paia di basi (rs66554220), dove la delezione di 14 bp stabilizza l'mRNA producendo livelli più elevati di HLA-G (15). Genetizzeremo le donne per il polimorfismo rs66554220, per valutare l'implicazione nei livelli di espressione di HLA-G in condizioni infertili.
6. HLA-E (WP6) (12-24mth) Le molecole HLA-E sono espresse sia come molecole di membrana che come molecole solubili. L'espressione della membrana e dell'HLA-E solubile sarà valutata nel sangue periferico e nell'endometrio. Sono stati identificati due alleli non sinonimi di HLA-E, HLA-ER (E*0101) e HLA-EG (E*0103) (16), in cui l'espressione di HLA-E della proteina EG era superiore a ER. Genetizzeremo le donne per i polimorfismi HLA-E, per valutare l'implicazione nell'infertilità.