Infections et infertilité inexpliquée

Objectif principal Le principal défi de ce projet est de définir le rôle potentiel des cellules NK en tant que marqueur pronostique de l'infertilité primaire inexpliquée. Pour atteindre cet objectif nous réaliserons une étude prospective sur une cohorte de 100 femmes infertiles inexpliquées. Les cellules NK du sang périphérique et de l'endomètre feront l'objet d'un phénotypage immunitaire et leur statut d'activation sera analysé. Pendant ce temps, la présence d'une infection par le virus de l'herpès sera évaluée dans le sang périphérique et corrélée avec les résultats de l'analyse NK. Ces données permettront de clarifier le rôle des cellules NK dans les conditions féminines infertiles, en évaluant l'implication de l'infection par l'herpèsvirus en tant que cofacteur du statut des cellules NK. Ces données fourniront une preuve de principe de l'utilisation de l'analyse des cellules NK comme marqueur prédictif de l'infertilité inexpliquée.

Objectif secondaire L'objectif secondaire est d'évaluer les mécanismes à la base du statut des cellules NK dans l'infertilité. Étant donné que l'expression de HLA-G et HLA-E est modifiée par l'infection à herpèsvirus (9), en tant que mécanisme d'échappement immunitaire, et que ces antigènes sont responsables d'une implantation correcte de l'embryon (14), nous analyserons les niveaux de ces molécules dans le sang périphérique et milieu endométrial. Parallèlement, les polymorphismes génétiques HLA-G et HLA-E seront analysés. Ces résultats seront corrélés avec la présence d'une infection par le virus de l'herpès, l'expression des récepteurs KIR, LILRB et NKG2A sur les cellules pNK et eNK. Ces données clarifieront l'implication de l'expression et du patrimoine génétique de HLA-G et HLA-E dans le contrôle de l'activation des cellules NK et de l'infection par le virus de l'herpès chez les femmes infertiles.

L'atteinte de ces objectifs sera obtenue avec 6 workpackages/buts (WP)

1. Caractérisation des femmes infertiles (WP1) (1-20 mois) Nous recruterons 100 femmes infertiles inexpliquées et 30 femmes témoins. Ces femmes seront évaluées cliniquement, établissant une base de données cliniques. De chaque femme, nous obtiendrons des échantillons de sang périphérique, des biopsies de l'endomètre et des rinçages utérins.
2. Immuno-phénotype des cellules NK (WP2) (1-20 mois) Les cellules NK du sang périphérique et de l'endomètre seront analysées pour les pourcentages de sous-types (CD56, CD16, CD9, CD49a) et pour l'expression de KIR, LILRB-1 et -2 et Les récepteurs CD94/NKG2A, qui sont connus pour interagir avec les molécules HLA-G et HLA-E produisant des signaux inhibiteurs.
3. Th1, Th2, Th17 et LIF (WP3). (1-20 mois) Les niveaux de Th1, Th2, Th17 et LIF seront analysés dans des échantillons de plasma et de rinçage utérin, afin d'évaluer l'état d'activation. Les résultats seront corrélés avec le nombre de cellules NK.
4. Infection à herpèsvirus (WP4) (12-24 mois) La présence d'ADN d'herpèsvirus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV et HHV-8) sera analysée dans le sang périphérique et les bouffées vasomotrices.
5. HLA-G (WP5) (12-24 mois) Les molécules HLA-G sont exprimées à la fois sous forme de molécules membranaires (HLA-G1) et solubles (HLA-G5, provenant de l'épissage alternatif de l'ARNm ; sHLA-G1, provenant de l'excrétion membranaire). L'expression de l'HLA-G membranaire et soluble sera évaluée dans le sang périphérique et l'endomètre. L'expression de HLA-G est contrôlée par un polymorphisme d'insertion/délétion (ins/del) de 14 paires de bases (rs66554220), où la délétion de 14bp stabilise l'ARNm produisant des niveaux plus élevés de HLA-G (15). Nous allons génotyper les femmes pour le polymorphisme rs66554220, afin d'évaluer l'implication dans les niveaux d'expression HLA-G en condition d'infertilité.
6. HLA-E (WP6) (12-24 mois) Les molécules HLA-E sont exprimées à la fois sous forme de molécules membranaires et solubles. L'expression de l'HLA-E membranaire et soluble sera évaluée dans le sang périphérique et l'endomètre. Deux allèles non synonymes de HLA-E ont été identifiés, HLA-ER (E*0101) et HLA-EG (E*0103) (16), où l'expression HLA-E de la protéine EG était supérieure à ER. Nous allons génotyper les femmes pour les polymorphismes HLA-E, afin d'évaluer l'implication dans l'infertilité.